大豆疫霉4个NCR蛋白及其编码基因与应用制造技术

本发明专利技术公开了4个来自大豆疫霉菌的NCR(Niemann Pick type C‑related)蛋白及其编码基因与应用。本发明专利技术所提供的NCR蛋白为如SEQ ID NO.5‑8所示的蛋白质；其编码基因如SEQ ID NO.1‑4所示。通过实验证明，本发明专利技术所提供的蛋白在大豆疫霉(Phytophthora sojae)自身生长发育过程中发挥重要作用，具体表现为，该类蛋白缺失后大豆疫霉菌丝生长减慢、游动孢子数量减少且形态发生改变、致病力降低、卵孢子形态畸形等。以上结论均为探究大豆疫霉发育及致病分子机制提供了技术基础，为未来新型杀菌剂的研发提供了分子靶标。

【技术实现步骤摘要】
大豆疫霉4个NCR蛋白及其编码基因与应用
本专利技术属于生物
，具体涉及来自大豆疫霉(Phytophthorasojae)的4个NCR(NiemannPicktypeC-related)蛋白PsNCR1-4及其编码基因与应用。
技术介绍
大豆疫霉是一种非常重要的植物病原卵菌，主要引起大豆疫霉根腐病。该病害于上世纪50年代，在北美洲被首次发现并报道；目前，在亚洲、非洲、欧洲、南北美洲和大洋洲的二十多个国家的大豆主产区均有发生。20世纪80年代，该病害在中国东北地区被首次发现，现在中国大豆的主产区黑龙江省和安徽省、内蒙古自治区、山东省等地均有发生。大豆疫霉在大豆的整个生育期均可侵染，对大豆能造成毁灭性灾害，每年可造成超过10亿美元的经济损失。目前，其被归为十大重要致病卵菌之一，被国内外学者广泛关注和研究。大豆疫霉的生活史分为无性阶段和有性阶段。在无性繁殖阶段，大豆疫霉以无隔多核菌丝进行营养生长。大豆疫霉也可以产生孢子囊与游动孢子，随风、雨或灌溉水进行远距离的传播。孢子囊多呈梨形，通常在植株发病部位表面形成；其可以直接萌发形成菌丝，也可本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一类大豆疫霉病菌(Phytophthora sojae)NCR蛋白，是如下A1)或A2)或A3)或A4)的蛋白质：/nA1)氨基酸序列是如SEQ ID NO.6-8中任意一项所示的蛋白质；/nA2)在如SEQ ID NO.6-8中任意一项所示的蛋白质的N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白质；/nA3)将如SEQ ID NO.6-8中任意一项所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能由SEQ ID NO.6-8中任意一项所示的蛋白衍生的蛋白质；/nA4)与SEQ ID NO.如6-8中任意一项所示的氨基酸序列相似性在75％以上，优选在85％以上，更优...

【技术特征摘要】
1.一类大豆疫霉病菌(Phytophthorasojae)NCR蛋白，是如下A1)或A2)或A3)或A4)的蛋白质：
A1)氨基酸序列是如SEQIDNO.6-8中任意一项所示的蛋白质；
A2)在如SEQIDNO.6-8中任意一项所示的蛋白质的N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白质；
A3)将如SEQIDNO.6-8中任意一项所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能由SEQIDNO.6-8中任意一项所示的蛋白衍生的蛋白质；
A4)与SEQIDNO.如6-8中任意一项所示的氨基酸序列相似性在75％以上，优选在85％以上，更优选在95％以上且具有与如SEQIDNO.6-8所示的氨基酸序列相同功能的氨基酸序列。


2.编码权利要求1所示的NCR蛋白的编码基因；优选的，所述编码基因为如下B1)或B2)或B3)：
B1)序列表中SEQIDNO.2-4中任意一项所述的核苷酸序列所示的DNA分子；
B2)与B1)所示的核苷酸序列具有75％以上或85％以上或95％以上同一性，且编码权利要求1中所述NCR蛋白的cDNA分子或DNA分子；
B3)在严格条件下与B1)或B2)限定的核苷酸序列杂交，且编码权利要求1中所述NCR蛋白的cDNA分子或DNA分子。


3.权利要求2所述的编码基因转录得到的RNA分子；
优选的，所述RNA分子的序列为如下C1)或C2)：
C1)如SEQIDNO.2-4所示的DNA序列转录的RNA序列的相似性在75％以上，进一步优选在85％以上，更优选在95％以上且具有与如SEQIDNO.2-4所示的DNA序列转录的RNA序列相同功能的RNA序列；
C2)如SEQIDNO.2-4中任意一项所示的DNA序列转录的RNA序列。


4.含有与权利要求2所示的编码基因或权利要求3所述的RNA分子相关的核酸分子的生物材料，为下述D1)至D10)中的任一种：
D1)含有权利要求2所述编码基因的表达盒；
D2)含有权利要求2所述编码基因的重组载体、或含有D1)所述表达盒的重组载体；
D3)含有权利要求2所述编码基因的重组微生物、或含有D1)所述表达盒的重组微生物、或含有D2)所述重组载体的重组微生物；
D4)含有权利要求2所述编码基因的转基因植物细胞系、或含有D1)所述表达盒的转基因植物细胞系；
D5)含有权利要求2所述编码基因的转基因植物组织、或含有D2)所述表达盒的转基因植物组织；
D6)含有权利要求2所述编码基因的转基因植物器官、或含有D2)所述表达盒的转基因植物器官；
D7)抑制权利要求2所述编码基因表达的核酸分子；
D8)含有D7)所述核酸分子的表达盒、重组载体、重组微生物或转基因植物细胞系；
D9)抑制权利要求3所述RNA分子翻译的核酸分子；
D10)产生D9)所述核酸分子的表达盒、重组载体、重组微生物或转基因植物细胞系。


5.一组成套使用的大豆疫霉病菌NCR蛋白组合或者DNA组合，是下述E1)或E2)：
E1)由序列表中SEQIDNO.6所示的蛋白质、序列表中SEQIDNO.7所示的蛋白质、序列表中SEQIDNO.8所示的蛋白质和序列表中SEQIDNO.5所示的蛋白质中的任意两种或者两种以上组成的组合；
E2)由序列表中SEQIDNO.2所示的DNA分子、序列表中SEQIDNO.3所示的DNA分子、序列表中SEQIDNO.4所示的DNA分子和序列表中SEQIDNO.1所示的DNA分子中的任意两种或者两种以上组成的组合。


6.权利要求1所述的NCR蛋白、权利要求2所述的编码基因或权利要求3所述的RNA分子或权利要求4所述的生物材料或权利要求5所述的蛋白组合或者DNA组合的应用，其特征在于：所述应用为下述1)-6)中任一种或几种：
1)在调控大豆疫霉游动孢子产量和/或维持其形态中的应用；
2)在调控大豆疫霉菌丝生长速率中的应用；
3)在调控大豆疫霉侵染寄主能力中的应用；
4)在维持大豆疫霉卵孢子正常形态结构中应用；
5)在调控大豆疫霉对寄主的致病性中的应用；
6)在抑制和/或杀灭大豆疫霉病菌中的应用；
优选的，其中，所述应用中，包括通过抑制如权利要求2所述的编码基因中的一种或两种以上任意组合的转录或使其灭活，或抑制如权利要求3所述的RNA分子中的一种或两种以上任意组合的翻译，或抑制如权利要求1所述的NCR蛋白中的一种或两种以上任意组合的活性或使其灭活，或者抑制或灭活权利要求5所述的NCR蛋白组合或DNA组合，或者抑制权利要求5所述的DNA组合的转录来实现1)-6)所述的应用。


7.权利要求1所述的NCR蛋白、权利要求2所示的编码基因或权利要求3所述的RNA分子或权利要求4所述的生物材料或权利要求5所述的蛋白组合或者DNA组合在作为抑菌或杀菌剂靶标筛选大豆疫霉病菌抑菌或杀菌剂中的应用。


8.一种筛选或辅助筛选...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘西莉，薛昭霖，王为镇，张博瑞，李腾蛟，张灿，苗建强，
申请(专利权)人：中国农业大学，西北农林科技大学，
类型：发明
国别省市：北京;11