LDLR基因突变体及其应用制造技术

本发明专利技术属于LDLR基因研究领域，具体公开了LDLR基因突变体及其应用。包括与野生型LDLR基因相比，具有c.2517‑2518insCA突变的核酸；以及与野生型LDLR相比，具有p.C839fs突变的多肽。还涉及包含有前述核酸和/或前述基因突变的构建体，以及用于制备防治高胆固醇血症药物的质粒的制备方法，包括下述步骤以野生型LDLR基因为模版，扩增得突变LDLR cDNA片段，酶切DNA双链中腺嘌呤N6位甲基化的GATC序列，纯化突变片段，突变片段与表达载体进行双酶切、酶连得表达质粒，制质粒菌液，从质粒菌液中提取质粒。本发明专利技术发现了LDLR基因的新的突变位点，对该突变位点的检测可以用于高胆固醇血症患者的辅助诊断，并且可进一步应用于高胆固醇血症患者的分子诊断。

【技术实现步骤摘要】
LDLR基因突变体及其应用
本专利技术属于LDLR基因研究领域，尤其涉及LDLR基因突变体及其应用。
技术介绍
家族性高胆固醇血症(Familialhypercholesterolemia，FH)是一种严重的常染色体显性单基因遗传性疾病。世界范围内FH杂合患者的发病率为1/500，成为最常见的代谢性疾病之一。纯合子患者症状严重，发病率为1/1000000，血浆低密度脂蛋白胆同醇(Lowdensitylipoproteincho1esterol，LDL-c)水平大幅度增高，多部位肌腱黄色瘤和早发动脉粥样硬化(Atherosclerosis，As)，严重者青少年时期可发生冠心病甚至心梗死亡。LDLR基因突变是FH的主要病理基础，在临床确诊的FH患者中约50％可检测到LDLR基因突变。LDLR基因位于第19号染色体短臂(Chl9p13.1.13.3)，全长45kb，由18个外显子和17个内含子组成，编码含有839个氨基酸的前体蛋白。LDLR基因外显子区域可与LDLR蛋白7个结构域相对应：(1)启动子翻译信号区域；(2)外显子l编码的5’端序列本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.核酸，其特征在于，包括含下列目标片段，/n所述目标片段与野生型LDLR基因相比，所述核酸具有c.2517-2518insCA突变。/n

【技术特征摘要】
1.核酸，其特征在于，包括含下列目标片段，
所述目标片段与野生型LDLR基因相比，所述核酸具有c.2517-2518insCA突变。


2.根据权利要求1所述的核酸，其特征在于，所述核酸为DNA。


3.多肽，其特征在于，
与野生型LDLR相比，所述多肽具有p.C839fs突变。


4.基因突变，其特征在于，与野生型LDLR基因相比，所述基因突变具有c.2517-2518insCA突变。


5.生物模型在制备筛选制剂中应用，其特征在于，所述生物模型至少携带下列之一：
a.权利要求1所述的核酸；
b.权利要求3所述的多肽；
c.权利要求4所述的基因突变。


6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述筛选制剂为筛选家族性高胆固醇血症的制剂。


7.筛选家族性高胆固醇血症生物样品的试剂盒，其特征在于，包含有
能检测LDLR基因突变体的试剂，与野生型LDLR基因相比，所述LDLR基因突变体具有c.2517-2518insCA突变；
优选的，所述LDLR基因突变体至少为下述中之一：
a.权利要求1所述的核酸；
b.权利要求3所述的多肽；
c.权利要求4所述的基因突变。


8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂为核酸探针或引物；优选的
所述引物的核苷酸序列包括：
序列为ATGGTACGATGCCCGTGTTT的正向引物，和/或
序列为CTGAATGAGCGCACAGAAGC的反向引物；
核酸探针核酸序列包括：
序列为CCCTACAGTGCTCCTCGTC的正向探针，和/或
序列为CATGGGCTCTGGCTTTCT的反向探针。


9.构建体，其特征在于，包含有权利要求1所述的核酸或权利要求4所述的基因突变。


10.重组细胞，其特征在于，所述重组细胞是通过权利要求9所述的构建...

【专利技术属性】
技术研发人员：程翔，查灵凤，王景林，
申请(专利权)人：华中科技大学同济医学院附属协和医院，
类型：发明
国别省市：湖北;42