一种检测泛素结合酶抗体的试剂盒及使用方法技术

本发明专利技术公开了一种检测泛素结合酶抗体的试剂盒及使用方法，属于生物医学领域。一种检测泛素结合酶抗体的试剂盒，包括：用于检测泛素结合酶抗体的溶液；所述溶液包含用于标记泛素结合酶抗体的活性酯和非放射性溶液。所述活性酯包括硫代钌衍生物活性酯和生物素聚乙二醇活性酯。所述试剂盒还包括96孔平板、链霉亲和素石墨烯平板、0.01mol/L的PBS溶液、5％的BSA溶液和PBST溶液。所述链霉亲和素石墨烯平板为链霉素标记的MSD96孔板。与现有技术相比，本申请的试剂盒具有较高的灵敏度和特异性，无放射物质使用，操作简便，能检测微量血清中的抗体量，具有很好的临床应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种检测泛素结合酶抗体的试剂盒及使用方法
本专利技术涉及生物医学领域，具体涉及一种检测泛素结合酶抗体的试剂盒及使用方法。
技术介绍
经典T1DM是一种抗原特异性T细胞介导的特异性损伤胰岛β细胞的自身免疫性疾病，胰岛自身抗体在预测和诊断T1DM中起重要作用。联合检测GADA、IAA、IA-2A和ZnT8A四种胰岛自身抗体可以预测85％或更多的T1DM患者或T1DM高危人群。然而，高达15％的临床诊断T1DM患者目前已知的所有胰岛自身抗体均为阴性。因此，发掘新的胰岛自身抗体或建立更精确的检测方法是增加自身抗体阳性的T1DM患者的主要途径。针对现有技术的不足，提供一种检测泛素结合酶抗体的试剂盒及使用方法。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术提出了一种检测泛素结合酶抗体的试剂盒。本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：一种检测泛素结合酶抗体的试剂盒，包括：用于检测泛素结合酶抗体的溶液；所述溶液包含用于标记泛素结合酶抗原蛋白的活性酯、泛素结合酶抗原蛋白和非放射性溶液。进一步地，所述活性酯包括硫代钌衍生物活性酯和生物素聚乙二醇活性酯。进一步地，所述试剂盒还包括96孔平板、链霉亲和素石墨烯平板、PBS溶液、BSA溶液、PBST溶液和Block-A溶液。进一步地，所述PBS溶液为1×PBS溶液。进一步地，所述BSA溶液的浓度为5％。进一步地，Block-A溶液的浓度为3％。进一步地，所述链霉亲和素石墨烯平板为链霉素标记的MSD96孔板。<br>本专利技术还提供一种检测泛素结合酶抗体的制剂在用于检测存在T1DM的受试者的方法中使用的试剂中的应用，所述方法包括所述试剂盒的使用方法，包括以下步骤：使用硫代钌衍生物活性酯和生物素聚乙二醇活性酯分别标记重组的泛素结合酶的抗原蛋白；将标记后的泛素结合酶的抗原蛋白加入5％BSA的溶液进行稀释；将96孔平板的每孔依次加入16μl的1×PBS溶液、4μl待测血清和稀释后的溶液，并将96孔平板中的混合溶液搅拌均匀；将96孔平板放置在振荡器中低速振荡1h，振荡结束后将96孔平板在4℃的环境中储存6-12小时；将装有150μl/孔的3％Block-A溶液的MSD96孔板在4℃的环境中储存6-12小时；将储存后的MSD96孔板使用150μl的PBST缓冲液洗涤3次；将96孔平板中的混合溶液转移至MSD96孔板中，将装有混合溶液的MSD96孔板避光放置在在振荡器中低速振荡1h；将振荡结束后的MSD96孔板使用150μl的PBST缓冲液洗涤3次，洗涤结束后将MSD96孔板加入150μl/孔的Readingbuffer溶液于MSD计数仪上进行计数；根据MSD计数仪的输出结果计算泛素结合酶抗体的抗体指数。本专利技术的有益效果：本专利技术的一种检测泛素结合酶抗体的试剂盒通过检测泛素结合酶抗体能够快速确定T1DM患者的情况；并且试剂盒具有较高的灵敏度和特异性，无放射物质使用，操作简便，能检测微量血清中的抗体量，具有很好的临床应用价值。附图说明下面结合附图对本专利技术作进一步的说明。图1为本申请的UBE2L3-Ab在不同年龄的T1DM患者中的阳性率图。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本专利技术保护的范围。在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“示例”、“具体示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本专利技术的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。以某医院内分泌科门诊及病房就诊的1型糖尿病患者193例，入组标准为：根据1999年世界卫生组织(WHO)的诊断标准及分型建议(26)临床诊断T1DM并排除继发性糖尿病、妊娠糖尿病及其它自身免疫性疾病患者；患者依赖外源性胰岛素治疗；使用放射免疫配体法检测至少有一种胰岛自身抗体GADA，IAA，IA-2A或ZnT8阳性；每位受试者清晨空腹留取静脉血用于检测，并进行相关临床资料(姓名、性别、年龄、发病时间、病程、身高、体重、糖化血红蛋白、C肽、酮症及低血糖发作情况、胰岛素用量等)的记录，进行身高、体重等体格检查。具体实验方法：使用电化学发光法，即用硫代钌衍生物活性酯(Sulfo-tag)和生物素聚乙二醇活性酯(Biotin)分别标记重组的泛素结合酶(UBE2L3)抗原蛋白(可从https://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/7332查询获知)，用已标记的抗原结合血清样本中的抗体：在96孔平板中依次加入16μl的1×PBS溶液，4μl待测血清，5％BSA稀释的已与Sulfo-tag和Biotin连接的UBE2L3抗原，混匀后置于振荡器室温低速振荡1h，然后将96孔平板放置在4℃的冰箱6-12小时。在链霉素标记的MSD96孔板中预加入150μl/孔的3％Block-A溶液，并将MSD96孔板放在4℃的冰箱6-12小时。放置结束后用150μlPBST缓冲液洗涤MSD96孔板3次。依次从96孔平板各孔中吸取30μl的混合液转移至MSD96孔板中；将MSD96孔板室温避光震1小时后，用PBST缓冲液再次洗涤3次后加入150μl的Readingbuffer溶液于MSD计数仪上进行计数；通过公式计算抗体指数：抗体指数＝(待测血清-阴性质控)/(阳性质控-阴性质控)。实验结果：1、确定实验人群的UBE2L3-Ab的阳性切点值采用ECL检测124名健康人的UBE2L3-Ab，UBE2L3-Ab指数中位数为-0.065(-0.036，0.087)，取99％的百分位数，UBE2L3-Ab的阳性切点值为0.037。2、T1DM组阳性率显著高于健康对照组UBE2L3-Ab在193例初发T1DM患者中19例阳性，阳性率为9.84％，282例健康对照者中3例阳性，阳性率为1.06％，T1DM组明显高于健康对照组，差异有统计学意义(P<0.005)。3、不同年龄组抗体的阳性率对T1DM人群按诊断时年龄分为四个亚组，分别为为<18岁、18-29岁、30-39岁和>40岁组。UBE2L3抗体的阳性率在0～18岁组为10.96％(8/73)，19～29岁组为16.67％(9/54)，29～39岁组为2.94％(1/34)，40岁以上组为3.13％(1/32)。UBE2L3-Ab的阳性率在发病18-29岁时达到高峰，然后下降，与其他三个亚组相比，>40岁亚组之间存在显著差异(均P<0.05；如图本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测泛素结合酶抗体的试剂盒，其特征在于，包括：用于检测泛素结合酶抗体的溶液；所述溶液包含用于标记泛素结合酶抗原蛋白的活性酯、泛素结合酶抗原蛋白和非放射性溶液。/n

【技术特征摘要】
1.一种检测泛素结合酶抗体的试剂盒，其特征在于，包括：用于检测泛素结合酶抗体的溶液；所述溶液包含用于标记泛素结合酶抗原蛋白的活性酯、泛素结合酶抗原蛋白和非放射性溶液。


2.根据权利要求1所述的检测泛素结合酶抗体的试剂盒，其特征在于，所述活性酯包括硫代钌衍生物活性酯和生物素聚乙二醇活性酯。


3.根据权利要求2所述的检测泛素结合酶抗体的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括96孔平板、链霉亲和素石墨烯平板、PBS溶液、BSA溶液、PBST溶液和Block-A溶液。


4.根据权利要求3所述的检测泛素结合酶抗体的试剂盒，其特征在于，所述PBS溶液为1×PBS溶液。


5.根据权利要求3所述的检测泛素结合酶抗体的试剂盒，其特征在于，所述BSA溶液的浓度为5％。


6.根据权利要求3所述的检测泛素结合酶抗体的试剂盒，其特征在于，Block-A溶液的浓度为3％。


7.根据权利要求3所述的检测泛素结合酶抗体的试剂盒，其特征在于，所述链霉亲和素石墨烯平板为链霉素标记的MSD96孔板。

【专利技术属性】
技术研发人员：刘煜，钱莉，朱昱晓，
申请(专利权)人：南京医科大学附属逸夫医院，
类型：发明
国别省市：江苏;32