一种特异性检测肌酸激酶同工酶的试剂盒制造技术

本申请公开了一种特异性检测肌酸激酶同工酶的试剂盒，属于肌酸激酶检测技术领域。所述试剂盒包括试剂R0、试剂RM和试剂R1；试剂R0包括缓冲液、氯化钠、保护剂、防腐剂、肌酸激酶同工酶B亚基抗体；试剂RM包括缓冲液、包被肌酸激酶MM同工酶包被抗体的磁性微球、保护剂、表面活性剂、稳定剂、防腐剂；试剂R1包括缓冲液、包被碱性磷酸酶的肌酸激酶MM同工酶标记抗体、保护剂、表面活性剂、稳定剂、防腐剂。本申请试剂盒灵敏度高、特异性好、具有较高的线性范围和耐HOOK性，能够检测干滤血片、血清或尿液样本中的CKMM，适用范围更广。

【技术实现步骤摘要】
一种特异性检测肌酸激酶同工酶的试剂盒
本申请涉及肌酸激酶检测
，特别涉及一种特异性检测肌酸激酶同工酶的试剂盒。
技术介绍
肌酸激酶(CreatineKinase,CK)是一个与细胞内能量运转、肌肉收缩、ATP再生有直接关系的重要激酶，主要分布于骨骼肌与心肌，其次为脑组织，对肌酸激酶进行活性测定可以用于骨骼肌疾病及心肌疾病的诊断。肌酸激酶有4种形式的同工酶，CKMM为肌型同工酶，主要分布于骨骼肌；CKMB为心型同工酶，主要分布于心肌；CKBB为脑型同工酶，主要分布于脑组织；CKMiMi为线粒体型同工酶，主要分布于心肌和骨骼肌线粒体中。其中CKMM对于肌肉损伤及新生儿Duchenne型肌营养不良具有极大的诊断价值。CKMM为含有2个M亚基的肌酸激酶同工酶，CKMB为含有1个M亚基，1个B亚基的肌酸激酶同工酶。如果检测CKMM试剂中抗体筛选特异性不高，会产生与CKMB中M亚基的交叉反应。即使是筛选出针对M亚基的抗体，混合检测CKMM和CKMB时也会有部分CKMB被检测出，不利于特异性的检测CKMM。所以，目前相关的肌酸激酶同工酶的检测试剂盒检测特异性不高，检测线性范围较低，不能满足临床的要求。
技术实现思路
针对相关的肌酸激酶同工酶检测试剂盒检测特异性不高，检测线性范围较低的问题，本申请提供一种特异性检测肌酸激酶同工酶的试剂盒。本申请的一种特异性检测肌酸激酶同工酶的试剂盒是通过以下技术方案得以实现的。一种特异性检测肌酸激酶同工酶的试剂盒，包括试剂R0、试剂RM和试剂R1；<br>所述试剂R0包括20-50mmol/L缓冲液、9g/L氯化钠、0.5-1g/L保护剂、0.05-0.1g/L防腐剂、10-100mmol/L肌酸激酶同工酶B亚基抗体；所述试剂RM包括20-50mmol/L缓冲液、0.2-2g/L包被肌酸激酶MM同工酶包被抗体的磁性微球、0.5-10g/L保护剂、1-2g/L表面活性剂、1-10g/L稳定剂、0.05-0.1g/L防腐剂；所述试剂R1包括20-50mmol/L缓冲液、1-20ug/ml包被碱性磷酸酶的肌酸激酶MM同工酶标记抗体、0.5-10g/L保护剂、1-2g/L表面活性剂、1-10g/L稳定剂、0.05-0.1g/L防腐剂。通过采用上述技术方案，本申请一方面采用了更高灵敏度的化学发光检测方法，另一方面加入了专门针对CKMBB亚基的抗体对CKMB进行提前封闭阻断，可有效提高检测线性范围，提高检测的特异性和灵敏性。具体的，由于尿液中CKMM的含量比血液中的要低，需要灵敏度更高的检测试剂盒或方法对其进行检测，所以本申请采用检测灵敏度及检测精密度较高的化学发光免疫分析法对待测样品中的CKMM进行检测，较相关的肌酸激酶同工酶检测试剂采用的荧光免疫方法，更能够满足对临床尿液样本的检测。本申请试剂盒中含有试剂R0，试剂R0中的B亚基抗体能够特异性的阻断CKMB，在加入RM和R1试剂后，确保了M亚基抗体仅能够与样品中的CKMM结合，而不与CKMB结合，从而提高了检测的特异性，而且，通过阻断CKMB可提高检测线性范围，具有更高的线性和耐HOOK效应。本申请试剂盒中的三种抗体经过多次筛选得到，具有不同的作用。本申请抗体筛选通过化学发光法进行，结合检测天然CKMM和CKMB判断抗体的结合特性和配对，故筛选得到的抗体灵敏度较高且测定天然样本互换性较高，可直接用于试剂盒制备。其中，R0中的B亚基抗体不能与RM和R1中的M亚基抗体结合，但可与CKMB结合，可起到阻断CKMB与RM中M亚基抗体结合的作用。RM中的M亚基抗体可与R1中的M亚基抗体配对特异性识别CKMM。综上所述，本申请通过采用化学发光免疫分析法以及在试剂盒中加入B亚基抗体阻断CKMB，可显著提高检测灵敏度，提高肌肉损伤及新生儿Duchenne型肌营养不良的诊断效率，避免病情的延误；可提高检测特异性、线性范围和HOOK限，充分避免假性结果的出现，提高检测结果的准确度和可靠度。一种特异性检测肌酸激酶同工酶的试剂盒，包括试剂RM和试剂R1；所述试剂RM包括20-50mmol/L缓冲液、10-100mmol/L肌酸激酶同工酶B亚基抗体、0.2-2g/L包被肌酸激酶MM同工酶包被抗体的磁性微球、0.5-10g/L保护剂、1-2g/L表面活性剂、1-10g/L稳定剂、0.05-0.1g/L防腐剂；所述试剂R1包括20-50mmol/L缓冲液、1-20ug/ml包被碱性磷酸酶的肌酸激酶MM同工酶标记抗体、0.5-10g/L保护剂、1-2g/L表面活性剂、1-10g/L稳定剂、0.05-0.1g/L防腐剂。通过采用上述技术方案，本申请试剂盒还可将上述R0试剂和RM试剂进行混合得到同时含有肌酸激酶同工酶B亚基抗体和包被肌酸激酶MM同工酶包被抗体的磁性微球的RM试剂，对待测样品进行检测时，可将样本与含有两种抗体的RM试剂反应一段时间，再加入R1试剂，从而实现通过混合一步法化学发光检测待测样品中的CKMM，检测灵敏度高、特异性好，具有较高线性范围和耐HOOK性，而且检测过程进一步简化，缩短了操作时间，提高了检测效率。进一步的，所述试剂盒的检测样本为干滤血片、血清或尿液。通过采用上述技术方案，采用本申请试剂盒测试干滤血片中的CKMM可对新生儿Duchenne型肌营养不良具有诊断作用，测试血清或尿液中CKMM可监测肌肉损伤情况。本申请的试剂盒能够对干滤血片、血清或尿液中的肌酸激酶MM同工酶进行检测，使用范围较现有的试剂盒更广，更能满足临床的要求。进一步的，所述缓冲液选用磷酸盐缓冲液或Tris缓冲液。通过采用上述技术方案，本申请的缓冲液能够为抗体提供一个良好的贮存环境和工作环境，维持抗体的稳定性和活性，从而提高检测结果的准确性和可靠性，同时延长试剂盒的使用期限。进一步的，所述保护剂选用BSA、酪蛋白和动物血清中的一种或几种。通过采用上述技术方案，本申请在试剂中加入BSA、酪蛋白和动物血清中的一种或几种保护剂，对肌酸激酶同工酶B亚基抗体、肌酸激酶同工酶M亚基抗体起到了很好的保护作用，防止抗体活性降低甚至失活现象的发生，提高试剂盒的检测灵敏度。进一步的，所述表面活性剂选用选用吐温20、吐温80和曲拉通100中的一种或几种。通过采用上述技术方案，本申请在试剂中加入上述表面活性剂中的一种或几种，表面活性剂的加入可以使试剂中的各组分充分分散，试剂的均一性得到了显著的提高，沉淀的形成量显著降低。进一步的，所述防腐剂选用选用proclin300、叠氮钠和硫柳汞中的一种或几种。通过采用上述技术方案，本申请在试剂中还加入可以延长试剂有效性的防腐剂，延长了试剂盒的使用期限，同时还降低了假阳性结果的发生率，检测结果更加准确可靠。进一步的，所述稳定剂选用聚乙二醇2000、聚乙二醇6000、聚乙二醇8000、蔗糖和海藻糖中的一种或几种。通过采用上述技术方案，本申请试剂中稳定剂联合保护剂和表面活性剂，可以提高试剂的稳定本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种特异性检测肌酸激酶同工酶的试剂盒，其特征在于：包括试剂R0、试剂RM和试剂R1；/n所述试剂R0包括20-50mmol/L缓冲液、9g/L氯化钠、0.5-1g/L保护剂、0.05-0.1g/L防腐剂、10-100mmol/L肌酸激酶同工酶B亚基抗体；/n所述试剂RM包括20-50mmol/L缓冲液、0.2-2g/L包被肌酸激酶MM同工酶包被抗体的磁性微球、0.5-10g/L保护剂、1-2g/L表面活性剂、1-10g/L稳定剂、0.05-0.1g/L防腐剂；/n所述试剂R1包括20-50mmol/L缓冲液、1-20ug/ml包被碱性磷酸酶的肌酸激酶MM同工酶标记抗体、0.5-10g/L保护剂、1-2g/L表面活性剂、1-10g/L稳定剂、0.05-0.1g/L防腐剂。/n

【技术特征摘要】
1.一种特异性检测肌酸激酶同工酶的试剂盒，其特征在于：包括试剂R0、试剂RM和试剂R1；
所述试剂R0包括20-50mmol/L缓冲液、9g/L氯化钠、0.5-1g/L保护剂、0.05-0.1g/L防腐剂、10-100mmol/L肌酸激酶同工酶B亚基抗体；
所述试剂RM包括20-50mmol/L缓冲液、0.2-2g/L包被肌酸激酶MM同工酶包被抗体的磁性微球、0.5-10g/L保护剂、1-2g/L表面活性剂、1-10g/L稳定剂、0.05-0.1g/L防腐剂；
所述试剂R1包括20-50mmol/L缓冲液、1-20ug/ml包被碱性磷酸酶的肌酸激酶MM同工酶标记抗体、0.5-10g/L保护剂、1-2g/L表面活性剂、1-10g/L稳定剂、0.05-0.1g/L防腐剂。


2.一种特异性检测肌酸激酶同工酶的试剂盒，其特征在于：包括试剂RM和试剂R1；
所述试剂RM包括20-50mmol/L缓冲液、10-100mmol/L肌酸激酶同工酶B亚基抗体、0.2-2g/L包被肌酸激酶MM同工酶包被抗体的磁性微球、0.5-10g/L保护剂、1-2g/L表面活性剂、1-10g/L稳定剂、0.05-0.1g/L防腐剂；
所述试剂R1包括20-50mmol/L缓冲液、1-20ug/ml包被碱性磷酸酶的肌酸激酶MM同工酶标记抗体、0.5-10g/L保护剂、1-2...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴鸣月，常缘荣，王艳新，周裕军，
申请(专利权)人：丹大生物技术湖南有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南;43