一种具有转糖基活性的α-半乳糖苷酶及克隆表达制造技术

本发明专利技术涉及涉及生物技术和分子生物学领域，更具体地，涉及一种α‑半乳糖苷酶及克隆表达方法。该方法包括利用解淀粉乳杆菌L6获取α‑半乳糖苷酶基因；将所述α‑半乳糖苷酶基因及表达载体进行酶切、连接以及转化；将所述转化后的重组质粒进行筛选；利用诱导剂将所述筛选后的重组质粒进行诱导表达。本申请首次对来自解淀粉乳杆菌的α‑Gal在大肠杆菌BL21中进行克隆表达，通过亲和层析的方法可以大量制备比较纯的酶液，具有较强的水解α‑半乳糖苷键的活性。

【技术实现步骤摘要】
一种具有转糖基活性的α-半乳糖苷酶及克隆表达
本专利技术涉及生物技术和分子生物学领域，更具体地，涉及一种具有转糖基活性的α-半乳糖苷酶及克隆表达。
技术介绍
α-半乳糖苷酶(α-GLA)属于外切糖苷酶，能够专一的水解不同化合物分子非还原端的α-半乳糖苷键，该酶存在于各种生物体内如细菌、真菌、植物、动物当中。该酶在食品、饲料、造纸、医药等行业具有广泛的应用价值，可以去除豆粕、豆制品中的胀气因子，缓解胀气反应，水解甘露糖主链上的α-半乳糖，提高凝胶能力进而改善纸浆的品质，水解神经酰胺三己糖苷末端的α-半乳糖基治疗法布里病，还可以用于血型的转换等。但是现有技术中，半乳糖苷酶基因的来源还比较单一，鲜有介绍来自于解淀粉乳杆菌L6的半乳糖苷酶基因在大肠杆菌BL21中进行克隆表达的方法。
技术实现思路
为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种α-半乳糖苷酶及克隆表达方法。一方面，提供一种具有转糖基活性的α-半乳糖苷酶的克隆表达，利用解淀粉乳杆菌L6获取α-半乳糖苷酶基因；将所述α-半乳糖苷酶基因及表达载体本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种具有转糖基活性的α-半乳糖苷酶的克隆表达，其特征在于，利用解淀粉乳杆菌L6获取α-半乳糖苷酶基因；/n将所述α-半乳糖苷酶基因及表达载体进行酶切、连接以及转化；/n将所述转化后的重组质粒进行筛选；/n利用诱导剂将所述筛选后的重组质粒进行诱导表达。/n

【技术特征摘要】
1.一种具有转糖基活性的α-半乳糖苷酶的克隆表达，其特征在于，利用解淀粉乳杆菌L6获取α-半乳糖苷酶基因；
将所述α-半乳糖苷酶基因及表达载体进行酶切、连接以及转化；
将所述转化后的重组质粒进行筛选；
利用诱导剂将所述筛选后的重组质粒进行诱导表达。


2.根据权利要求1所述的具有转糖基活性的α-半乳糖苷酶的克隆表达，其特征在于，所述利用解淀粉乳杆菌获取α-半乳糖苷酶基因包括：
提取解淀粉乳杆菌L6中的α-半乳糖苷酶基因组DNA；
以所述α-半乳糖苷酶基因组DNA为模板，以GLA-F和GLA-R作为引物，利用PCR扩增α-半乳糖苷酶DNA序列。


3.根据权利要求2所述的具有转糖基活性的α-半乳糖苷酶的克隆表达，其特征在于，所述利用PCR扩增α-半乳糖苷酶DNA序列的反应程序包括：
98℃预变性30s；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸2.5min，扩增30个循环，72℃总延伸10min。


4.根据权利要求1所述的具有转糖基活性的α-...

【专利技术属性】
技术研发人员：蓝莹儿，费永涛，刘功良，李理，白卫东，
申请(专利权)人：仲恺农业工程学院，
类型：发明
国别省市：广东;44