樟疫霉效应子蛋白Avh49及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种来源于樟疫霉的效应子蛋白Avh49及其编码基因和应用。该蛋白是具有序列表中的SEQIDNO：1的氨基酸序列。实验证明，该基因控制表达的蛋白质能够参与樟疫霉侵染本氏烟草的过程，具有诱导植物细胞死亡的功能。本发明专利技术对于充实植物病原卵菌与寄主互作的分子机制资料信息，以及建立植物病原卵菌病害的综合防治技术策略均有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
樟疫霉效应子蛋白Avh49及其应用
本专利技术属于樟疫霉效应子
，具体涉及一种樟疫霉效应子蛋白Avh49及其应用。
技术介绍
樟疫霉(Phytophthoracinnamomi)是已知的最具破坏性的植物病原卵菌之一，在世界范围内广泛分布，寄主范围接近5000种。作为一类半活体营养的病原卵菌，樟疫霉在侵染寄主的初期营活体营养，待成功侵入之后转入死体营养阶段。这就意味着在和寄主互作中樟疫霉可能通过复杂的过程来操纵植物的细胞死亡；在活体营养阶段，抑制寄主细胞死亡被认为是重要的侵染策略；而在向死体营养阶段的转换过程中，植物程序性细胞死亡则可能被其利用以适应致病过程和完成生活史。疫霉菌在形态上类似丝状真菌，但在进化和遗传背景上差距较大，因此传统的杀真菌剂对其作用不明显。目前我国生产上主要依靠抗病品种和国外专利农药进行防治，成本较高。疫霉菌在林间变异迅速、复杂，一般抗病品种推广8～15年后就会丧失抗性。目前为止所有的已知抗病基因均被疫霉菌攻克，迫切需要拓宽新的抗病基因资源。在与植物的互作过程中，疫霉菌分泌大量的效应子(Effector)来调控植物的生长发育及免疫反应以利于自身的侵染，是疫霉菌分泌到细胞外攻击寄主的关键武器。绝大多数动植物病原物通过各种机制输送分泌效应蛋白到寄主植物细胞内，从而对于寄主细胞的生化、生理过程及细胞代谢等产生显著影响，促进自身的侵染或者激活寄主的防卫反应。效应子基因在植物互作过程中具有重要意义。现有技术中报道，樟疫霉效应子蛋白Avh87基因能够诱导凋亡前体蛋白Bax诱导的植物细胞死亡，但是仅一个效应子蛋白对于樟疫霉致病过程仅侵染机理的研究是远远不够的，且不同效应子蛋白的结构也完全不同。综上所述，深入了解樟疫霉的致病过程和侵染机理，针对性的开发新的农药靶标和防治策略，是亟待研究的课题。
技术实现思路
针对现有技术存在的上述问题，本专利技术的目的在于提供具有诱导植物细胞凋亡的樟疫霉效应子蛋白Avh49，其可有效诱导植物细胞凋亡。本专利技术还有一目的是提供该蛋白的编码基因及其重组载体，可以用于转基因植物或诱导植物细胞死亡的产品。第一方面，本专利技术提供了樟疫霉效应子蛋白Avh49，所述蛋白如1)至3)任一所示，1)氨基酸序列如SEQIDNO：1所示；MRRNLARLLIAAALLTVASEALSTVTDEEQAQISELGEEVIIRPKRLLRAVSKIDEDEERAILGEQVLLKWSKLAEKHNLQTLSKKLADKAWLTGKKADHKAWLKAGKNPQDKFKEYGWKGKAWEELKKDPRYARYDGFDDAWMKKQRKKGTIHTVDNWIKLWNEQQKKAAG(SEQIDNO：1)2)由SEQIDNO：1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；3)将1)或2)所示的氨基酸序列经一个或几个氨基酸残基的取代/缺失/添加，并具有效应子功能的蛋白质。上述Avh49蛋白质可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。上述Avh49编码基因可通过将序列表中SEQIDNO：2所示的核苷酸序列缺失一个或几个氨基酸的密码子，和/或进行一个或几个碱基对的错义突变，和/或在其5'端和/或3'端连上本领域常用标签的编码序列得到。第二方面，本专利技术提供了编码上述第一方面所述蛋白的核酸分子，所述核酸分子如下a)至b)任一所示，a)核苷酸序列如SEQIDNO：2所示；ATGCGACGGAACTTGGCTCGGCTGCTGATCGCGGCTGCCCTCCTCACAGTCGCGAGCGAGGCACTCTCAACGGTCACCGATGAGGAGCAAGCCCAGATTTCCGAGCTCGGTGAGGAAGTAATCATCAGACCCAAGAGGCTCTTAAGAGCAGTCAGCAAGATTGATGAGGACGAAGAGCGGGCCATTTTAGGAGAGCAGGTGCTGCTGAAGTGGAGCAAGCTCGCCGAAAAGCATAATTTGCAAACCCTTTCGAAGAAACTGGCGGACAAGGCCTGGCTGACTGGAAAGAAGGCGGACCACAAGGCATGGCTGAAAGCAGGGAAAAATCCACAGGACAAATTCAAGGAATACGGCTGGAAGGGGAAGGCCTGGGAAGAGCTGAAGAAAGATCCGAGGTACGCGCGCTACGACGGGTTCGACGACGCGTGGATGAAAAAACAACGCAAGAAGGGCACCATCCATACTGTTGATAATTGGATAAAATTGTGGAACGAGCAGCAGAAGAAAGCCGCTGGGTAA(SEQIDNO：2)b)在严格条件下可与a)所述的核苷酸序列杂交的核苷酸序列。上述严格条件可为用6×SSC，0.5％SDS的溶液，在65℃下杂交，然后用2×SSC，0.1％SDS和1×SSC，0.1％SDS各洗膜一次。其中，SEQIDNO：2由519个核苷酸组成，第1-516位为ORF，编码序列表中SEQIDNO:1所示的蛋白质，SEQIDNO:1共由172个氨基酸组成，其中第1-23位氨基酸为信号肽序列。第三方面，本专利技术提供了含有上述第二方面所述核酸分子的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌。在某些实施例中，所述重组载体为重组过表达载体或重组克隆载体。所述重组表达载体可用现有的表达载体构建。所述表达载体还可包含外源基因的3'端非翻译区域，即包含聚腺苷酸信号和任何其它参与mRNA加工或基因表达的DNA片段。所述聚腺苷酸信号可引导聚腺苷酸加入到mRNA前体的3'端。使用所述基因构建重组表达载体时，在其转录起始核苷酸前可加上任何一种增强型、组成型、组织特异型或诱导型启动子，例如花椰菜花叶病毒35S启动子、泛素基因Ubiquitin启动子(pUbi)、胁迫诱导型启动子rd29A等，它们可单独使用或与其它的启动子结合使用；此外，使用本专利技术的基因构建重组表达载体时，还可使用增强子，包括翻译增强子或转录增强子，这些增强子区域可以是ATG起始密码子或邻接区域起始密码子等，但必需与编码序列的阅读框相同，以确保整个序列的正确翻译。所述翻译控制信号和起始密码子的来源是广泛的，可以是天然的，也可以是合成的。翻译起始区域可以来自转录起始区域或结构基因。在某些实施例中，所述重组表达载体中含有35S启动子。在某些实施例中，所述重组表达载体是在pGR107载体的酶切位点中插入所述Avh49基因(序列表中SEQIDNO：2)得到的重组质粒。所述具体的酶切位点为SmaⅠ。在某些实施例中，所述表达盒由能够启动所述Avh49基因表达的启动子，包括所述Avh49基因以及转录终止序列。所述表达盒由能够启动所述Avh49基因表达的启动子，所述Avh49基因，以及转录终止序列组成。第四方面，上述第一方面提供的蛋白或上述第二方面提供的核酸分子，或上述第三方面提供的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌在如下1)或2)中的应用：本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.樟疫霉效应子蛋白Avh49，其特征在于，所述蛋白如1)至3)任一所示，/n1)氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示；/n2)由SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；/n3)将1)或2)所示的氨基酸序列经一个或几个氨基酸残基的取代/缺失/添加，并具有效应子功能的蛋白质。/n

【技术特征摘要】
1.樟疫霉效应子蛋白Avh49，其特征在于，所述蛋白如1)至3)任一所示，
1)氨基酸序列如SEQIDNO：1所示；
2)由SEQIDNO：1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
3)将1)或2)所示的氨基酸序列经一个或几个氨基酸残基的取代/缺失/添加，并具有效应子功能的蛋白质。


2.编码权利要求1所述蛋白的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子如下a)至b)任一所示，
a)核苷酸序列如SEQIDNO：2所示；
b)在严格条件下可与a)所述的核苷酸序列杂交的核苷酸序列。


3.含有权利要求2所述核酸分子的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌。


4.根据权利要求3所述的重组载体，其特征在于，所述重组载体为重组过表达载体或重组克隆载体。

【专利技术属性】
技术研发人员：戴婷婷，李亚星，吴翠萍，周紫薇，徐洁莹，焦彬彬，
申请(专利权)人：南京林业大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32