基于载体VTvaf17的基因治疗制造技术

基于下述基因治疗DNA载体产生基因治疗DNA载体，所述基因治疗DNA载体用于治疗与骨发生、骨和软骨组织形成和再生障碍相关的疾病，在骨折的情况下，包括骨的脆性增加，骨矿化的减少，用于改善骨植入物的骨诱导。基因治疗DNA载体含有COL1A1、COL1A2、BMP2或BMP7治疗基因的编码区。产生或使用携带治疗性基因的基因治疗DNA载体的方法。通过上述携带基因治疗DNA载体VTvaf17‑COL1A1、VTvaf17‑COL1A2、VTvaf17‑BMP2或VTvaf17‑BMP7的方法获得大肠杆菌菌株SCS110‑AF/VTvaf17‑COL1A1、SCS110‑AF/VTvaf17‑COL1A2、SCS110‑AF/VTvaf17‑BMP2或SCS110‑AF/VTvaf17‑BMP7。产生携带COL1A1，或COL1A2，或BMP2，或BMP7治疗性基因的基因治疗DNA载体的方法以工业规模使用。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】基于载体VTvaf17的基因治疗专利
本专利技术涉及基因工程，并可用于生物技术、医学、农业以制作基因治疗产品。也就是说，可以利用产生的含有治疗性基因的基因治疗DNA载体将其递送到经历该基因表达减少或不足的人类和动物的细胞中，从而确保所期望的治疗效果。专利技术背景基因治疗是一种创新的医学方法，其旨在通过将新的遗传物质递送至患者的细胞、组织或器官，以补偿或抑制突变体基因的功能和/或治疗遗传病症来治疗遗传性和获得性疾病。基因治疗的目的，在大多数情况下，是用提供这些基因编码的蛋白质分子的转录和进一步翻译的基因注射生物体。在本专利技术的描述中，基因表达是指产生具有由该基因编码的氨基酸序列的蛋白质分子。选自基因组COL1A1、COL1A2、BMP2、BMP7基因组的基因在人和动物生物体中的骨和软骨组织的形成中起着重要作用。表明了某些情况下通过编码这些蛋白质的正常基因表达的紊乱所证实的这些蛋白质的低/不足的浓度与各种人类疾病的相关性。例如，COL1A1和COL1A2基因的突变导致遗传性结缔组织疾病，即成骨不全，伴随着频繁的骨折(YahyaevaG本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.基于基因治疗DNA载体VTvaf17的基因治疗DNA载体，用于治疗与骨发生，骨和软骨组织形成和再生的障碍相关的疾病，用于改善骨植入物的骨诱导，经由增加人和动物中的COL1A1治疗性基因的表达来实现，所述疾病由如下引起：包括成骨细胞和成软骨细胞的多种类型细胞的生长、分化和凋亡的脱调节，间充质干细胞向成软骨细胞和成骨细胞的较慢分化，胶原合成、碱性磷酸酶活性、骨钙素合成、细胞外基质的合成及其随后的矿化的减少，尤其包括在骨折的情况下，骨的脆性增加，骨矿化的减少，其中基因治疗DNA载体具有克隆到基因治疗DNA载体VTvaf17的COL1A1治疗性基因的编码区，从而产生具有核苷酸序列SEQID No....

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180904 RU 20181317081.基于基因治疗DNA载体VTvaf17的基因治疗DNA载体，用于治疗与骨发生，骨和软骨组织形成和再生的障碍相关的疾病，用于改善骨植入物的骨诱导，经由增加人和动物中的COL1A1治疗性基因的表达来实现，所述疾病由如下引起：包括成骨细胞和成软骨细胞的多种类型细胞的生长、分化和凋亡的脱调节，间充质干细胞向成软骨细胞和成骨细胞的较慢分化，胶原合成、碱性磷酸酶活性、骨钙素合成、细胞外基质的合成及其随后的矿化的减少，尤其包括在骨折的情况下，骨的脆性增加，骨矿化的减少，其中基因治疗DNA载体具有克隆到基因治疗DNA载体VTvaf17的COL1A1治疗性基因的编码区，从而产生具有核苷酸序列SEQIDNo.1的基因治疗DNA载体VTvaf17-COL1A1。


2.基于基因治疗DNA载体VTvaf17的基因治疗DNA载体，用于治疗与骨发生，骨和软骨组织形成和再生的障碍相关的疾病，用于改善骨植入物的骨诱导，以及作为基于旨在降低异位骨化风险的重组成骨因子的药物的替代方案，经由增加人和动物中的COL1A2治疗性基因的表达来实现，所述疾病由如下引起：包括成骨细胞和成软骨细胞的多种类型细胞的生长、分化和凋亡的脱调节，间充质干细胞向成软骨细胞和成骨细胞的较慢分化，胶原合成、碱性磷酸酶活性、骨钙素合成、细胞外基质的合成及其随后的矿化的减少，尤其包括在骨折的情况下，骨的脆性增加，骨矿化的减少，其中基因治疗DNA载体具有克隆到基因治疗DNA载体VTvaf17的COL1A2治疗性基因的编码区，从而产生具有核苷酸序列SEQIDNo.2的基因治疗DNA载体VTvaf17-COL1A2。


3.基于基因治疗DNA载体VTvaf17的基因治疗DNA载体，用于治疗与骨发生，骨和软骨组织形成和再生障碍相关的疾病，用于改善骨植入物的骨诱导，以及作为基于旨在降低异位骨化风险的重组成骨因子的药物的替代方案，经由增加人和动物中的BMP2治疗性基因的表达来实现，所述疾病由如下引起：包括成骨细胞和成软骨细胞的多种类型细胞的生长、分化和凋亡的脱调节，间充质干细胞向成软骨细胞和成骨细胞的较慢分化，胶原合成、碱性磷酸酶活性、骨钙素合成、细胞外基质的合成及其随后的矿化的减少，尤其包括在骨折的情况下，骨的脆性增加，骨矿化的减少，其中基因治疗DNA载体具有克隆到基因治疗DNA载体VTvaf17的BMP2治疗性基因的编码区，从而产生具有核苷酸序列SEQIDNo.3的基因治疗DNA载体VTvaf17-BMP2。


4.基于基因治疗DNA载体VTvaf17的基因治疗DNA载体，用于治疗与骨发生，骨和软骨组织形成和再生障碍相关的疾病，用于改善骨植入物的骨诱导，以及作为基于旨在降低异位骨化风险的重组成骨因子的药物的替代方案，经由增加人和动物中的BMP7治疗性基因的表达来实现，所述疾病由如下引起：包括成骨细胞和成软骨细胞的多种类型细胞的生长、分化和凋亡的脱调节，间充质干细胞向成软骨细胞和成骨细胞的较慢分化，胶原合成、碱性磷酸酶活性、骨钙素合成、细胞外基质的合成及其随后的矿化的减少，尤其包括在骨折的情况下，骨的脆性增加，骨矿化的减少，其中基因治疗DNA载体具有克隆到基因治疗DNA载体VTvaf17的BMP7治疗性基因的编码区，从而产生具有核苷酸序列SEQIDNo.4的基因治疗DNA载体VTvaf17-BMP7。


5.根据权利要求1、2、3或4所述的携带COL1A1、COL1A2、BMP2或BMP7治疗性基因的基于基因治疗DNA载体VTvaf17的基因治疗DNA载体，所述基因治疗DNA载体由于以下事实而是独特的：构建的基因治疗DNA载体：根据权利要求1、2、3或4所述的VTvaf17-COL1A1，或VTvaf17-COL1A2，或VTvaf17-BMP2，或VTvaf17-BMP7的每一个由于不超过3200bp的VTvaf17载体的受限的大小，具有有效地渗透到人和动物细胞中并表达克隆到其中的COL1A1、COL1A2、BMP2或BMP7治疗基因的能力。


6.根据权利要求1、2、3或4所述的携带COL1A1、COL1A2、BMP2或BMP7治疗性基因的基于基因治疗DNA载体VTvaf17的基因治疗DNA载体，所述基因治疗DNA载体由于以下事实而是独特的：创建的基因治疗DNA载体，即根据权利要求1、2、3或4所述的VTvaf17-COL1A1，或VTvaf17-COL1A2，或VTvaf17-BMP2，或VTvaf17-BMP7的每一个使用并非抗生素抗性基因、病毒基因或病毒基因组调控元件的核苷酸序列，所述核苷酸序列确保其安全用于人和动物中的基因治疗。


7.生产根据权利要求1、2、3或4所述的携带COL1A1、COL1A2、BMP2或BMP7治疗性基因的基于基因治疗DNA载体VTvaf17的基因治疗DNA载体的方法，其涉及如下获得基因治疗DNA载体的组，即VTvaf17-COL1A1，或VTvaf17-COL1A2，或VTvaf17-BMP2，或VTvaf17-BMP7的每一个：将根据权利要求1、2、3或4所述的COL1A1，或COL1A2，或BMP2，或BMP7治疗性基因的编码区克隆到DNA载体VTvaf17，并分别获得基因治疗DNA载体VTvaf17-COL1A1，SEQIDNo.1，或VTvaf17-COL1A2，SEQIDNo.2，或VTvaf17-BMP2，SEQIDNo.3，或VTvaf17-BMP7，SEQIDNo.4，其中通过将总RNA从人生物组织样品分离，随后使用特异性寡核苷酸进行逆转录反应和PCR扩增，并通过限制性内切核酸酶切割扩增产物获得COL1A1、COL1A2、BMP2或BMP7治疗性基因的编码区，并在NheI和HindIII限制性位点处克隆到所述基因治疗DNA载体VTvaf17，其中在不存在抗生素的情况下进行选择；
同时构建基因治疗DNA载体VTvaf17-COL1A1，SEQIDNo.1用于逆转录反应和PCR扩增，以下寡核苷酸用作构建的寡核苷酸：
COL1A1_FCCAGCTAGCGTCTAGGGTCTAGACATGTTC，
COL1A1_RTATAAGCTTCTACAGGAAGCAGACAGGGCCAAC，
并且使用NheI和HindIII限制性内切核酸酶进行扩增产物的切割及将所述COL1A1基因的编码区克隆到DNA载体VTvaf17，
其中构建基因治疗DNA载体VTvaf17-COL1A2，SEQIDNo.2用于逆转录反应和PCR扩增，以下寡核苷酸用作构建的寡核苷酸：
COL1A2_FCCAGCTAGCGTCTAAGTGCTAGACATGCTC，
COL1A2_RCGAAGCTTTTATTTGAAACAGACTGGGCCA，
并且使用NheI和HindIII限制性内切核酸酶进行扩增产物的切割及将所述COL1A2基因的编码区克隆到DNA载体VTvaf17，
其中构建基因治疗DNA载体VTvaf17-BMP2，SEQIDNo.3用于逆转录反应和PCR扩增，以下寡核苷酸用作构建的寡核苷酸：
BMP2_FACAGCTAGCCTCCTAAAGGTCCACCATGGT，
BMP2_RTATAAGCTTCTAGCGACACCCACAACCCT，
并且使用NheI和HindIII限制性内切核酸酶进行扩增产物的切割及将所述BMP2基因的编码区克隆到DNA载体VTvaf17，
其中构建基因治疗DNA载体VTvaf17-BMP7，SEQIDNo.4用于逆转录反应和PCR扩增，以下寡核苷酸用作构建的寡核苷酸：
BMP7_FTCAGCTAGCGTAGAGCCGGCGCGATGCA，
BMP7_RTATAAGCTTCTAGTGGCAGCCACAGGC，
并且使用NheI和HindIII限制性内切核酸酶进行扩增产物的切割及将所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：N萨韦利瓦，VN拉扎雷夫，GV什马里纳，
申请(专利权)人：阿莱尔特森特尔创新生物技术有限责任公司，普罗里夫涅创新技术有限责任公司，细胞基因治疗有限公司，
类型：发明
国别省市：俄罗斯;RU