一种噬菌体常温保存材料及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种噬菌体常温保存材料，属于生物医药技术领域，所述材料包括羟基磷灰石，和以物理吸附的方式修饰在羟基磷灰石表面的噬菌体。本发明专利技术还提供了一种所述材料的制备方法，包括如下步骤：S100、配制羟基磷灰石的分散液：将羟基磷灰石均匀分散在水中，得到溶液A；S200、将溶液A与噬菌体成分混合并离心弃去上层清液，即得所述的噬菌体常温保存材料。最后本发明专利技术提供了一种所述材料在噬菌体抗菌剂中的应用。这一材料具有良好的抗菌活性，并且能在常温下有效延长噬菌体的保存时间，增强噬菌体的抗菌活性。

【技术实现步骤摘要】
一种噬菌体常温保存材料及其制备方法与应用
本专利技术涉及生物医药
，尤其涉及一种噬菌体常温保存材料及其制备方法与应用。
技术介绍
随着抗生素的广泛应用甚至滥用，耐药菌株(包括多耐药菌株)频现，抗生素治疗效果受到严峻的挑战，开发新型抗菌产品成为迫在眉睫的社会需求。噬菌体因具有抗菌性能，无致耐药性，被认为是最有前途的抗生素替代品之一。虽然噬菌体在抑菌方面的优势显著，但还有很多问题需要解决，如必须低温保存。这不仅提高了保存的成本，也严重影响了噬菌体的应用半径。因此，本领域技术人员致力于开发一种可以低温保存的噬菌体材料，并扩大其应用范围。
技术实现思路
本专利技术从一个新的角度来解决上述问题。本专利技术将天然噬菌体与羟基磷灰石结合，制备“噬菌体-羟基磷灰石”复合结构。实验结果发现，该复合材料能在常温下有效延长噬菌体的保存时间，增强噬菌体的抗菌活性。本专利技术的第一个目的是提供一种噬菌体常温保存材料，其特征在于，所述材料包括羟基磷灰石，和以物理吸附的方式修饰在羟基磷灰石表面的噬菌体。优选的，所述以物理吸附的方式，包括：通过羟基磷灰石的分散液和噬菌体溶液混合后进行离心。本专利技术的第二个目的是提供一种所述的噬菌体常温保存材料的制备方法，包括如下步骤：S100、配制羟基磷灰石的分散液：将羟基磷灰石均匀分散在水中，得到溶液A；S200、将溶液A与噬菌体成分混合并离心弃去上层清液，即得所述的噬菌体常温保存材料。最后，本专利技术提供了一种所述的噬菌体常温保存材料在噬菌体抗菌剂中的应用。与现有技术相比，本专利技术的优势在于：本专利技术利用“噬菌体-羟基磷灰石”复合结构，提高了噬菌体常温保存的稳定性，使噬菌体在常温下保存5个月效价没有明显降低，解决了噬菌体不能长时间常温保存的瓶颈。附图说明图1(a)至图1(b)为磷酸根浓度对于羟基磷灰石(HAPs)吸附噬菌体的影响示意图，其中，图1(a)为磷酸根浓度对于羟基磷灰石(HAPs)吸附噬菌体PA13076的影响示意图，图1(b)为磷酸根浓度对于羟基磷灰石(HAPs)吸附噬菌体JS25的影响示意图；图2为HAPs-噬菌体PA13076复合物和HAPs-噬菌体JS25复合物在酸性条件和模拟胃肠液中的释放率对比图；图3为HAPs-噬菌体鸡尾酒与单独HAPs-噬菌体效价的对比图；图4为羟基磷灰石(HAPs)-噬菌体PA13076复合物在常温下的稳定性对比图；图5噬菌体以及HAPs-噬菌体复合物对胞内菌的裂解活性影响对比图。具体实施方式以下参考说明书附图1(a)至图5介绍本专利技术的多个优选实施例，使其
技术实现思路
更加清楚和便于理解。本专利技术可以通过许多不同形式的实施例来得以体现，本专利技术的保护范围并非仅限于文中提到的实施例。本专利技术一种噬菌体常温保存材料，其特征在于，所述材料包括羟基磷灰石，和以物理吸附的方式修饰在羟基磷灰石表面的噬菌体。在一个较佳的实施例中，所述的羟基磷灰石为10-1000nm的针状羟基磷灰石。在一个较佳的实施例中，所述的噬菌体为金黄色葡萄球菌噬菌体，沙门氏菌噬菌体，大肠杆菌噬菌体、链球菌噬菌体、副溶血弧菌噬菌体、肺炎克雷伯民菌噬菌体、李斯特菌噬菌体、无乳链球菌噬菌体、绿脓杆菌噬菌体及志贺氏菌噬菌体一种和几种，本申请中所用噬菌体均由国际噬菌体研究中心(南京)噬菌体资源库提供。本专利技术还提供了一种噬菌体常温保存材料的制备方法，包括如下步骤：S100、配制羟基磷灰石的分散液：将羟基磷灰石均匀分散在水中，得到溶液A；S200、将溶液A与噬菌体成分混合并离心弃去上层清液，即得所述的噬菌体常温保存材料。在一个较佳的实施例中，羟基磷灰石溶液的浓度为10-200mg/mL。在一个较佳的实施例中，其中，步骤S100中所述配制的比例控制在1g羟基磷灰石分散在10mL的分散液中。在一个较佳的实施例中，步骤S200中所述充分混合是在37℃下摇床上混合12-24h。最后，本专利技术还提供了一种噬菌体常温保存材料在噬菌体抗菌剂中的应用。以下结合说明书附图介绍本专利技术的3个具体实施例。实施例1制备羟基磷灰石(HAPs)-噬菌体PA13076复合物，步骤如下：S100、配制羟基磷灰石的分散液：将1g羟基磷灰石均匀分散10mL磷酸盐缓冲溶液中，得到溶液A；S200、将溶液A与10mL噬菌体PA13076溶液混合，在37℃下振荡24h，离心弃去上层清液，即得所述的噬菌体常温保存材料，并考查了不同盐种类和浓度下噬菌体的吸附量，详见表1，从表中可以看到，噬菌体PA13076随着NaCl浓度的升高，吸附率增大。在500mMNaCl时吸附率最大，为98.27％。100，300与500MgCl2吸附率差别不大，且均比加入NaCl时大，且吸附率都大于99％，分别为99.94％，99.95％和99.52％。表1盐浓度与种类对于HAPs吸附噬菌体PA13076和噬菌体JS25的影响实施例2制备羟基磷灰石(HAPs)-噬菌体JS25复合物，步骤如下：S100、配制羟基磷灰石的分散液：将1g羟基磷灰石均匀分散在10mL磷酸盐缓冲溶液中，得到溶液A；S200、将溶液A与10mL噬菌体JS25溶液混合，在37℃下振荡12h，离心弃去上层清液，即得所述的噬菌体常温保存材料，并考查了不同盐种类和浓度下噬菌体的吸附量，详见表1，从表中可以看到，在不同浓度的氯化钠溶液的中，噬菌体JS25的吸附率均大于99.9％。随着NaCl浓度的升高，上清液中噬菌体减少，吸附率增大，500mMNaCl时，吸附率最高，为99.98％。在三个不同浓度的MgCl2溶液中，100，300与500mM的MgCl2溶液的吸附率均大于99.99％。实施例3图1(a)至图1(b)为磷酸根浓度对于羟基磷灰石(HAPs)吸附噬菌体的影响示意图，其中，图1(a)为磷酸根浓度对于羟基磷灰石(HAPs)吸附噬菌体PA13076的影响示意图，图1(b)为磷酸根浓度对于羟基磷灰石(HAPs)吸附噬菌体JS25的影响示意图；从图1(a)中可以看到，随着磷酸根浓度的增大，噬菌体PA13076在HAPs的吸附率增加，当PO43-浓度大于40mM时，吸附率为100％。从图1(b)中可以看到，磷酸根浓度对于噬菌体JS25的影响随着磷酸根浓度的增大，噬菌体JS25在HAPs的吸附率增加，PO43-浓度大于30mM时，吸附率为100％。HAPs-噬菌体PA13076复合物和HAPs-噬菌体JS25复合物在酸性条件和模拟胃肠液中的释放率对比实验：图2为HAPs-噬菌体PA13076复合物和HAPs-噬菌体JS25复合物在酸性条件和模拟胃肠液中的释放率对比图，从图中可以看到，羟基磷灰石(HAPs)-噬菌体PA13076复合物在酸性条件和模拟胃肠液下都具有缓释作用，其中，在pH值为2时，3h时的释放率约为40％；在本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种噬菌体常温保存材料，其特征在于，所述材料包括羟基磷灰石，和以物理吸附的方式修饰在羟基磷灰石表面的噬菌体。/n

【技术特征摘要】
20210107 CN 20211002179731.一种噬菌体常温保存材料，其特征在于，所述材料包括羟基磷灰石，和以物理吸附的方式修饰在羟基磷灰石表面的噬菌体。


2.如权利要求1所述的材料，其中，优选的，所述羟基磷灰石可以是纳米级羟基磷灰石，也可以是微米级羟基磷灰石。


3.如权利要求1所述的材料，其中，所述的噬菌体为金黄色葡萄球菌噬菌体，沙门氏菌噬菌体，大肠杆菌噬菌体、链球菌噬菌体、副溶血弧菌噬菌体、肺炎克雷伯民菌噬菌体、李斯特菌噬菌体、无乳链球菌噬菌体、绿脓杆菌噬菌体及志贺氏菌噬菌体一种和几种。


4.一种如权利要求1-3任一项所述的材料的制备方法，包括如下步骤：
S...

【专利技术属性】
技术研发人员：王合叶，王冉，张莉莉，魏瑞成，孙利厂，包红朵，
申请(专利权)人：江苏省农业科学院，
类型：发明
国别省市：江苏;32