一种高效获取脂肪组织中单细胞的方法技术

本发明专利技术提供了一种高效获取脂肪组织单细胞的方法。由于临床脂肪样本的获取属于有创性操作，大小和重量均有限，单细胞得率和活性较低。本发明专利技术提出的消化方法通过化学和物理方法相结合，对脂肪组织分次酶解后进行手工柔和研磨，而后进行流式分选，能够有效提高脂肪组织的单细胞得率，且保证单细胞活率，尤其适用于少量脂肪组织如心包脂肪、血管旁脂肪、眼周脂肪等单细胞提取，便于细胞治疗的进一步开展。

【技术实现步骤摘要】
一种高效获取脂肪组织中单细胞的方法
：本专利技术属于生物
，具体涉及一种高效获取脂肪组织中单细胞的方法。
技术介绍
:脂肪组织是一种复杂的器官，具有多种的生理功能。研究认为正常脂肪组织的积累对人体具有重要的保护和缓冲作用，可供给人体热量，构成生物活性物质，以及调节生理机能。贮存的脂肪在一些情况下可以分解成脂肪酸，其具有降血压，降血脂，抗衰老等作用。但脂肪过多也会导致各种心血管疾病和代谢并发症。最新研究认为脂肪可能是一种重要的免疫器官，其包括多种细胞类型，如脂肪细胞，前成脂肪细胞，内皮细胞，成纤维细胞，干细胞，以及不同的免疫细胞。其中，含有的免疫细胞包括T细胞，B细胞，中性粒细胞，巨噬细胞，NK细胞。另外，从脂肪组织中可以分离得到的具有多向分化潜能的干细胞，即脂肪干细胞(adipose-derivedstemcells，ADSCs)，因具有低免疫原性和多向分化潜能等特点，是再生医学中极为重要的细胞之一，在细胞治疗领域具有广泛的应用前景。脂肪分布于人体的各个部位，不同部位的脂肪可能发挥着不同的作用(RosenED,Spiegelman本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高效获取脂肪组织中单细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：/n1)将获取的脂肪组织清洗后剪碎，加入1～2倍体积的消化酶进行消化；/n2)第一次消化结束后对步骤1)所得的组织悬液进行离心，抽取下层消化液和细胞的混悬液，加入等体积的终止液中和消化酶的作用，得到悬液A，上层未消化的组织块继续加入1～2倍体积的消化酶对组织块进行第二次的消化；/n3)在第二次消化后，将未完全消化的组织块，第二次消化所得的消化液和细胞的混悬液，以及悬液A，全部加入放置了细胞筛网的培养皿中，进行手工柔和研磨，吸取研磨后的细胞悬液，加入等体积的终止液中和消化酶的作用，得到悬液B；/n4)为提高细胞得率，用平衡液多次轻...

【技术特征摘要】
1.一种高效获取脂肪组织中单细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)将获取的脂肪组织清洗后剪碎，加入1～2倍体积的消化酶进行消化；
2)第一次消化结束后对步骤1)所得的组织悬液进行离心，抽取下层消化液和细胞的混悬液，加入等体积的终止液中和消化酶的作用，得到悬液A，上层未消化的组织块继续加入1～2倍体积的消化酶对组织块进行第二次的消化；
3)在第二次消化后，将未完全消化的组织块，第二次消化所得的消化液和细胞的混悬液，以及悬液A，全部加入放置了细胞筛网的培养皿中，进行手工柔和研磨，吸取研磨后的细胞悬液，加入等体积的终止液中和消化酶的作用，得到悬液B；
4)为提高细胞得率，用平衡液多次轻柔冲洗研磨后的细胞筛网，冲洗后的液体加入悬液B，得到悬液C；
5)将悬液C离心后得到的细胞团块使用平衡液重悬，过细胞筛网，得到的悬液D，即为所需细胞悬液。
6)将步骤5)所得的细胞悬液通过流式分选出所需单细胞，用于后续检测及实验。


2.如权利要求1所述一种高效获取脂肪组织中单细胞的方法，其特征在于，步骤1)～3)中的消化酶为DMEM或PBS配制的，质量体积分数为0.1％的胶原酶I。


3.如权利要求1所述一种高效获取脂肪组织中单细胞的方法，其特征在于，步骤1)～2)消化条件为37℃，每次消化时间为15分钟。


4.如权利要求1所述一种高效获取脂肪...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁小婷，周晓慧，刘静，李蜜蜜，刘中民，
申请(专利权)人：上海市东方医院同济大学附属东方医院，
类型：发明
国别省市：上海;31