【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】醛脱氢酶变体及其使用方法
技术介绍
本专利技术申请主张2018年9月26日提交的美国临时专利申请No.62/737,053和2018年10月3日提交的美国临时专利申请No.62/740,830的权益，以上专利的整个内容作为参考并入本文。参考以下临时和国际专利申请，这些专利以其全部内容作为参考并入本文：(1)2017年3月31日提交的标题为“醛脱氢酶变体和使用方法(ALDEHYDEDEHYDROGENASEVARIANTSANDMETHODSOFUSE)”的美国临时专利申请No.62/480,194(代理人卷号No.12956-408-888)；(2)2017年3月31日提交的标题为“3-羟基丁酰基-COA脱氢酶变体和使用方法(3-HYDROXYBUTYRYL-COADEHYDROGENASEVARIANTSANDMETHODSOFUSE)”的美国临时专利申请No.62/480,208(代理人卷号No.12956-409-888)；(3)2017年3月31日提交的标题为“从发酵液获得1,3-丁二醇的方法和系统(PROCESSANDSYSTEMSFO...
【技术保护点】
1.分离的核酸分子，其选自：/n(a)编码被称为SEQ ID NO：1、2或3的或表4中的氨基酸序列的核酸分子，其中所述氨基酸序列包含对应于位置I66的氨基酸替换；/n(b)在高严格杂交条件下与(a)所述的核酸杂交并且包含编码对应于位置I66的氨基酸替换的核酸序列的核酸分子；和/n(c)与(a)或(b)互补的核酸分子。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180926 US 62/737,053;20181003 US 62/740,8301.分离的核酸分子，其选自：
(a)编码被称为SEQIDNO：1、2或3的或表4中的氨基酸序列的核酸分子，其中所述氨基酸序列包含对应于位置I66的氨基酸替换；
(b)在高严格杂交条件下与(a)所述的核酸杂交并且包含编码对应于位置I66的氨基酸替换的核酸序列的核酸分子；和
(c)与(a)或(b)互补的核酸分子。
2.根据权利要求1所述的分离的核酸分子，其中位置I66处的所述氨基酸替换是如表1、2和/或3中所示的氨基酸替换。
3.根据权利要求1或2所述的分离的核酸分子，其中除位置I66处的所述替换之外，所述氨基酸序列包含位于表1、2和/或3中所示的其它氨基酸变体位置的一个或多个氨基酸替换。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的分离的核酸分子，其中除位置I66处所述的替换之外，所述氨基酸序列包含表1、2和/或3中所示的一个或多个氨基酸替换。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的分离的核酸分子，其中除所述一个或多个氨基酸替换以外，所述氨基酸序列与SEQIDNO：1、2或3或表4中所提及的氨基酸序列具有至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％的序列同一性或者是相同的。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的分离的核酸分子，其中所述氨基酸序列包含至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16个表1、2和/或3中所示的氨基酸替换。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的分离的核酸分子，其中所述氨基酸序列包含如表1、2和/或3中所示的氨基酸替换。
8.含有根据权利要求1-7中任一项所述的核酸分子的载体。
9.根据权利要求8所述的载体，其中所述载体是表达载体。
10.根据权利要求8或9所述的载体，其中所述载体包含双链DNA。
11.包含被称为SEQIDNO：1、2或3的或表4中所提及的氨基酸序列的分离的多肽，其中所述氨基酸序列包含对应于位置I66的氨基酸替换。
12.根据权利要求11所述的分离的多肽，其中位置I66处的所述氨基酸替换是如表1、2和/或3中所示的氨基酸替换。
13.根据权利要求11或12所述的分离的多肽，其中除对应于氨基酸位置I66处的所述替换之外，所述氨基酸序列包含位于表1、2和/或3中所示的其它氨基酸变体位置的一个或多个氨基酸替换。
14.根据权利要求11-13中任一项所述的分离的多肽，其中除位置I66处所述的替换之外，所述氨基酸序列包含表1、2和/或3中所示的一个或多个氨基酸替换。
15.包含被称为SEQIDNO：1、2或3的或表4中所提及的氨基酸序列的分离的多肽，其中所述氨基酸序列包含对应于位置I66的氨基酸替换，其中除对应于位置I66的所述氨基酸替换外，所述氨基酸序列与被称为SEQIDNO：1、2或3的或表4中所提及的氨基酸序列具有至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％的序列同一性或者是相同的。
16.根据权利要求15所述的分离的多肽，其中位置I66处的所述氨基酸替换是如表1、2和/或3中所示的氨基酸替换。
17.根据权利要求15或16所述的分离的多肽，其中除对应于氨基酸位置I66处的所述替换之外，所述氨基酸序列包含位于表1、2和/或3中所示的其它氨基酸变体位置的一个或多个氨基酸替换。
18.根据权利要求15-17中任一项所述的分离的多肽，其中除位置I66处所述的替换之外，所述氨基酸序列包含表1、2和/或3中所示的一个或多个氨基酸替换。
19.根据权利要求15-18中任一项所述的分离的多肽，其中所述氨基酸序列还包含1至100个氨基酸位置中的保守氨基酸替换，其中所述位置是除表1、2和/或3中所示的一个或多个氨基酸替换以外的。
20.根据权利要求11-19中任一项所述的分离的多肽，其中除表1、2和/或3中所示的一个或多个氨基酸替换以外，与亲代序列相比，所述氨基酸序列在2至300个氨基酸位置处不包含修饰，其中所述位置选自被称为SEQIDNO：1、2或3的或表4中所提及的2、3、4或5条氨基酸序列之间相同的那些。
21.根据权利要求11-20中任一项所述的分离的多肽，其中所述氨基酸序列包含至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16个表1、2和/或3中所示的氨基酸替换。
22.根据权利要求11-21中任一项所述的分离的多肽，其中所述氨基酸序列包含如表1、2和/或3中所示的变体的氨基酸替换。
23.根据权利要求11-22中任一项所述的分离的多肽，其中所述多肽编码醛脱氢酶。
24.根据权利要求11-23中任一项所述的分离的多肽，其中所述多肽可以将3-羟基丁酰基-CoA转化为3-羟基丁醛。
25.根据权利要求11-23中任一项所述的分离的多肽，其中所述多肽可以将4-羟基丁酰基-CoA转化为4-羟基丁醛。
26.根据权利要求11-25中任一项所述的分离的多肽，其中所述多肽相对于亲代多肽具有更高的活力。
27.根据权利要求11-24中任一项所述的分离的多肽，其中所述多肽对于3-羟基-(R)-丁酰基-CoA具有高于3-羟基-(S)-丁酰基-CoA的活力。
28.根据权利要求11-24中任一项所述的分离的多肽，其中所述多肽对于3-羟基丁酰基-CoA具有高于乙酰-CoA的特异性。
29.根据权利要求11-23或25中任一项所述的分离的多肽，其中所述多肽对于4-羟基丁酰基-CoA具有高于乙酰-CoA的特异性。
30.根据权利要求11-25中任一项所述的分离的多肽，其中所述多肽在细胞或细胞提取物中产生减少的副产品。
31.根据权利要求30所述的分离的多肽，其中所述副产品是乙醇或4-羟基-2-丁酮。
32.根据权利要求11-25中任一项所述的分离的多肽，其中所述多肽相对于亲代多肽具有更高的kcat。
33.细胞，其包含根据权利要求8-10中任一项所述的载体。
34.细胞，其包含根据权利要求1-7中任一项所述的核酸。
35.根据权利要求34所述的细胞，其中所述核酸分子被整合到所述细胞的染色体中。
36.根据权利要求35所述的细胞，其中所述整合是位点-特异的。
37.根据权利要求33-36中任一项所述的细胞，其中表达了所述核酸分子。
38.细胞，其包含根据权利要求11-32中任一项所述的多肽。
39.根据权利要求33-38中任一项所述的细胞，其中所述细胞是微生物。
40.根据权利要求39所述的细胞，其中所述微生物是细菌、酵母或真菌。
41.根据权利要求33-38中任一项所述的细胞，其中所述细胞是分离的真核细胞。
42.根据权利要求33-41中任一项所述的细胞，其中所述细胞包含产生3-羟基丁醛(3-HBal)和/或1,3-丁二醇(1,3-BDO)或其酯或酰胺的途径。
43.根据权利要求33-41中任一项所述的细胞，其中所述细胞包含产生4-羟基丁醛(4-HBal)和/或1,4-丁二醇(1,4-BDO)或其酯或酰胺的途径。
44.根据权利要求33-43中任一项所述的细胞，其中所述细胞能够发酵。
45.根据权利要求33-44中任一项所述的细胞，还包含所述多肽的至少一种底物。
46.根据权利要求45所述的细胞，其中所述底物是3-羟基丁酰基-CoA。
47.根据权利要求46所述的细胞，其中所述底物是3-羟基-(R)-丁酰基-CoA。
48.根据权利要求46或47所述的细胞，其中所述细胞对于3-羟基-(R)-丁酰基-CoA具有高于3-羟基-(S)-丁酰基-CoA的活力。
49.根据权利要求45所述的细胞，其中所述底物是4-羟基丁酰基-CoA。
50.根据权利要求11-32中任一项所述的多肽作为生物催化剂的用途。
51.组合物，其包含根据权利要求11-32中任一项所述的多肽和所述多肽的至少一种底物。
52.根据权利要求51所述的组合物，其中所述多肽可以与所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：阿米特·沙阿，约瑟夫·沃纳，
申请(专利权)人：基因组股份公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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