一种表达大口黑鲈弹状病毒G蛋白的重组乳酸乳球菌制造技术

本发明专利技术公开了一种表达大口黑鲈弹状病毒G蛋白的重组乳酸乳球菌，所述的重组乳酸乳球菌为转化了pMG36e‑His‑G蛋白重组质粒的乳酸乳球菌，本发明专利技术中的表达大口黑鲈弹状病毒G蛋白的重组乳酸乳球菌的制备方法具体如下：首先通过全基因合成His‑G蛋白序列，然后连接至pMG36e质粒，构建pMG36e‑His‑G蛋白重组质粒，然后通过电转化至乳酸乳球菌，经红霉素抗性筛选和菌落PCR鉴定筛选获得阳性克隆的重组乳酸乳球菌，最后利用抗His抗体，采用western blotting分析重组乳酸乳球菌表达大口黑鲈弹状病毒G蛋白的情况。本发明专利技术成功构建表达大口黑鲈弹状病毒G蛋白的乳酸乳球菌，因乳酸乳球菌的保护，可以递送大口黑鲈弹状病毒G蛋白进入鱼体肠道，为大口黑鲈弹状病毒口服疫苗的研制提供重要基础。

【技术实现步骤摘要】
一种表达大口黑鲈弹状病毒G蛋白的重组乳酸乳球菌
本专利技术涉及水产养殖领域，尤其涉及一种表达大口黑鲈弹状病毒G蛋白的重组乳酸乳球菌。技术背景大口黑鲈是我国重要的经济养殖鱼类，具有生长快、适应性强、无肌间刺、肉质鲜美等优点，深受消费者的喜爱。近年来，我国的大口黑鲈养殖业发展迅速，随着养殖不断向大规模、集约化方向发展，导致养殖环境和养殖水域的水质日趋恶化，导致疾病频发，尤其是肠炎病、烂鳃病、弹状病毒病等疾病的爆发，使得大口黑鲈养殖业损失惨重。大口黑鲈弹状病毒主要感染大口黑鲈稚鱼，死亡率极高。目前水产养殖疾病的防控主要依赖于抗生素，但抗生素防治对病毒病基本没有效果，且抗生素滥用已经导致细菌耐药性、药物残留和环境中扩散等问题。应用疫苗防控不仅可有效控制病毒性疾病发生，而且避免了药物长期使用导致的病原微生物耐药性问题。此外，针对大口黑鲈弹状病毒的感染特征，疫苗注射接种操作难度较大，因此口服接种和浸泡接种是较为理想的方式。但是，目前对于大口黑鲈弹状病毒，尚无相关疫苗研制的报道，严重制约了大口黑鲈弹状病毒病的防治。r>
技术实现思路
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【技术保护点】
1.一种表达大口黑鲈弹状病毒G蛋白的重组乳酸乳球菌，其特征在于，所述的重组乳酸乳球菌为转化了pMG36e-His-G蛋白重组质粒的乳酸乳球菌。/n

【技术特征摘要】
1.一种表达大口黑鲈弹状病毒G蛋白的重组乳酸乳球菌，其特征在于，所述的重组乳酸乳球菌为转化了pMG36e-His-G蛋白重组质粒的乳酸乳球菌。


2.根据权利要求1所述的一种表达大口黑鲈弹状病毒G蛋白的重组乳酸乳球菌，其特征在于，所述的大口黑鲈弹状病毒G蛋白序列来源于Genebank，序列号为MK397811.2。


3.根据权利要求1所述的一种表达大口黑鲈弹状病毒G蛋白的重组乳酸乳球菌的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：重组质粒的构建；
S2：重组乳酸乳球菌的构建；
S3：重组乳酸乳球菌表达G蛋白的验证。


4.根据权利要求3所述的一种表达大口黑鲈弹状病毒G蛋白的重组乳酸乳球菌的制备方法，其特征在于，所述步骤S1具体包括如下步骤：
从Genebank中获得大口黑鲈弹状病毒G蛋白的序列信息，然后通过全基因合成大口黑鲈弹状病毒G蛋白序列，并添加His标签和SacI、HindIII酶切位点，然后连接至pMG36e重组质粒，然后转入DH5α感受态细胞，送上海生工测序验证pMG36e-His-G蛋白重组质粒是否构建成功。


5.根据权利要求3所述的一种表达大口黑鲈弹状病毒G蛋白的重组乳酸乳球菌的制备方法，其特征在于，所述步骤S2具体包括如下步骤：
采用质粒大提试剂盒提取重组质粒，然后通过电转化的方式将pMG36e-His-G蛋白表达质粒转化至乳酸乳球菌，电转化的条件为2.0kV，电阻为400Ω，pMG36e质粒替代pMG36e-His-G蛋白表达质粒作为阴性对照；然后将乳酸乳球菌涂布于含有红霉素的M17培养基上，进行抗性筛选；
经抗性筛选后，通过试剂盒提取乳酸乳球菌DNA，然后通过PCR检...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁翔雨，张雅琪，辛怡娆，杨顺，费辉，
申请(专利权)人：浙江理工大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33