提高解淀粉芽孢杆菌芽孢萌发率及对蛋白培养基适应性的方法技术

本发明专利技术公开了提高解淀粉芽孢杆菌芽孢萌发率及对蛋白培养基适应性的方法，涉及发酵工程领域。克服该类微生物在蛋白质培养基上适应性差的难题。本发明专利技术包括提高芽孢萌发率、菌体生物量和蛋白酶活性等方面。(1)用低强度超声对解淀粉芽孢杆菌芽孢悬液进行短时间处理，所得的芽孢萌发率最高可以提高3倍以上。(2)在培养期间将发酵液进行一个低强度短时间超声处理和热激作用(40～45℃)，可以显著提高生物量和蛋白酶活等指标。该方法不仅克服了解淀粉芽孢杆菌由于芽孢体萌发率低而导致生长延滞期延长的缺点，而且有效提高菌株整体发酵性能，从而提高其对蛋白培养基的适应性，操作简便，成本低。

【技术实现步骤摘要】
提高解淀粉芽孢杆菌芽孢萌发率及对蛋白培养基适应性的方法
本专利技术涉及发酵工程领域，更具体地说，本专利技术涉及一种提高解淀粉芽孢杆菌芽孢萌发率及对蛋白质培养基适应性的方法。
技术介绍
芽孢杆菌因具有培养条件简单、生长迅速、产酶能力强等特性而被广泛应用于发酵工业，从而获得工业生产上需要的蛋白酶、淀粉酶、菌多糖等。在营养缺乏、干旱等条件下，芽孢杆菌会以芽孢形式存在，其典型结构由外到内依次为芽孢衣、皮层和核心。芽孢在条件适宜时再重新萌发成营养体，其萌发生长通常是由营养性萌发剂所引发，常见的营养性萌发剂包括氨基酸类、嘌呤衍生物和糖类等单一成分或者多种成分组合。当芽孢暴露于营养性萌发剂中时，萌发剂渗入穿透芽孢衣和皮层，与位于芽孢内膜的萌发受体蛋白结合，细胞开始吸收水分，进而启动芽孢萌发(徐智勇,闫岩,王卫,等.芽孢生成和萌发相关机制[J].中西医结合护理(中英文),2016,2(011):169-172)。但是由于有些营养性萌发剂穿透能力弱，短时间无法有效打破芽孢休眠，造成大部分芽孢并不能在短时间内萌发，而导致生长延滞期延长。解决的方法通本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.提高解淀粉芽孢杆菌芽孢萌发率方法，其特征在于按照如下步骤进行：/n(1)芽孢制备：将活化的解淀粉芽孢杆菌菌液，细菌浓度达到或超过10

【技术特征摘要】
1.提高解淀粉芽孢杆菌芽孢萌发率方法，其特征在于按照如下步骤进行：
(1)芽孢制备：将活化的解淀粉芽孢杆菌菌液，细菌浓度达到或超过108cfu/mL；平铺涂布于营养肉汤固态培养基，在37℃条件下培养10d，再在20℃条件下培养2d；培养结束后用无菌蒸馏水浸没培养基5min，用接种环刮下菌落形成悬浮液；收集悬浮液，在4℃、1000g的条件下离心15min，共计3轮，每轮结束后弃去上清，用无菌蒸馏水重悬浮沉淀，以清洗芽孢表面杂质；最后一次离心后，控制无菌蒸馏水添加量，使芽孢悬液中芽孢浓度达到107～108cfu/mL，于4℃冰箱中保存；
(2)芽孢萌发：将芽孢悬液稀释至106cfu/mL，作为芽孢悬液母液；按照1:99的体积比用无菌蒸馏水稀释芽孢悬液母液，取6L稀释后的芽孢悬液注入超声设备的超声腔内，在超声频率为20～60kHz、功率密度为10～50W/L的条件下处理15～30min，处理时超声腔内芽孢悬液保持37℃；随后将芽孢悬液置于37℃下温育20min，之后转移至70℃水浴锅再进行10min热处理，即可达到提高解淀粉芽孢杆菌芽孢萌发率的目的。


2.根据权利要求1所述的提高解淀粉芽孢杆菌芽孢萌发率方法，其特征在于所述的营养肉汤固态培养基成分为：营养肉汤培养基粉末18g/L，琼脂15g/L，MnCl20.5g/L，pH7.2。


3.提高解淀粉芽孢杆菌对蛋白质培养基适应性的方法，其特征在于按照下述步骤进行：
(1)菌种活化：取-80℃超低温保藏的菌株...

【专利技术属性】
技术研发人员：马海乐，阮思煜，王禹程，李云亮，赵博博，刘晓霜，徐雅宣，
申请(专利权)人：江苏大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32