一种特异性识别小麦内源自噬相关蛋白8多克隆抗体的制备方法技术

本发明专利技术属于农业生物学技术领域，涉及一种特异性识别小麦内源自噬相关蛋白8多克隆抗体的制备方法，该方法首先合成人工多肽，并将该人工多肽偶联到血蓝蛋白KLH上，以此为抗原对实验级日本大耳白兔和新西兰大白兔进行免疫，经过多次加强免疫后从兔子体内获得血清进行效价检测，效价达到预期目标后即可分离血清，提纯获得多克隆抗体；本发明专利技术获得的多克隆抗体特异性强，可用于免疫沉淀、免疫组化等分子生物学实验及相关研究，为深入研究植物细胞自噬相关机理提供了有力的工具。相关机理提供了有力的工具。相关机理提供了有力的工具。

【技术实现步骤摘要】
一种特异性识别小麦内源自噬相关蛋白8多克隆抗体的制备方法


[0001]本专利技术属于农业生物学
，涉及一种特异性识别小麦内源自噬相关蛋白8多克隆抗体的制备方法。

技术介绍

[0002]细胞自噬是一种进化上非常保守的溶酶体/液泡降解途径，对生物有机体适应各种生物或非生物胁迫，以及维持自身生长发育具有重要意义。在细胞自噬发生过程中，由于自噬相关基因8(autophagy related gene 8，ATG8)的蛋白始终标记在自噬泡的膜状结构上，所以被用作自噬检测的金标准。在所有植物中，目前只制备出了拟南芥抗内源性ATG8蛋白的多克隆抗体，但其特异性较差，同时拟南芥的抗原序列至今未对外公开，更加限制了其在检测植物ATG8基因表达中的广泛应用。由于缺乏特异性较好的ATG8抗体，致使小麦细胞自噬研究进展相对缓慢。
[0003]因此，能否提供一种具有较好特异性识别小麦内源自噬相关蛋白8的多克隆抗体成为本领域亟待解决的问题。

技术实现思路

[0004]针对现有技术中的上述情况，本专利技术的专利技术人提供了一种特异性识别小麦内源本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种特异性识别小麦内源自噬相关蛋白8多克隆抗体的制备方法，其特征在于：所采用的抗原为人工合成多肽，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，编码该多肽的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。2.根据权利要求1所述特异性识别小麦内源自噬相关蛋白8多克隆抗体的制备方法，其特征在于：具体步骤如下：(1)将5mg人工合成多肽偶联到1mg血蓝蛋白KLH；(2)饲养实验级日本大耳白兔和新西兰大白兔各1只，待兔子长至1
‑
2kg时，用注射器将充分混匀的1mL完全弗氏佐剂和1mL浓度为0.7mg/mL的纯多肽在每只兔子皮下注射第1针，标记为第1天；(3)第12天，将充分混匀的1mL不完全弗氏佐剂和1mL浓度为0.35mg/mL的多肽在...

【专利技术属性】
技术研发人员：李永波，楚秀生，崔德周，樊庆琦，隋新霞，黄琛，
申请(专利权)人：山东省农业科学院作物研究所，
类型：发明
国别省市：