一种中国被毛孢的菌株保藏方法技术

本发明专利技术公开了一种中国被毛孢的菌株保藏方法。将中国被毛孢(Hirsutella sinensis)接种到保藏培养基上，培养使其长出菌丝体，然后于4‑18℃保藏。本发明专利技术以中国被毛孢长在保藏培养基上的菌丝体为材料，“原位”置于合适的低温条件下，满足一年期的保藏。其优点在于，所用的材料易得、无需消耗液氮、操作简便、低温条件容易实现、保藏期较长、保藏后菌株活力无明显减退。

【技术实现步骤摘要】
一种中国被毛孢的菌株保藏方法
：本专利技术属于食用菌栽培
，具体涉及一种中国被毛孢的菌株保藏方法。
技术介绍
：中国被毛孢(Hirsutellasinensis)被证实是我国传统名贵药用真菌冬虫夏草(Ophiocordycepssinensis)的无性体之一。中国被毛孢的菌丝体可作与其孢子一起，增加对蝙蝠蛾幼虫的感染力，促进僵虫形成，是目前实验室规模人工栽培冬虫夏草的辅助手段。另外，中国被毛孢含有与冬虫夏草相似的化学物质，名列我国《可用于保健食品的真菌菌种》中，可作为保健食品开发之用。在菌种使用过程中，菌种保藏是保证优良菌种可长期使用的重要手段。菌种保藏的形式主要有低温、干燥、降低氧分压等形式，其中低温是最为常用的手段。虽然低温条件(不含液氮保藏)容易实现，但应用于食药用菌菌种储藏技术，还有以下问题需要解决：要针对不同菌种或菌株生理特性；要选取合适的组织或细胞；要设置合适的温度范围；要设置合适的保藏时长。其具体是指：食药用菌具有不同的温度耐受性，如不适当的低温对高温型食药用菌是一种冻害，甚至会杀死菌种或菌株。食药用菌菌丝体和孢子都可作为保藏材料，但它们有不同的低温适应能力，需具体实验验证。保藏所指的低温是个泛指温度范围，需因应不同的菌种菌株，还有其所选材料，验证合适的温度范围。最后还要确定保藏的时长，在保持菌种菌株活力的前体下，保藏时间越长则其技术越优。
技术实现思路
：本专利技术提供了一种适用于多个中国被毛孢菌株的、无需消耗液氮的、保藏时间长的中国被毛孢的菌株保藏方法。本专利技术的中国被毛孢的菌株保藏方法，包括以下步骤：将中国被毛孢(Hirsutellasinensis)接种到保藏培养基上，培养使其长出菌丝体，然后于4-18℃保藏。优选，所述的保藏培养基，每升培养基包括：马铃薯200g、葡萄糖20g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁0.5g、蚕蛹粉10-20g、酵母浸出粉10-20g、琼脂20g，余量为水，pH6.00-7.00；将保藏培养基制成斜面，将中国被毛孢接种到保藏培养基斜面上，培养使其长出菌丝体，然后于4-18℃保藏。优选，所述的将中国被毛孢接种到保藏培养基斜面上，培养使其长出菌丝体，是将中国被毛孢接种到保藏培养基斜面上，于18℃下避光培养约30d长出菌丝体，观察菌落形态，判断菌种是否有污染、菌落特征是否符合中国被毛孢形态，排除菌落畸形、生长缓慢的菌株，得保藏前菌株，将保藏前菌株于4-18℃保藏。优选，所述的斜面是试管斜面。进一步优选，将中国被毛孢接种到试管斜面上，于18℃下避光培养约30d长出菌丝体，观察菌落形态，判断菌种是否有污染、菌落特征是否符合中国被毛孢形态，排除菌落畸形、生长缓慢的菌株，得保藏前菌株，用封口膜将试管塞封好，装包装袋中，于4-18℃保藏。优选，所述的包装袋是密封袋。本专利技术的第二个目的是提供一种中国被毛孢的保藏培养基，每升培养基包括：马铃薯200g、葡萄糖20g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁0.5g、蚕蛹粉10-20g、酵母浸出粉10-20g、琼脂20g，余量为水，pH6.00-7.00。本专利技术以中国被毛孢长在保藏培养基上的菌丝体为材料，“原位”置于合适的低温条件下，满足一年期的保藏。其优点在于，所用的材料易得、无需消耗液氮、操作简便、低温条件容易实现、保藏期较长、保藏后菌株活力无明显减退。附图说明：图1是在4℃保藏前后各菌株的菌落外观(A：菌株Z4保藏前；B：菌株XG保藏前；C：菌株I15保藏前；D：菌株Z4保藏后；E：菌株XG保藏后；F：菌株I15保藏后)；图2是在4℃保藏后各菌株继代的生长情况(A、D、G：菌株Z4；B、E、F：菌株XG；C、F、I：菌株I15)；图3是在18℃保藏前后菌落外观(A：菌株Z4保藏前；B：菌株XG保藏前；C：菌株I15保藏前；D：菌株Z4保藏后；E：菌株XG保藏后；F：菌株I15保藏后)；图4是在18℃保藏后各菌株继代的生长情况(A、D、G：菌株Z4；B、E、F：菌株XG；C、F、I：菌株I15)。具体实施方式：以下实施例是对本专利技术的进一步说明，而不是对本专利技术的限制。实施例1：1、低温保藏温度4℃。2、保藏培养基配方：马铃薯200g，葡萄糖20g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁0.5g，蚕蛹粉15g，酵母浸出粉15g，琼脂20g，水1000mL，以1mol·L-1氢氧化钠溶液调节pH6.50。具体配置方法是称取200g马铃薯，洗净去皮切碎，加水1000ml煮沸半个小时，纱布过滤，在滤液中加入葡萄糖20g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁0.5g，蚕蛹粉15g，酵母浸出粉15g，琼脂20g，然后用水补足1000ml，混匀，以1mol·L-1氢氧化钠溶液调节pH6.50。3、保藏培养基斜面制作。采用试管，保藏培养基装量为试管高度1/4，灭菌，冷却后得保藏培养基斜面。4、取三个不同来源的中国被毛孢菌株，菌株号为Z4、I15和XG，分别接种于灭菌的保藏培养基斜面上，于18℃下避光培养约30d，观察菌落形态，判断菌种是否有污染、菌落特征是否符合中国被毛孢形态，排除菌落畸形、生长缓慢的菌株，得保藏前菌株。5、取保藏前菌株，使用封口膜将试管塞封好，取密封袋等干净干燥包装袋装入待保藏的试管菌株，然后置于4℃低温环境中保藏。保藏时间为365d。6、从低温环境中取出保藏菌株，在25℃以下室温中进行正常继代操作，共继代三个培养皿，每个培养皿上接种三点，计算菌落形成比例。7、保藏结果从图1可见，4℃保藏365d后，各菌株菌落形态正常。从图2可见，经转接后，各菌株所有接种点都能重新形成菌落，菌落形成比例100％，表明保藏菌株保存了活力。实施例2：1、低温保藏温度18℃2、保藏培养基配方：马铃薯200g，葡萄糖20g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁0.5g，蚕蛹粉15g，酵母浸出粉15g，琼脂20g，水1000mL，以1molL-1氢氧化钠溶液调节pH6.50。具体配置方法是称取200g马铃薯，洗净去皮切碎，加水1000ml煮沸半个小时，纱布过滤，在滤液中加入葡萄糖20g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁0.5g，蚕蛹粉15g，酵母浸出粉15g，琼脂20g，然后用水补足1000ml，混匀，以1mol·L-1氢氧化钠溶液调节pH6.50。3、保藏培养基斜面制作。采用试管，保藏培养基装量为试管高度1/4，灭菌，冷却后得保藏培养基斜面。4、取三个不同来源的中国被毛孢菌株，菌株号为Z4、I15和XG，分别接种于灭菌的保藏培养基斜面上，于18℃下避光培养约30d，观察菌落形态，判断菌种是否有污染、菌落特征是否符合中国被毛孢形态，排除菌落畸形、生长缓慢的菌株，得保藏前菌株。5、取保藏前菌株，使用封口膜将试管塞封好，取密封袋等干净干燥包装袋装入待保藏的试管菌株，然后置于18℃范围内的低温环境中保藏。保藏时间为365d。6、从低温环境中取出保藏菌株，在25℃以下室温中进行正常继本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种中国被毛孢的菌株保藏方法，其特征在于，包括以下步骤：/n将中国被毛孢(Hirsutella sinensis)接种到保藏培养基上，培养使其长出菌丝体，然后于4-18℃保藏。/n

【技术特征摘要】
1.一种中国被毛孢的菌株保藏方法，其特征在于，包括以下步骤：
将中国被毛孢(Hirsutellasinensis)接种到保藏培养基上，培养使其长出菌丝体，然后于4-18℃保藏。


2.根据权利要求1所述的菌株保藏方法，其特征在于，所述的保藏培养基，每升培养基包括：马铃薯200g、葡萄糖20g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁0.5g、蚕蛹粉10-20g、酵母浸出粉10-20g、琼脂20g，余量为水，pH6.00-7.00；
将保藏培养基制成斜面，将中国被毛孢接种到保藏培养基斜面上，培养使其长出菌丝体，然后于4-18℃保藏。


3.根据权利要求2所述的菌株保藏方法，其特征在于，所述的将中国被毛孢接种到保藏培养基斜面上，培养使其长出菌丝体，是将中国被毛孢接种到保藏培养基斜面上，于18℃下避光培养30d长出菌丝体，观察菌落形态，判断菌种是否有污染、菌落特征是否符合中国被...

【专利技术属性】
技术研发人员：张一帆，杨小兵，谢意珍，
申请(专利权)人：广东省食用菌行业协会，广东粤微食用菌技术有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44