一种18联呼吸道病毒核酸联合检测装置制造方法及图纸

技术编号：29479747 阅读：27 留言：0更新日期：2021-07-30 18:49

本发明专利技术涉及一种18联呼吸道病毒核酸联合检测装置，属于荧光定量PCR的核酸检测技术领域。采用实时荧光定量PCR，扩增时加入18对引物和病毒特异性的荧光探针，探针为寡核苷酸，两端分别标记一个荧光报告基团和一个淬灭荧光基团。检测分4组，其中3组为RNA标本，需要先进行反转录RT操作，得到DNA单链，每组为一个PCR反应管，提前预装了反应缓冲液以及引物和探针，其中包括了一个内参照品的引物及探针，检测到特异病毒时，对应的探针被降解，使报告基团释放出荧光信号，产生阳性结果。本发明专利技术采用多通道检测方案，任何重叠感染均可同时检出所有病原体，适用于人鼻咽拭子、口咽拭子、鼻腔擦拭液、鼻咽分泌物和支气管肺泡灌洗液样本，以及经过NaOH处理的痰液标本。

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【技术实现步骤摘要】
一种18联呼吸道病毒核酸联合检测装置
本专利技术涉及荧光定量PCR的核酸检测
，具体是一种18联呼吸道病毒核酸联合检测装置。
技术介绍
呼吸道感染病原学复杂，包括细菌、病毒、支原体、衣原体、真菌等，其中80％以上是病毒性的。该病四季、任何年龄均可发病，通过含有病毒的飞沫、雾滴，或经污染的用具进行传播。研究表明，有较多的呼吸道感染属于多重病毒感染(29％)。常于机体抵抗力降低时，如受寒、劳累、淋雨等情况，原已存在或由外界侵入的病毒或/和细菌，迅速生长繁殖，导致感染，一般5-7天痊愈。常继发支气管炎、肺炎、副鼻窦炎，少数人可并发急性心肌炎、肾炎、风湿热等。呼吸道感染是世界范围内低龄儿童(<5岁)死亡的首位原因，儿童上呼吸道感染的患病次数平均为3-8次/年，下呼吸道感染率比URTI低，在1岁儿童中感染的比例约1～3％，学龄儿童至5％～10％。呼吸道病毒习惯上是指侵害呼吸道的病毒，至少涉及到8个科，200多种型别的病毒。临床常见的可导致呼吸道感染的病毒有腺病毒(AdV)、甲型流感病毒(FluA和FluB)、呼吸道合胞病毒(RSV)，人偏肺病毒(MPV)、副流感病毒1-4型(PIVl-PIV4)、鼻病毒(hRV)、冠状病毒(OC43、229E/NL63)、肠道病毒(hEV)和人博卡病毒(hBoV)，新冠状病毒(COVID-19)，风疹，流行性腮腺炎。呼吸道病毒是呼吸道感染最重要的病原体之一，随着抗病毒药物的广泛应用，越来越多的病毒对抗感染的一线药物产生耐药性，且近年来不断有新发病毒威胁着全人类的健康，而快速...

【技术保护点】
1.一种18联呼吸道病毒核酸联合检测装置，其特征在于，包括下列试剂：/n管1：/nDNA QPCR Supermix 2X 30μL；/n(1)、流行性感冒病毒A型FluA特异性基因片段的序列如SEQ ID No.1所示，其引物是：/n正向引物1，5’-CACCCTTGGCCTCGACATTA-3’：0.5μL；/n反向引物1，5’-ATTTCCTCGAGGGTCATGTC-3’：0.5μL；/n探针1，FAM-5’-GAATCCAGCGAGACACTTAG-3’-BHQ-1：0.5μL；/n(2)流行性感冒病毒B型FluB特异性基因片段的序列如SEQ ID No.2所示，其引物是：/n正向引物2，5’-ACAAAAGATGCTTAACTGAT-3’：0.5μL；/n反向引物2，5’-GAATCAGGCCTTTCTTTTTT-3’：0.5μL；/n探针2，HEX-5’-GACCAGGAAAGAAAAAGAAG-3’-BHQ-1：0.5μL；/n(3)呼吸道合胞病毒A型特异性基因片段的序列如SEQ ID No.3所示，其引物是：/n正向引物3，5’-GGAAGTACTCACTACCAAG...

【技术特征摘要】
1.一种18联呼吸道病毒核酸联合检测装置，其特征在于，包括下列试剂：
管1：
DNAQPCRSupermix2X30μL；
(1)、流行性感冒病毒A型FluA特异性基因片段的序列如SEQIDNo.1所示，其引物是：
正向引物1，5’-CACCCTTGGCCTCGACATTA-3’：0.5μL；
反向引物1，5’-ATTTCCTCGAGGGTCATGTC-3’：0.5μL；
探针1，FAM-5’-GAATCCAGCGAGACACTTAG-3’-BHQ-1：0.5μL；
(2)流行性感冒病毒B型FluB特异性基因片段的序列如SEQIDNo.2所示，其引物是：
正向引物2，5’-ACAAAAGATGCTTAACTGAT-3’：0.5μL；
反向引物2，5’-GAATCAGGCCTTTCTTTTTT-3’：0.5μL；
探针2，HEX-5’-GACCAGGAAAGAAAAAGAAG-3’-BHQ-1：0.5μL；
(3)呼吸道合胞病毒A型特异性基因片段的序列如SEQIDNo.3所示，其引物是：
正向引物3，5’-GGAAGTACTCACTACCAAGC-3’：0.5μL；
反向引物3，5’-GGAAGTACTCACTACCAAGC-3’：0.5μL；
探针3，Cy3-5’-CACTGCTCACCTCCAACACC-3’-BHQ-1：0.5μL；
(4)呼吸道合胞病毒B型特异性基因片段的序列如SEQIDNo.4所示，其引物是：
正向引物4，5’-CCATTAACCCAACAAAAAAA-3’：0.5μL；
反向引物4，5’-TTGATGTGGTTGTGTCAAGC-3’：0.5μL；
探针4，Cy5-5’-CCACTGTGCTCGACATAACC-3’-BHQ-1：0.5μL；
(5)人偏肺病毒MPV特异性基因片段的序列如SEQIDNo.5所示，其引物是：
正向引物5，5’-TCTGTGTCAACATGCCACCG-3’：0.5μL；
反向引物5，5’-GTAGATGATTCTCTGAGGTT-3’：0.5μL；
探针5，ROX-5’-CCACAGCAGGCAACACAGTT-3’-BHQ-1：0.5μL；
内参照品GAPDH，其引物是：
正向引物19，5’-TAACTCTGGTAAAGTGGATA-3’，0.5μL；
反向引物19，5’-GATTTCCATTGATGACAAGC-3’，0.5μL；
探针19，TAMRA-5’-GTTTACATGTTCCAATATGA-3’-BHQ-1：0.5μL；
管2：
DNAQPCRSupermix2X30μL；
(6)冠状病毒OC43特异性基因片段的序列如SEQIDNo.6所示，其引物是：
正向引物6，5’-ACTTCTCAGCAACCATCAGG-3’：0.5μL；
反向引物6，5’-CCCCTTAGCTTCAGTAGCTG-3’：0.5μL；
探针6，FAM-5’-GGTTCTCTGGAATTACTCAG-3’-BHQ-1：0.5μL；
(7)冠状病毒229E特异性基因片段的序列如SEQIDNo.7所示，其引物是：
正向引物7，5’-TTTGACAAGCCTCAGGAAAA-3’：0.5μL；
反向引物7，5’-CATTTCATGCTTTTGTTCTT-3’：0.5μL；
探针7，HEX-5’-CGGGTACTCCTAAGCCTTCT-3’-BHQ-1：0.5μL；
(8)副流感病毒1型PIVl特异性基因片段的序列如SEQIDNo.8所示，其引物是：
正向引物8，5’-TTTGACCATCCTTTTTCTGC-3’：0.5μL；
反向引物8，5’-CTGATTAACATTGGGACATT-3’：0.5μL；
探针8，Cy3-5’-GATACACTCGTTTTCCTAGG-3’-BHQ-1：0.5μL；
(9)副流感病毒2型PIV2特异性基因片段的序列如SEQIDNo.9所示，其引物是：
正向引物9，5’-GGATCTATCACCTAGGCTTT-3’：0.5μL；
反向引物9，5’-CTGCTGCAGCCCGTTCACTG-3’：0.5μL；
探针9，Cy5-5’-CCTTCCTACAACGAGCAGTC-3’-BHQ-1：0.5μL；
(10)副流感病毒3型PIV3特异性基因片段的序列如SEQIDNo.10所示，其引物是：
正向引物10，5’-TCGGATAATACTAATGATCT-3’：0.5μL；
反向引物10，5’-ATCATTTCTAATTGCAATTT-3’：0.5μL；
探针10，ROX-5’-CAATTCAGAGTCATGTCCAG-3’-BHQ-1：0.5μL；
内参照品GAPDH，其引物是：
正向引物19，5’-TAACTCTGGTAAA...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵钢，赵旻，李兴杰，解宇涵，孙雪娟，
申请(专利权)人：吉林双正医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：吉林;22

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