一种甘草泻心汤多成分含量的检测方法技术

一种甘草泻心汤多成分含量的检测方法包括供试品溶液的制备，对照品溶液的制备，超高效液相色谱法检测；其中，所述供试品溶液的制备是取甘草泻心汤的提取液，离心，离心结束取上清液，挥去溶剂，加50%甲醇溶液溶解并定容，然后用微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。本发明专利技术一种甘草泻心汤多成分含量的检测方法8种有效成分分离度高，相邻两成分之间均能达到基线分离，该方法准确度高，线性良好，精密度与中间精密度好，溶液稳定性好，12小时内样品溶液稳定，本发明专利技术方法操作简单，大大提高了工作效率和检测精度，可以更加全面，更加有效的控制甘草泻心汤以及相关制剂的产品质量。

【技术实现步骤摘要】
一种甘草泻心汤多成分含量的检测方法
本专利技术涉及中药质量检测领域，具体涉及一种甘草泻心汤多成分含量的定量检测方法。
技术介绍
甘草泻心汤，中医方剂名方，出自《伤寒论》，其组方包括甘草20克、黄芩15克，半夏13克，大枣12g，黄连5克，干姜15克。方中甘草以补中益脾胃，使脾胃之气复职，既生化气血，又主持其功能，黄连、黄芩清热燥湿，使脾胃不为湿热所肆虐，半夏、干姜以宣畅中焦气机，使湿热之邪无内居之机，大枣以补中益气，与甘草相用，以治病扶正驱邪，正气得复，不为邪虐，然则诸症罢，诸药相合，以达苦寒泻邪而不峻，辛温温通而不散正气，甘药补而有序以和中固本。具有益气和胃，消痞止呕之功效。主治伤寒痞证，胃气虚弱，腹中雷鸣，下利，水谷不化，心下痞硬而满，干呕心烦不得安，狐惑病。临床常用于急慢性胃肠炎症、白塞氏综合症等。目前，还没有仅用一个方法可以监测甘草泻心汤多个有效成分含量的方法，而关于甘草泻心汤质量检测方法仅仅是按高效液相色谱法测定单个成分的含量，如需控制多个成分，必须应用多个方法分别测定，检测工作繁琐，耗能较大，并且不能全面客观的评价甘草泻心汤的质量。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种甘草泻心汤的多成分含量测定方法，该检测方法可以客观、全面、准确的评价甘草泻心汤的质量，对控制甘草泻心汤的质量和保证临床疗效具有重要意义。本专利技术的目的是通过如下技术措施实现的：一种甘草泻心汤多成分含量的检测方法，其特征在于，它包括供试品溶液的制备，对照品溶液的制备，超高效液相色谱法检测；其中，所述供试品溶液的制备是取甘草泻心汤的提取液，离心，离心结束取上清液，挥去溶剂，加甲醇溶液溶解并定容，然后用微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。进一步，所述甘草泻心汤提取液用量为100ml，所述离心后取上清液为5ml，所述甲醇溶液的体积分数为50％，所述定容为5ml的容量瓶，所述微孔滤膜的孔径为0.22微米。进一步，所述甘草泻心汤按如下方法制备：(1)分别取甘草、黄芩，半夏，大枣，黄连，干姜置于万能粉碎机中，分别粉碎并用1号筛和2号筛进行过筛，收集过1号筛但未过2号筛的粉末，备用；(2)取重量份的甘草粉20份、黄芩粉15份，半夏粉13份，大枣粉12份，黄连粉5份，干姜粉15份置于适宜容器中，混合均匀，置于回流提取装置中，提取三次，第一次加800份用0.1mol/L盐酸调节pH为4.0的水、第二次加入640份用0.1mol/L的氢氧化钠溶液调节pH为7.0的水、第三次加入640份用0.1mol/L的氢氧化钠溶液调节pH为8.0的水，提取时间为第一次提取1小时，第二次提取0.5小时，第三次提取0.5小时，提取温度为90～95℃，提取结束，合并三次提取液，过滤，滤液减压浓缩至相对密度为1.08～1.12(25℃)，即得甘草泻心汤的提取液；所述减压浓缩得温度为60～80℃，真空度为-0.05～0.08MPa。进一步，所述对照品溶液的制备是取姜酮、盐酸黄连碱、甘草素、盐酸小檗碱、汉黄芩苷、黄芩素、6-姜辣素、甘草酸铵对照品，分别用体积分数为50％的甲醇溶解并稀释制成浓度为1mg/ml的溶液，作为姜酮对照品储备液、盐酸黄连碱对照品储备液、甘草素对照品储备液、盐酸小檗碱对照品储备液、汉黄芩苷对照品储备液、黄芩素对照品储备液、6-姜辣素对照品储备液、甘草酸铵对照品储备液，备用；另分别精密量取上述对照品储备液置于同一容量瓶中，用体积分数为50％的甲醇溶液稀释并定容至刻度，配制成复合对照品溶液，所述复合对照品溶液中，姜酮、盐酸黄连碱、甘草素、盐酸小檗碱、汉黄芩苷、黄芩素、6-姜辣素、甘草酸铵的浓度均为0.5mg/ml。进一步，所述超高效液相色谱法检测是精密吸取上述制得的对照品溶液、供试品溶液3μl注入超高效液相色谱仪，以外标法计算；所述超高效液相色谱仪的柱温为35℃，流速为0.35ml/min，波长范围为190～400nm。进一步优选为，上述超高效液相色谱法的流动项包括流动项A和流动项B，所述流动项A是体积分数为0.1％三氟乙酸水溶液，所述流动项B是体积比为甲醇：乙腈＝50：50，采用梯度洗脱。为了使得被检测成分能达到基线分离，满足含量检测要求，上述超高效液相色谱法的梯度洗脱程序，是按如下进行：时间(min)流动相A(％)流动相B(％)08020207525306535404060555050608020特定的流动项A与流动项B的组成成分，配合特定的梯度洗脱程序，可使得姜酮、盐酸黄连碱、甘草素、盐酸小檗碱、汉黄芩苷、黄芩素、6-姜辣素、甘草酸铵能在1小时时间内达到基线分离，满足含量检测要求，使得本专利技术可利用一个检测方法即可同时监测8种成分的含量，而流动项A中0.1％三氟乙酸保证被检测物质处于酸性环境，确保超高压液相色谱被检测物质的色谱峰不会出现拖尾峰，更加提高了本专利技术方法的准确度，使得本专利技术可高灵敏、高效率的监测甘草泻心汤中8种成分的含量。进一步，上述甘草泻心汤多成分含量的检测方法，可应用于以甘草泻心汤为组分的提取物、制剂的含量检测。本专利技术具有如下的有益效果：本专利技术一种甘草泻心汤多成分含量的检测方法，解决了甘草泻心汤因组方成分太多，检测过程姜酮、盐酸黄连碱、甘草素、盐酸小檗碱、汉黄芩苷、黄芩素、6-姜辣素、甘草酸铵等8种成分分离度不高、干扰多，无法利用一个含量分析方法同时监测8有效成分的技术问题，本专利技术检测方法8种有效成分分离度高，相邻两成分之间均能达到基线分离，该方法准确度高，加样回收率均为95％～108％之间，并且6个加样回收样品RSD均小于4％，线性良好，在对照品及样品检测浓度范围内，线性回归R均为0.999以上，精密度与中间精密度好，RSD均为5％以内，溶液稳定性好，12小时内样品溶液稳定，本专利技术方法操作简单，大大提高了工作效率和检测精度，可以更加全面，更加有效的控制甘草泻心汤以及相关制剂的产品质量。附图说明图1：为本专利技术实施例1复合对照品的超高效液相色谱图。图2：为本专利技术实施例1供试品溶液的超高效液相色谱图。图3：为本专利技术姜酮线性回归图。图4：为本专利技术盐酸黄连碱线性回归图。图5：为本专利技术甘草酸线性回归图。图6：为本专利技术盐酸小檗碱线性回归图。图7：为本专利技术汉黄芩苷线性回归图。图8：为本专利技术黄芩素线性回归图。图9：为本专利技术6-姜辣素线性回归图。图10：为本专利技术甘草酸铵线性回归图。具体实施方式下面通过实施例对本专利技术进行具体的描述，有必要在此指出的是以下实施例只用于对本专利技术进行进一步说明，不能理解为对本专利技术保护范围的限制，在不背离本专利技术精神和实质的情况下，对本专利技术方法、步骤或条件所作的修改或本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种甘草泻心汤多成分含量的检测方法，其特征在于，它包括供试品溶液的制备，对照品溶液的制备，超高效液相色谱法检测；其中，所述供试品溶液的制备是取甘草泻心汤的提取液，离心，离心结束取上清液，挥去溶剂，加甲醇溶液溶解并定容，然后用微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。/n

【技术特征摘要】
1.一种甘草泻心汤多成分含量的检测方法，其特征在于，它包括供试品溶液的制备，对照品溶液的制备，超高效液相色谱法检测；其中，所述供试品溶液的制备是取甘草泻心汤的提取液，离心，离心结束取上清液，挥去溶剂，加甲醇溶液溶解并定容，然后用微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。


2.如权利要求1所述的一种甘草泻心汤多成分含量的检测方法，其特征在于，所述甘草泻心汤提取液用量为100ml，所述离心后取上清液为5ml，所述甲醇溶液的体积分数为50％，所述定容为5ml的容量瓶，所述微孔滤膜的孔径为0.22微米。


3.如权利要求2所述的一种甘草泻心汤多成分含量的检测方法，其特征在于，所述甘草泻心汤的提取液按如下方法制备：
(1)分别取甘草、黄芩，半夏，大枣，黄连，干姜置于万能粉碎机中，分别粉碎并用1号筛和2号筛进行过筛，收集过1号筛但未过2号筛的粉末，备用；
(2)取重量份的甘草粉20份、黄芩粉15份，半夏粉13份，大枣粉12份，黄连粉5份，干姜粉15份置于适宜容器中，混合均匀，置于回流提取装置中，提取三次，第一次加800份用0.1mol/L盐酸调节pH为4.0的水、第二次加入640份用0.1mol/L的氢氧化钠溶液调节pH为7.0的水、第三次加入640份用0.1mol/L的氢氧化钠溶液调节pH为8.0的水，提取时间为第一次提取1小时，第二次提取0.5小时，第三次提取0.5小时，提取温度为90～95℃，提取结束，合并三次提取液，过滤，滤液减压浓缩至相对密度为1.08～1.12(25℃)，即得甘草泻心汤的提取液；所述减压浓缩得温度为60～80℃，真空度为-0.05～0.08MPa。


4.如权利按要求3所述的一种甘草泻心汤多成分含量的检测方法，其特征在于，所述对照品溶液的制备是取姜酮、盐酸黄连碱、甘草素、盐酸小檗碱、汉黄芩苷、黄芩素、6-姜辣素、甘草酸铵对照品，分别用体积分数为50％的甲醇溶解并稀释制成浓度为1mg/ml的溶液，作为姜酮对照品储备液、盐酸黄连碱对照品储备液、甘...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐红梅，朱买勋，翟少钦，陈春林，闫志强，付文贵，
申请(专利权)人：重庆市畜牧科学院，
类型：发明
国别省市：重庆;50