一种皮下注射人免疫球蛋白的制备方法技术

本发明专利技术一种皮下注射人免疫球蛋白的制备方法，在FIII/FI+III分离步骤用磷酸盐进行离子强度和pH调节，在pH4.6~4.9进行选择性溶解，在pH5.0~5.4进行杂蛋白的沉淀，可以有效去除抗A抗B抗体，降低制品中抗A抗B抗体滴度；在第二步阴离子交换层析中选择的pH为6.5~7.5，高于抗A抗B抗体等电点，抗A抗B抗体携带负电荷，被阴离子交换凝胶吸附，进一步去除抗A抗B抗体，从而降低皮下注射人免疫球蛋白导致的溶血反应的风险；选择在pH5.0~5.4进行杂蛋白沉淀，降低了促凝血活性物质，有效降低了皮下注射高浓度人免疫球蛋白使用后导致的血栓栓塞事件发生的风险；采用两步阴离子交换层析进一步纯化，可提高产品纯度，降低IgA和纤维蛋白溶解酶含量，降低不良反应发生率，提高产品长期稳定性。性。

【技术实现步骤摘要】
一种皮下注射人免疫球蛋白的制备方法


[0001]本专利技术涉及免疫球蛋白的制备方法
，具体涉及一种皮下注射人免疫球蛋白的制备方法。

技术介绍

[0002]1952年人免疫球蛋白首次用于治疗各种免疫缺陷病，用药途径为肌肉或皮下。1980s以保持IgG分子天然结构完整性、具有完整的生物学活性为特征的第三代IVIG上市，蛋白质含量通常为5%，1990s国际上开发出高浓度皮下注射人免疫球蛋白。
[0003]人免疫球蛋白在多种疾病的治疗中有着不可替代的重要作用，全球范围内对人免疫球蛋白的需求增长巨大。与静注人免疫球蛋白相比皮下注射人免疫球蛋白具有相当优势，如注射后病人血液中IgG浓度更稳定、具有更好的耐受性、不良反应发生率更低、长期使用成本更低、使用过程中不需要密切进行监视因而病人可在家中自行使用，可以减少住院时间，提高生活质量，节约社会资源。
[0004]临床上皮下注射人免疫球蛋白用于原发性免疫缺陷（PID）、伴有继发性低丙种球蛋白血症和反复感染的骨髓瘤或慢性淋巴细胞白血病、继发性免疫缺陷(SID)、慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种皮下注射人免疫球蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）FII+III/FI+II+III分离：在FI上清液或血浆中添加醋酸盐缓冲液，将pH调节至5.8～6.2；再加入预冷的体积分数为95%的乙醇至乙醇的体积达混合液体积的18～22%，同时将混合液温度降至-6～-4℃，沉淀老化，得到第一静置液；在-6～-4℃条件下离心所述的第一静置液，得到离心分离的沉淀；（2）FIII/FI+III分离：用10～15倍0～5℃的注射用水溶解所述的离心分离的沉淀，再加入磷酸盐缓冲液调节pH至4.6～4.9，反应1小时后，用磷酸盐缓冲液调节pH至5.0～5.4，反应1小时后，用0～5℃注射用水调节电导率至0.6～1.6ms/cm，加入预冷的体积分数为95%的乙醇至乙醇的体积达混合液体积的10～12%，同时将混合液温度降低至-5～-3℃沉淀，得到沉淀的混合液；在-5～-3℃条件下离心分离沉淀的混合液，收集FIII/FI+III上清液；（3）澄清过滤：按6～10g/L的比例在所述的FIII/FI+III上清液中添加助滤剂，用去脂滤板进行深层过滤，过滤压力不超过0.3Mpa，得到滤板过滤的澄清滤液；（4）超滤浓缩透析：用50KD超滤膜将所述的滤板过滤的澄清滤液浓缩至蛋白质含量为4.5～5.5%，得到浓缩澄清滤液；用不低于浓缩澄清滤液5倍体积的0～24℃注射用水透析所述的浓缩澄清滤液，跨膜压力为0.1～0.3Mpa，得到透析浓缩液；（5）S/D病毒灭活：在所述的透析浓缩液中添加吐温80至吐温80的质量分数为0.9～1.1%，再加入磷酸三丁酯至磷酸三丁酯的质量分数为0.28～0.32%，于25
±
1℃条件下，S/D病毒灭活6h以上，得到灭活的透析浓缩液；（6）PEG沉淀：将所述的灭活的透析浓缩液的稀释至蛋白质的质量分数为1.8～2.2%，并将pH调节至6.5～7.5，添加PEG4000至PEG4000的质量分数为10～16%，得到PEG沉淀反应物；（7）离心分离：将所述的PEG沉淀反应物离心，得到PEG离心的沉淀；（8）沉淀溶解和过滤：用PEG离心的沉淀4-6倍体积的2～8℃注射用水溶解PEG离心的沉淀，用深层滤板过滤，得到PEG沉淀澄清过滤液；（9）第一步阴离子交换层析：将所述的PEG沉淀澄清过滤液的pH调节至5.0～5.4，用5CV、20～40mM、pH为5.0～5.4的醋酸盐缓冲液平衡层析柱，以100～400cm/h线性流速上样，收集280nm紫外吸收峰流穿液用于进一步层析纯化；（10）第二步阴离子交换层析：用1mol/LNaOH将所述的流穿液的pH调节至6.5～7.5，用氯化钠调节流穿液的电导率至3.5～5.5ms/cm，用5CV、25～45mM、pH为6.5~7.5的醋酸盐平衡液平衡层析柱，以100～400cm/h线性流速上样，收集280nm紫外吸收峰流穿液用于进一步处理；（11）去脂过滤：用0.5MHCL将步骤（10）收集得到的流穿液的pH调节至3.8～4.4，并用去脂滤芯过滤，压力不超过0.3Mpa，得到过滤的澄清液；（12）超滤配制：用50KD超滤膜浓缩所述过滤的澄清液，得到浓缩液；用0～24℃注射用水透析所述的浓缩液，注射用水的使用量不低于所述浓缩液的8倍体积，透析后将制品浓缩配制成蛋白质的质量分数为5%、pH为3.8～4.4的原液；（13）低pH病毒灭活：将经除菌过滤后原液，在24℃条件下连续孵放21天以上，灭活残留的脂包膜病毒，得到病毒灭活原液；（14）纳...

【专利技术属性】
技术研发人员：兰学渊，张庭喜，蒋炳姣，孔维权，吕绍玉，李秋，屈信颜，孙文，
申请(专利权)人：广西冠峰生物制品有限公司，
类型：发明
国别省市：