一种蚯蚓血红蛋白分离及纯化方法技术

本发明专利技术涉及一种蚯蚓血红蛋白分离及纯化方法，将粗蚯蚓血红蛋白液采用双水相萃取制备高浓度蛋白液，高浓度蛋白液再经超滤纯化及层析分离后冻干成粉；双水相萃取的萃取剂由PEG6000、(NH4)2SO4、NaCl和H2O组成。本发明专利技术全程使用无毒试剂，所获得的蚯蚓血红蛋白提取率高，纯度高，活性好，耗时较短，可用于生物医学领域血红蛋白结构与功能精深研发。领域血红蛋白结构与功能精深研发。

【技术实现步骤摘要】
一种蚯蚓血红蛋白分离及纯化方法


[0001]本专利技术涉及蛋白质分离纯化
，尤其涉及一种蚯蚓血红蛋白分离及纯化方法。

技术介绍

[0002]蚯蚓血红蛋白分子由于在某些方面具备独特优势，在国外已成为血红蛋白氧载体研发领域新靶标，但国内尚无从蚯蚓分离纯化活性血红蛋白方法的公开文献。
[0003]特定蛋白分离技术主要由目标蛋白理化特性决定，但不同方法在获得率、纯度、活性、效率等方面有明显差异。蚯蚓体内血红蛋白含量极低，易受多种混杂蛋白影响，活性保护困难，使用常规的蛋白分离技术提纯蚯蚓血红蛋白，很难在获得率、纯度、活性、效率等方面取得满意效果。

技术实现思路

[0004]本专利技术需要解决的技术问题是：如何从蚯蚓中高效分离纯化活性蚯蚓血红蛋白。
[0005]为了解决上述的技术问题，本专利技术采用了如下的技术方案：一种蚯蚓血红蛋白分离及纯化方法包括以下步骤：
[0006]一种蚯蚓血红蛋白分离及纯化方法，包括制备粗蚯蚓血红蛋白液、超滤纯化、层析分离、制备冻干粉，其特征在于将粗蚯蚓血红蛋白液采用双水相萃取制备高浓本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种蚯蚓血红蛋白分离及纯化方法，包括制备粗蚯蚓血红蛋白液、超滤纯化、层析分离、制备冻干粉，其特征在于将粗蚯蚓血红蛋白液采用双水相萃取制备高浓度蛋白液，高浓度蛋白液再经超滤纯化及层析分离后制成冻干粉；所述双水相萃取的萃取剂由PEG6000、(NH4)2SO4、NaCl和H2O组成，PEG6000质量分数为10％
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12％，(NH4)2SO4质量分数为9％
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11％，NaCl质量分数为范围为0.1％
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1.0％，其余为H2O。2.根据权利要求1所述的蚯蚓血红蛋白分离及纯化方法，其特征在于所述双水相萃取的萃取剂中各组分质量分数为PEG6000：10％、(NH4)2SO4：9％、NaCl：0.5％，其余为水。3.根据权利要求1所述的蚯蚓血红蛋白分离及纯化方法，其特征在于所述双水相萃取按以下进行操作：将粗蚯蚓血红蛋白液加入萃取剂轻轻摇匀，于2
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8℃环境，静置萃取3.4h
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16.2h，收集下层红色液体，于12000r/min，30min离心，去沉淀，去上层少许淡黄色液体，得到高浓度蛋白液。4.根据权利要求3所述的蚯蚓血红蛋白分离及纯化方法，其特征在于所述萃取剂与粗蚯蚓血红蛋白液的质量比例比为4∶1
‑
6∶1。...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵会民，张剑锋，杨康，张猛，伍国俊，苏谐，
申请(专利权)人：广西医科大学第二附属医院广西医科大学第二临床医学院，
类型：发明
国别省市：