一种检测男性恶性肿瘤标志物的检测芯片及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供一种检测男性恶性肿瘤标志物的检测芯片及其制备方法和应用，检测男性恶性肿瘤标志物的检测芯片，包括固相载体和固定在固相载体表面的捕获抗体；捕获抗体包括：抗AFP

A detection chip for detecting male malignant tumor markers and its preparation method and Application

【技术实现步骤摘要】
一种检测男性恶性肿瘤标志物的检测芯片及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于体外免疫分析
，具体地，涉及一种检测男性恶性肿瘤标志物的检测芯片及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]癌症(cancer)，医学术语亦称恶性肿瘤(malignant neoplasm)，为由控制细胞生长增殖机制失常而引起的疾病。癌细胞除了生长失控外，还会局部侵入周边正常组织(浸润，invasion)甚至经由体内循环系统或淋巴系统转移到身体其他部分。癌症是一多因子疾病。其病因可能跟遗传、基因突变,老年化、或环境因子等有关。由于发病率及死亡率高，严重威胁大众的健康。
[0003]2018年全球男性新增9456418例癌症病例，发病率为245.6/10万，ASIRW为218.6/10万。男性病例里肺癌最常见(14.5％)，其次是前列腺癌(13.5％)、结直肠癌(10.9％)。男性癌症死亡病例5 385 640例，死亡率为139.9/10万，ASMRW为122.7/10万。肺癌也是男性死亡的首要原因(22.0％)，肝癌(10.2％)和胃癌(9.5％)分别居第2、3位。全性别癌症标化发病率为201.7/10万，男性发病率高于女性，分别为223.0/10万和182.6/10万。全性别标化死亡率为130.1/10万，男性死亡率(166.6/10万)明显高于女性(95.2/10万)。据统计，男性最常见的癌症是肺癌、胃癌、结直肠癌、肝癌及食管癌。与全球整体情况相比，男性前5位的癌种标化发病率均高于全球平均水平，我国男性前列腺癌发病率居第6位，食管癌居第5位，男性食管癌的预计发病例数占全球所有男性食管癌的53.6％。除此之外，约有近一半的男性胃癌和食管癌新发病例发生在中国。以死亡例数排序，男性死亡前5位的分别为肺癌、肝癌、胃癌、食管癌及结直肠癌，这5个癌种的标化死亡率均高于全球水平。近年来，由于受到环境污染、不良生活方式及人口老龄化的影响，恶性肿瘤的发病率呈逐年上升趋势，而早诊断、早治疗是提高肿瘤患者生存率和治愈率的关键。
[0004]肿瘤标志物一般是指在肿瘤患者体液或组织中存在的由肿瘤组织及细胞所产生的异常表达的活性物质,包括激素、酶、特异性和非特异性的糖蛋白或糖脂等一大类物质。肿瘤标志物的检测已成为肿瘤临床诊断的常规手段之一,作为早期发现无症状微灶肿瘤的有效途径，可先于超声、CT、MRI或PET-CT等物理检查发现肿瘤。针对男性，常见的恶性肿瘤标志物有AFP、CA125、CA199、CA724、CEA、NSE、PGI、PGII、SCCA1、fPSA、tPSA、TG。
[0005]AFP是一种糖蛋白，它属于白蛋白家族，主要由胎儿肝细胞及卵黄囊合成。AFP具有很多重要的生理功能，包括运输功能、作为生长调节因子的双向调节功能、免疫抑制、T淋巴细胞诱导凋亡等。甲胎蛋白与肝癌及多种肿瘤的发生发展密切相关，在多种肿瘤中均可表现出较高浓度，可作为多种肿瘤的阳性检测指标。目前临床上主要作为原发性肝癌的血清标志物，用于原发性肝癌的诊断及疗效监测。此外，睾丸癌，卵巢肿瘤，恶性畸胎瘤，胰腺癌，胃癌，肠癌，肺癌等患者AFP含量也增高。
[0006]CA125是1981年由Bast等从上皮性卵巢癌抗原检测出可被单克隆抗体OC125结合
的一种糖蛋白，来源于胚胎发育期体腔上皮，在正常卵巢组织中不存在，因此最常见于上皮性卵巢肿瘤(浆液性肿瘤)患者的血清中，其诊断的敏感性较高，但特异性较差。CA125不仅是卵巢癌的特异性标志物，输卵管腺癌、子宫内膜癌、宫颈癌、胰腺癌、肠癌、乳腺癌和肺癌患者CA125的水平也会升高。对于其他非卵巢恶性肿瘤，CA125的阳性率判断标准如下：乳腺癌40％、胰腺癌50％、胃癌47％、肺癌44％、结肠直肠癌32％、其他妇科肿瘤43％。对于肺癌患者，CA125的阳性率随肺癌分期进展而明显升高，临床研究表明：肺癌I期阳性率为7.8％，II期阳性率为18.6％，III期为32.5％，IV期为53.9％，总体阳性率为26.9％。
[0007]CA199属低聚糖肿瘤相关抗原，为一种新的肿瘤标志物，为细胞膜上的糖脂质，分子量大于1000kD。是迄今报道的对胰腺癌敏感性最高的标志物。在血清中它以唾液粘蛋白形式存在，分布于正常胎儿胰腺、胆囊、肝、肠和正常成年人胰腺、胆管上皮等处。是存在于血液循环的胃肠道肿瘤相关抗原。胰腺癌、肝胆系癌、胃癌、结直肠癌的CA 199水平分别是正常均值的683、535、279、115倍，其中CA199阳性率以胰腺癌为最高，故CA199是胰腺癌较好的标志。CA724是一种由cc49和B72.3两株单抗识别的粘蛋白样的高分子量糖蛋白，分子量为220-400KD，正常人血清中含量<6U/mL，异常升高在各种消化道肿瘤、卵巢癌均可产生。CA724对于胃癌的检测特异性较高，以>6U/mL为临界值，是检测胃癌和各种消化道癌症的化验标志之一。CA724这也是一个非特异性肿瘤标志物，此指标升高不代表就是患了肿瘤，主要见于胃肠道，对胃癌、卵巢粘液性囊腺癌和非小细胞肺癌敏感度较高，对胆道系统肿瘤、结直肠癌、胰腺癌等亦有一定的敏感性。
[0008]CEA是1965年由Gold和Freedman首先从结肠癌和胚胎组织中提取的一种肿瘤相关抗原，是一种具有人类胚胎抗原特性的酸性糖蛋白，存在于内胚层细胞分化而来的癌症细胞表面，是细胞膜的结构蛋白。以往把CEA作为早期诊断结肠癌和直肠癌的特异性标志物，经大量的临床实践，发现不仅胃肠道的恶性肿瘤CEA值可以升高，在大肠癌、胰腺癌、胃癌、乳腺癌、甲状腺髓样癌、肝癌、肺癌、卵巢癌、泌尿系肿瘤等其他恶性肿瘤的血清中也有升高。因此，癌胚抗原是一种广谱肿瘤标志物。虽然不能作为诊断某种恶性肿瘤的特异性指标，但在恶性肿瘤的鉴别诊断、病情监测、疗效评价等方面，仍有重要临床价值。
[0009]NSE(神经元特异性烯醇化酶)是神经元和神经内分泌细胞所特有的一种酸性蛋白酶，神经内分泌肿瘤的特异性标志，如神经母细胞瘤、甲状腺髓质癌和小细胞肺癌(70％升高)，可用于鉴别诊断、病情监测、疗效评价和复发预报。NSE检测在肺癌诊断中、肺癌治疗监测中以及肺癌预后评估中都具有重要的意义。此外，NSE检测也可应用于其他肿瘤疾病的诊断、治疗中，如：22％非肺部恶性疾病患者(任何期别肿瘤)NSE浓度高于25ng/mL；脑部肿瘤如神经胶质瘤、脑脊膜瘤、纤维神经瘤和神经瘤仅偶尔有血清NSE值升高；在原发脑瘤或脑转移性瘤10和恶性黑色素瘤及肾上腺嗜铬细胞瘤(PC)患者中，可发现中枢神经系统CNS的NSE值升高；14％器官排斥和46％转移性肾癌患者NSE浓度升高。PG(pepsinogen，胃蛋白酶原)可分为PGI和PGII两种亚型，是由胃部分泌的参与消化的胃蛋白酶的前体，通常约1％的PG可通过胃黏膜进入血液循环。胃蛋白酶原在pH﹤5.0时活化为胃蛋白(pepsin)。PGⅠ是胃底腺的主细胞和颈粘液细胞分泌；PGⅡ除主细胞和颈粘液细胞分泌外，幽门腺和十二指肠腺亦可产生。利用慢性萎缩性胃炎和胃癌间，以及胃蛋白酶原本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测男性恶性肿瘤标志物的检测芯片，包括固相载体和固定在所述固相载体表面的捕获抗体，其特征在于：所述捕获抗体包括：抗AFP-捕获抗体、抗CA125-捕获抗体、抗TG-捕获抗体、抗CA199-捕获抗体、抗CA724-捕获抗体、抗CEA-捕获抗体、抗fPSA-捕获抗体、抗tPSA-捕获抗体、抗NSE-捕获抗体、抗PGI-捕获抗体、抗PGII-捕获抗体、抗SCCA1-捕获抗体中的至少两种；所述固相载体选自氨基化玻片或者醛基化玻片。2.如权利要求1所述检测男性恶性肿瘤标志物的检测芯片，其特征在于：所述固相载体为醛基化玻片。3.如权利要求1所述检测男性恶性肿瘤标志物的检测芯片，其特征在于，所述捕获抗体包括：所述抗AFP-捕获抗体、所述抗CA125-捕获抗体、所述抗TG-捕获抗体、所述抗CA199-捕获抗体、所述抗CA724-捕获抗体、所述抗CEA-捕获抗体、所述抗fPSA-捕获抗体、所述抗tPSA-捕获抗体、所述抗NSE-捕获抗体、所述抗PGI-捕获抗体、所述抗PGII-捕获抗体和所述抗SCCA1-捕获抗体。4.如权利要求3所述检测男性恶性肿瘤标志物的检测芯片，其特征在于：所述抗AFP-捕获抗体为购自广州瑞博奥生物科技有限公司的、货号为119-14002的抗体；所述抗CA125-捕获抗体为购自广州瑞博奥生物科技有限公司的、货号为119-16017的抗体；所述抗TG-捕获抗体为购自赛默飞世尔科技的、货号为MA1-21672的抗体；所述抗CEA-捕获抗体选为购自广州瑞博奥生物科技有限公司的、货号为MD-14-0828的抗体；所述抗CA199-捕获抗体为购自菲鹏生物股份有限公司的、货号为CA199-McAb2#的抗体；所述抗CA724-捕获抗体为购自菲鹏生物股份有限公司的、货号为CA724-McAb1#的抗体；所述抗fPSA-捕获抗体为购自上海鑫乐生物科技有限公司的、货号为XL02584的抗体；所述抗tPSA-捕获抗体选自购自上海一基实业有限公司的、货号为ER558665的抗体或购自广州瑞博奥生物科技有限公司的、货号为DS-MB-02167的抗体；所述抗NSE-捕获抗体为购自广州瑞博奥生物科技有限公司的、货号为DS-MB-02002的抗体；所述抗PGI-捕获抗体为购自OriGene Technologies的、货号为AP21370BT-N的抗体；所述抗PGII-捕获抗体为购自的南京欧凯生物科技有限公司、货号为K28c9的抗体；所述抗SCCA1-捕获抗体为购自广州瑞博奥生物科技有限公司的、货号为130-10461的抗体。5.如权利要求1
–
4任一项所述检测男性恶性肿瘤标志物的检测芯片的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.将所述捕获抗体与pH＝7.4
±
0.5磷酸盐缓冲液混合，形成捕获抗体混合物，所述磷酸盐缓冲液中含有0
–
10％的糖类物质；S2.将所述捕获抗体混合液点样固定于所述固相载体表面的点样孔。
6.如权利要求5所述检测男性恶性肿瘤标志物的检测芯片的制备方法，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕志强，胡守旺，黄若磐，
申请(专利权)人：瑞博奥广州生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：