【技术实现步骤摘要】
一种基于二乙胺基乙基琼脂糖微球和球形红细胞的循环肿瘤细胞富集方法
本专利技术属于生物医药
，涉及循环肿瘤细胞的富集方法，具体涉及一种基于二乙胺基乙基(DEAE)琼脂糖微球和球形红细胞的循环肿瘤细胞富集方法。
技术介绍
肿瘤局部或区域的复发和远处转移，对于肿瘤的早期诊断以及肿瘤治愈提出了严峻的考验。近些年分子生物学及临床研究显示，循环肿瘤细胞(circulatingtumorcells,CTCs)导致了肿瘤的侵袭和微转移过程的发生。CTCs是由原本的肿瘤细胞从原发肿瘤脱落，进入人体的血液系统所形成的，CTCs经过外周血的循环、扩散，最终转移到人体的其他组织和器官，进而形成与原发部位肿瘤相同类型的继发肿瘤，即造成了肿瘤和癌症的转移和复发。通过捕获外周血中的循环肿瘤细胞，分析外周血中循环肿瘤细胞数量随时间的变化，可以更早预测肿瘤预后，为癌症用药的治疗反应检测和放化疗疗效分析提供一个简便易行的方法和手段。由于外周血中的CTCs含量很低，每毫升血液中仅有几个至几十个CTCs，而背景血细胞含量则达到了109量级，对...
【技术保护点】
1.一种基于DEAE琼脂糖微球和球形红细胞的循环肿瘤细胞富集方法，其特征在于：包括如下步骤：往含有循环肿瘤细胞和白细胞的待分析样本中加入表面修饰FA、RGD或肿瘤细胞靶向抗体的球形红细胞，孵育使红细胞包裹肿瘤细胞后，再加入DEAE琼脂糖微球，孵育使白细胞吸附在DEAE琼脂糖微球上，自然沉降或离心使吸附了白细胞的DEAE琼脂糖微球沉淀，收集上清得到去除了白细胞后的纯化的循环肿瘤细胞。/n
【技术特征摘要】
1.一种基于DEAE琼脂糖微球和球形红细胞的循环肿瘤细胞富集方法，其特征在于：包括如下步骤：往含有循环肿瘤细胞和白细胞的待分析样本中加入表面修饰FA、RGD或肿瘤细胞靶向抗体的球形红细胞，孵育使红细胞包裹肿瘤细胞后，再加入DEAE琼脂糖微球，孵育使白细胞吸附在DEAE琼脂糖微球上，自然沉降或离心使吸附了白细胞的DEAE琼脂糖微球沉淀，收集上清得到去除了白细胞后的纯化的循环肿瘤细胞。
2.根据权利要求1所述的基于DEAE琼脂糖微球和球形红细胞的循环肿瘤细胞富集方法，其特征在于：所述的球形红细胞表面FA、RGD或肿瘤细胞靶向抗体的修饰通过使用DSPE-PEG-X分子修饰实现，X为FA、RGD或biotin；红细胞与DSPE-PEG-X的用量关系优选为5×107个红细胞:0.1mg～1mgDSPE-PEG-X。
3.根据权利要求1所述的基于DEAE琼脂糖微球和球形红细胞的循环肿瘤细胞富集方法，其特征在于：
表面修饰FA或RGD的球形红细胞通过包括以下步骤的方法制备得到：往红细胞分散液中加入DSPE-PEG-FA或DSPE-PEG-RGD，孵育后，离心、洗涤得到表面修饰叶酸或RGD的球形红细胞；
表面修饰肿瘤细胞靶向抗体的球形红细胞通过包括以下步骤的方法制备得到：往红细胞分散液中加入DSPE-PEG-biotin，孵育后，离心、洗涤获得biotin修饰的红细胞；将biotin修饰的红细胞加到SA溶液中混匀，孵育后，离心洗涤获得SA修饰的红细胞；将SA修饰的红细胞加到生物素化抗体溶液中混匀，孵育后，离心洗涤得到表面修饰肿瘤细胞靶向抗体的球形红细胞。
4.根据权利要求1所述的基于DEAE琼脂糖微球和球形红细胞的循环肿瘤细胞富集方法，其特征在于：
表面修饰FA或RGD的球形红细胞通过包括以下步骤的方法制备得到：根据红细胞分散液的红细胞含量，每定量取出5×107个红细胞，定量加入含有0.1mg～1mg分子量为2000的DSPE-PEG-FA或DSPE-PEG-RGD的PBS溶液，在4℃～37℃下静置孵育0.5min～30min，用PBS离心洗涤得到表面修饰叶酸或RGD的球形红细胞；
表面修饰肿瘤细胞靶向抗体的球形红细胞通过包括以下步骤的方法制备得到：根据红细胞分散液的红细胞含量，每定量取出5×107个红细胞，定量加入含有0.1mg～1mg分子量为2000的DSPE-PEG-biotin的PBS溶液，4℃～37℃下静置孵育0.5min～30min，用PBS离心洗涤得到表面修饰biotin的红细胞；将biotin修饰的红细胞与50～1000μL浓度为100μg/mL的SA溶液混合均匀，...
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