TLR1/2激动剂地普罗考姆的佐剂作用协同增效检查点抑制性抗体以消除疾病制造技术

鉴定并优化了一种有效的人类和小鼠Toll样受体(TLR)1/TLR2激动剂地普罗考姆，其表现出在人类THP‑1细胞中的EC

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】TLR1/2激动剂地普罗考姆的佐剂作用协同增效检查点抑制性抗体以消除疾病描述政府支持本专利技术在美国国立卫生研究院授予的AI125581的政府支持下完成。政府拥有本专利技术的某些权利。
技术介绍
通过激活包括树突状细胞(DC)和巨噬细胞在内的抗原呈递细胞(APC)，佐剂具有释放细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的天然功能以杀灭病原体或癌症的潜力。许多佐剂(包括TLR激动剂)与APC上的先天性免疫受体结合，诱导APC呈递抗原，产生细胞因子，并向抗原特异性CD8T细胞提供共刺激信号(1,2)。响应这些信号，CD8T细胞增殖并分化为能够杀灭表达其靶抗原的感染的或肿瘤细胞的CTL。另外，这种信号激活CD4T细胞，诱导其扩繁和分化为Th1或Th2T辅助细胞(3)。改善的佐剂技术的最重要目标之一在于癌症免疫疗法领域，其中基于其癌症相关抗原或新生抗原的表达，利用适应性免疫系统杀灭癌细胞(4,5)。癌症免疫疗法的有效性取决于肿瘤特异性CTL的产生和激活(5,6)及其在体内的活性保持，从而导致肿瘤细胞的杀伤和持久的抗肿瘤记忆应答(5)。因此，免疫检查点抑制剂(比如抗PD-1、抗PD-L1和抗CTLA-4)通过其阻断可抑制CTL激活的通路的作用而在黑色素瘤和其他癌症的治疗中取得了显著的临床成功(7,8)。然而，即使在已知易受检查点阻断影响的那些肿瘤中，也有报道称PD-1/PD-L1抗体治疗的应答率仅为约20%(5,9)，这可能是由于肿瘤反应性CTL的数量或激活不足或者其不能浸润肿瘤所致。由癌症环境诱导的免疫抑制可加剧这些缺陷。另外，认为缺乏T细胞支持至少部分地是造成许多针对各种病原体以及癌症相关的细胞表面抗原的合成疫苗表现出缺乏活力的原因。_ENREF_21长期以来，人们一直知道TLR配体在经衔接蛋白(MyD88、TRIF、TRAM、MAL)、激酶和泛素连接酶激活NF-κB和IRF的适应性免疫应答(10,11)信号传导中起佐剂作用(12-14)。这些和其他转录因子诱导成千上万进行先天性免疫应答的基因的表达(15)。据报道，几种基于核苷酸的佐剂，比如TLR3激动剂聚I:C(9)、TLR9激动剂CpG(16)和STING激动剂cGAMP(6)可提高免疫检查点抑制剂在临床前癌症治疗模型中的功效。这些方法旨在增加检查点抑制剂可作用于的肿瘤特异性CTL的数量。然而，其主要依赖于天然TLR配体，这些配体难以合成，并且在某些情况下为相当毒性的，大概是因为它们在体内广泛传播，并且不加区分地激活髓样细胞，从而产生细胞因子风暴(17)。寻求开发具有优异的药理性质，具有确定的结构和分子机制(从其中可了解关键的佐剂设计原理)的激动剂。通过筛选合成化合物的文库，鉴定出一种有效的人类和小鼠活性TLR1/2激动剂地普罗考姆(Diprovocim)，其与任何微生物TLR激动剂均无结构相似性。如下所述，在B16-OVA黑色素瘤模型中，地普罗考姆在小鼠中说明性地引发强大的佐剂活性，并且当与癌症抗原和免疫检查点阻断相结合时成功地抑制肿瘤生长和延长生存期。专利技术的简述佐剂有时通过未知机制增强适应性免疫应答，并可用于增强对癌症抗原的体液和细胞应答。本文所述的专利技术说明合成化学佐剂地普罗考姆的协同免疫学作用，地普罗考姆靶向小鼠和人类中的先天性免疫受体TLR2/TLR1，当与患病细胞标志物免疫原分子和检查点抑制剂一起使用时，与使用单种组分或其中任何两种组分相比较，在抑制患病细胞的生长方面提供协同作用。因此，本专利技术考虑一种抑制哺乳动物中患病细胞的生长的方法。那些患病细胞表达无该疾病的相同类型细胞中不存在的或与所述患病细胞相比较以明显减少的数量存在于无病细胞中的标志物分子。所考虑的方法包括通过以下对有需要的患病哺乳动物进行免疫的步骤：a)给予患病哺乳动物(i)佐剂足够量的地普罗考姆化合物，(ii)T细胞刺激量的免疫检查点抑制剂，和(iii)免疫量的疾病标志物分子。将经免疫的哺乳动物b)保持足以使哺乳动物对免疫产生免疫应答并抑制患病细胞的生长的时间段。考虑的地普罗考姆化合物在结构上对应于以下结构式V，其中-A为-H(氢基)或-C(O)NH-R4；R1、R2、R3和R4相同或不同，并且为2-(4-氟苯基)乙基、反式-2-苯基环丙基、反式-2-(4-氟苯基)-环丙基或C2-C18烃基，条件是：1)R1、R2、R3和R4(R1-4)中的至少两个或R1、R2和R3(R1-3)中的至少两个为反式-2-苯基环丙基、反式-2-(4-氟苯基)-环丙基或其混合物，或者R1-4中的每一个为2-(4-氟苯基)乙基，2)至少一个所示的吡咯烷基二甲酰胺基具有(S,S)构型，并且当R1-4中的每一个不同于2-(4-氟苯基)乙基时，除C2-C18烃基以外的每个所示的R取代基为反式-2-苯基环丙基、反式-2-(4-氟苯基)-环丙基或其混合物，3)当-A为-C(O)NH-R4时，R1-4中不超过两个为C2-C18烃基，和4)当A为氢基时，R1-3中的一个可为C2-C18烃基，并且所示的含有R3的吡咯烷基甲酰胺基可具有R或S构型，或两种构型的混合物；-Z为卤素、-H、-NH2、-OH、-OCH3、-NO2、-OCH2CO2H、-O(CH2CH2O)nCH2CH2CO2H、-OCH2CONH(CH2CH2O)nCH2CH2CO2H、-NHCOCH2O-(CH2CH2O)nCH2CO2H、-OCH2CONHCH2CONHCH(CHOH)CO2H、-OCH2CONHCH2CONHCHCO2H(CH2CO2H)、-OCH2CONHCH2CONHCH(CHOH)(CH2CH2O)nCH2CH2CO2H、-OCH2CONHCH2CONHCH(CHOH)(CH2CH2O)nCH2CH2CO2H、-OCH2CONHCH2CONHCH[(CH2)4NH2]CO2H、-OCH2CONHCH2CONHCH(CH2OH)CO{NHCH[(CH2)4NH2]CO}mNHCH-[(CH2)4NH2]CO2H(SEQIDNO:3-8)、-OCH2CONHCH2CO{NHCH[(CH2)4NH2]CO}pNHCH[(CH2)4NH]CO2H(SEQIDNO:9-13)和-OCH2CONHCH2CO{NHCH(CH2OH)CO}qNHCH(CH2OH)CO2H(SEQIDNO:14-18)中的一种或多种；W为氮(N)或CH；“n”为其平均值为1-约8的数字；“m”为其值为1-约6的数字；“p”为其值为1-约6的数字；和“q”为其值为1-约6的数字。地普罗考姆-1(WO2018/005812；化合物3)在小鼠中表现出强大的佐剂活性，特别是促进细胞免疫应答。当用地普罗考姆-1佐剂化时，针对基因工程改造的肿瘤特异性抗原卵清蛋白的免疫抑制了B16黑色素瘤的生长，并在存在抗PD-L1阻断免疫检查点的情况下延长生存期。用卵清蛋白加上地普罗考姆或卵清蛋白加上抗PD-L1抑制剂免疫表现出一些益处，但10本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抑制哺乳动物中患病细胞的生长的方法，所述患病细胞表现出无所述疾病的相同类型细胞上不存在或与所述患病细胞相比较以明显减少的数量存在于所述无病细胞上的标志物分子，所述方法包括以下步骤：/na) 给予所述哺乳动物(i) 佐剂足够量的地普罗考姆化合物，(ii) T细胞刺激量的免疫检查点抑制剂，和(iii) 免疫量的所述标志物分子或其一部分；/nb) 保持所述免疫的哺乳动物足以使所述哺乳动物对所述免疫产生免疫应答的时间段；和/n其中所述地普罗考姆化合物在结构上对应于以下结构式V，/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180802 US 62/7138231.一种抑制哺乳动物中患病细胞的生长的方法，所述患病细胞表现出无所述疾病的相同类型细胞上不存在或与所述患病细胞相比较以明显减少的数量存在于所述无病细胞上的标志物分子，所述方法包括以下步骤：
a)给予所述哺乳动物(i)佐剂足够量的地普罗考姆化合物，(ii)T细胞刺激量的免疫检查点抑制剂，和(iii)免疫量的所述标志物分子或其一部分；
b)保持所述免疫的哺乳动物足以使所述哺乳动物对所述免疫产生免疫应答的时间段；和
其中所述地普罗考姆化合物在结构上对应于以下结构式V，



其中
-A为-H(氢基)或-C(O)NH-R4；
R1、R2、R3和R4相同或不同，并且为2-(4-氟苯基)乙基、反式-2-苯基环丙基、反式-2-(4-氟苯基)-环丙基或C2-C18烃基，条件是：
1)R1、R2、R3和R4(R1-4)中的至少两个或R1、R2和R3(R1-3)中的至少两个为反式-2-苯基环丙基、反式-2-(4-氟苯基)-环丙基或其混合物，或者R1-4中的每一个为2-(4-氟苯基)乙基，
2)至少一个所示的吡咯烷基二甲酰胺基具有(S,S)构型，并且当R1-4中的每一个不同于2-(4-氟苯基)乙基时，除C2-C18烃基以外的每个所示的R取代基为反式-2-苯基环丙基、反式-2-(4-氟苯基)-环丙基或其混合物，
3)当-A为-C(O)NH-R4时，R1-4中不超过两个为C2-C18烃基，和
4)当A为氢基时，R1-3中的一个可为C2-C18烃基，并且所示的含有R3的吡咯烷基甲酰胺基可具有R或S构型，或两种构型的混合物；
-Z为卤素、-H、-NH2、-OH、-OCH3、-NO2、-OCH2CO2H、-O(CH2CH2O)nCH2CH2CO2H、-OCH2CONH(CH2CH2O)nCH2CH2CO2H、-NHCOCH2O-(CH2CH2O)nCH2CO2H、-OCH2CONHCH2CONHCH(CHOH)CO2H、-OCH2CONHCH2CONHCHCO2H(CH2CO2H)、-OCH2CONHCH2CONHCH(CHOH)(CH2CH2O)nCH2CH2CO2H、-OCH2CONHCH2CONHCH(CHOH)(CH2CH2O)nCH2CH2CO2H、-OCH2CONHCH2CONHCH[(CH2)4NH2]CO2H、-OCH2CONHCH2CONHCH(CH2OH)CO{NHCH[(CH2)4NH2]CO}mNHCH-[(CH2)4NH2]CO2H(SEQIDNO:3-8)、-OCH2CONHCH2CO{NHCH[(CH2)4NH2]CO}pNHCH[(CH2)4NH]CO2H(SEQIDNO:9-13)
和-OCH2CONHCH2CO{NHCH(CH2OH)CO}qNHCH(CH2OH)CO2H(SEQIDNO:14-18)中的一种或多种；
W为氮(N)或CH；
“n”为其平均值为1-约8的数字；
“m”为其值为1-约6的数字；“p”为其值为1-约6的数字；和
“q”为其值为1-约6的数字。


2.权利要求1的方法，其中将所述地普罗考姆化合物、免疫检查点抑制剂和标志物分子溶解或分散于免疫药用组合物中给予。


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【专利技术属性】
技术研发人员：B·博伊特勒，Y·王，
申请(专利权)人：得克萨斯系统大学评议会，
类型：发明
国别省市：美国;US