TCR配体的高通量肽-MHC亲和力筛选方法技术

本发明专利技术涉及一种高通量筛选TCR结合肽配体/MHC分子复合体(包括稳定的肽MHC分子)的方法以及所述方法的各自用途。本发明专利技术进一步涉及包含稳定MHC分子或其肽结合片段或由该稳定MHC分子或其肽结合片段组成的多肽、包含所述多肽的药物组合物、包含所述药物组合物的疫苗以及所述疫苗在制备药物和/或预防癌症中的用途。本发明专利技术进一步涉及编码所述多肽的核酸和包含所述核酸的载体。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】TCR配体的高通量肽-MHC亲和力筛选方法本专利技术涉及一种高通量筛选TCR结合肽配体/MHC分子复合体(包括稳定的肽-MHC分子)的方法以及所述方法的各自用途。本专利技术进一步涉及包含稳定MHC分子或其肽结合片段或由该稳定MHC分子或其肽结合片段组成的多肽、包含所述多肽的药物组合物、包含所述药物组合物的疫苗以及所述疫苗在制备药物和/或预防癌症中的用途。本专利技术进一步涉及编码所述多肽的核酸和包含所述核酸的载体。专利技术背景细胞表面MHC分子上提呈肽在病毒感染或癌症的免疫应答中起基础作用(1)。MHCI类分子为三聚体复合体，其由多态性重链、β-2微球蛋白(β2m)和肽配体组成，通常为8至10个氨基酸长并源自胞质蛋白的降解。T细胞可用其克隆特异性T细胞受体(TCR)识别特异性肽-MHC复合体(pMHC)并启动免疫应答。可溶性pMHC复合体的产生对于科学和临床领域中以pMHC和TCR之间相互作用为主题的许多不同应用很重要。这些复合体于1992年使用蛋白质表达和重折叠技术首次产生，并且从那时起已用于多种应用场合，例如，透过流式细胞术或亲和力测量TCR-pMHC本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种筛选TCR结合肽配体/MHC分子复合体(pMHC)的方法，其包括以下步骤：/na)提供适当稳定的MHC分子，其中所述MHC分子在以下氨基酸之间包含至少一个人工引入的共价桥：/n(i)在MHC I情况下，在所述稳定MHC分子α1结构域的一个氨基酸和α2结构域的一个氨基酸之间；和/或/n(ii)在MHC I情况下，在所述稳定MHC分子α1结构域的两个氨基酸之间；或/n(iii)在MHC II情况下，在所述稳定MHC分子α1结构域或β1结构域的两个氨基酸之间；和/或/n(iv)在MHC II情况下，在所述稳定MHC分子α1结构域的一个氨基酸和β1结构域的一个氨基酸之间；/nb)使所述适当稳定...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180914 DE 102018122546.6;20180914 US 62/731,337;1.一种筛选TCR结合肽配体/MHC分子复合体(pMHC)的方法，其包括以下步骤：
a)提供适当稳定的MHC分子，其中所述MHC分子在以下氨基酸之间包含至少一个人工引入的共价桥：
(i)在MHCI情况下，在所述稳定MHC分子α1结构域的一个氨基酸和α2结构域的一个氨基酸之间；和/或
(ii)在MHCI情况下，在所述稳定MHC分子α1结构域的两个氨基酸之间；或
(iii)在MHCII情况下，在所述稳定MHC分子α1结构域或β1结构域的两个氨基酸之间；和/或
(iv)在MHCII情况下，在所述稳定MHC分子α1结构域的一个氨基酸和β1结构域的一个氨基酸之间；
b)使所述适当稳定的MHC分子与其大量肽配体接触，以形成肽配体/MHC(pMHC)分子复合体，以及
c)筛选所述pMHC分子复合体的TCR结合。


2.根据权利要求1所述的方法，其中所述MHC分子为HLA，或选自二聚体、三聚体和四聚体组成组的HLA、MHCI或MHCII的多聚体。


3.根据权利要求1或2所述的方法，其中氨基酸之间所述至少一个人工引入的共价桥选自重组引入的二硫桥键、引入待交联的非天然氨基酸、引入光交联氨基酸和化学方式引入的交联。


4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中氨基酸之间的所述至少一个人工引入的共价键被引入：
(i)α-螺旋之间，优选透过将MHCI第84位的氨基酸和第139位的氨基酸突变为半胱氨酸；
(ii)MHCIα1结构域的α-螺旋和β折迭片之间，优选透过将MHCI第71位的氨基酸和MHCI第22位的氨基酸突变为半胱氨酸；
(iii)α-螺旋之间，优选透过将MHCI第51位的氨基酸和MHCI第175位的氨基酸突变为半胱氨酸；或
(iv)α-螺旋和β折迭片之间，优选透过将MHCI第71位的氨基酸和MHCI第22位的氨基酸突变为半胱氨酸；以及α-螺旋之间，优选透过将MHCI第51位的氨基酸和MHCI第175位的氨基酸突变为半胱氨酸。


5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述装载的HLA/肽分子在约4℃下稳定时间超过约1天，优选为超过1周。


6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中与pMHC复合体结合的TCR的亲和力筛选灵敏度水平高于约Kd1.0x10-9，优选为高于约Kd1.0x10-6，更优选为高于约Kd1.0x10-3。


7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中TCR或MHC分子适当地固定于固体表面上，选自芯片、生物传感器、载玻片或珠组成的组。


8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述方法以高通量筛选形式进行。


9.一种包含稳定MHC分子或其肽结合片段或由该稳定MHC分子或其肽结合片段组成的多肽，其中所述MHC分子在以下之间包含至少一个人工引入的共价键：
(i)MHCIα1结构域的两个氨基酸；和/或
(ii)MHCI的α1结构域中的一个氨基酸和MCHI的α2结构域中第160至179位氨基酸内的一个氨基酸；或
(iii)MHCII的α1结构域的两个氨基酸或β1结构域的两个氨基酸；和/或
(iv)MHCII的α1结构域的一个氨基酸和MHCII的β1结构域的一个氨基酸。


10.根据权利要求9所述的多肽，其中，
(i)一个氨基酸在MHCIα1结构域的β1单元中被修饰而另一个氨基酸在MHCIα1结构域的α1单元中被修饰，优选为在β1单元内的第12至32位氨基酸内，优选为在第17至27位氨基酸内，更优选为在第20至24位氨基酸内，最优选为在第22位氨基酸以及在1单元内的第61至81位氨基酸内，优选为在第66至76位氨基酸内，更优选为在第69至73位氨基酸内，最优选为在第71位氨基酸；和/或
(ii)一个氨基酸在α1结构域的α1单元中被修饰，优选为在第50至70位氨基酸内，更优选为在第50至60位氨基酸内，更优选为在第50至54位氨基酸内，最优选为在第51位氨基酸，另一个在α2结构域内被修饰的氨基酸在第165至178位氨基酸内，优选为在第170至177位氨基酸内，更优选为在第173至176位氨基酸内，最优选为在第175位氨基酸；或
(iii)一个氨基酸在MHCIIα1结构域的β1单元中被修饰而另一个氨基酸在MHCIIα1结构域的α1单元中被修饰，优选为在β1单元内的第10至40位氨基酸内，优选为在第13至35位氨基酸内，更优选为在第22至25位氨基酸内，最优选为在第22位氨基酸以及在α1单元内的第45至78位氨基酸内，优选为在第50至70位氨基酸内，更优选为在第56至66位氨基酸内，最优选为在第59位氨基酸；和/或
(iv)一个氨基酸在MtCIIβ1结构域的β3单元中被修饰而另一个氨基酸在MHCIIβ1结构域的α3单元中被修饰，优选为在β3单元内的第5至53位氨基酸内，优选为在第17至41位氨基酸内，更优选为在第21至28位氨基酸内，最优选为在第26位氨基酸以及在3单元内的第52至88位氨基酸内，优选为在第66至76位氨基酸内，更优选为在第65至80位氨基酸内，最优选为在第75位氨基酸；和/或
(v)一个氨基酸在MHCIIβ1结构域的α3单元中被修饰而另一个在MHCIIα1结构域的α1单元中被修饰，优选为在α3单元内的第70至95位氨基酸内，优选为在第74至94位氨基酸内，优选为在第83至93位氨基酸内，更优选为在第87至92...

【专利技术属性】
技术研发人员：A·莫里茨，D·莫雷尔，S·邦克，C·瓦格纳，
申请(专利权)人：伊玛提克斯生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：德国;DE