一种白色芽孢杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种白色芽孢杆菌及其应用。该白色芽孢杆菌(Bacillus albus) Lv5A，其保藏编号为CGMCC NO.21616。本发明专利技术分离得到的白色芽孢杆菌氧化亚氮减排效果强，且在胁迫环境中具有更强的适应能力，同时可以有效促进作用的生长，可广泛应用于水稻、玉米等农田土壤。玉米等农田土壤。玉米等农田土壤。

【技术实现步骤摘要】
一种白色芽孢杆菌及其应用


[0001]本专利技术属于农业微生物技术和环境保护领域，涉及一株白色芽孢杆菌及其应用。

技术介绍

[0002]氧化亚氮(N2O)，是一种温室气体，可输送到平流层，导致臭氧层破坏，引起臭氧空洞，且由于它在大气中停留时间较长，同时氧化亚氮百年尺度上单分子的增温潜势(GWP)是CO2的265倍(IPCC，2013)，对全球气候变化的贡献约占全部温室气体总贡献的5
‑
6％，目前已经引起了全球范围内的重视。
[0003]农业土壤是氧化亚氮重要的排放源，占全球氧化亚氮排放总量的25
‑
39％，且这个比例仍在逐年生长。农业生产中氮肥的大量投入是大气中氧化亚氮的浓度增长的重要原因之一。农减排农田土壤氧化亚氮的方法主要有施肥管理(含施肥时间与方式、施肥量、肥料类型等)、使用硝化抑制剂、科学耕作、添加生物质炭、接种具有氧化亚氮减排效应的微生物等。其中，通过添加微生物菌剂相比其它方法进行氧化亚氮减排，更加经济、易于操作。
[0004]目前可用于土壤氧化亚氮减排的微生物菌株较少，大多采用氧化亚氮还原菌，其作用单一，仅能实现氧化亚氮减排的作用。

技术实现思路

[0005]为了解决现有技术中具有土壤氧化亚氮减排功效的微生物菌株品种单一，且对农田土壤作用单一的缺陷，本专利技术提供了一种白色芽孢杆菌(Bacillus albus)Lv5A，能有效实现氧化亚氮减排、同时提高作物产量。
[0006]本专利技术从水稻根际土中分离得到一株微生物菌株，该菌株具有氧化亚氮减排效果，在高盐、碱性环境下具有较强的适应能力，同时可以促进作物的生长。该微生物菌株经生化鉴定为白色芽孢杆菌(Bacillus albus)Lv5A。其生化鉴定结果见表1。
[0007]本专利技术还提供了上述白色芽孢杆菌在减少农田温室气体氧化亚氮排放中的应用，以及在改良土壤微生物群落结构中的应用。
[0008]以上农田或土壤为水稻或玉米的农田、土壤。
[0009]本专利技术的另一方面是提供该白色芽孢杆菌在制备微生物菌剂中的应用。
[0010]具体的，上述微生物菌剂通过以下方法制备：将所述白色芽孢杆菌接入pH为7.2
‑
7.5的发酵培养基中，26
±
1℃培养，至活菌数达到2亿/毫升或2亿/克以上，即得所述微生物菌剂。
[0011]其中，发酵培养基包含蛋白胨5.0克/升、牛肉浸粉3.0克/升、硝酸钠0.3mM和丁二酸钠4.4mM，溶剂为水；或包含胰蛋白胨10.0克/升、酵母浸粉5.0克/升、氯化钠10.0克/升、硝酸钠0.3mM和丁二酸钠4.4mM，溶剂为水；或包含胰蛋白胨10.0克/升、麦芽糖5.0克/升、氯化钠10.0克/升、硝酸钠0.3mM和丁二酸钠4.4mM，溶剂为水；或包含大豆蛋白胨10.0克/升、蔗糖10.0克/升、氯化钠5.0克/升、硝酸钠0.3mM和丁二酸钠4.4mM，溶剂为水。
[0012]本专利技术还提供了该白色芽孢杆菌在制备生物有机肥中的应用。
[0013]具体的，生物有机肥采用上述微生物菌剂接种至有机肥制备得到；其中，微生物菌剂的接种比例为每克有机肥接种1毫升微生物菌剂。
[0014]本专利技术的有益效果是：所分离得到的白色芽孢杆菌氧化亚氮减排效果强，且在胁迫环境中具有更强的适应能力，同时可以有效促进作用的生长，可广泛应用于水稻、玉米等农田土壤。
[0015]本专利技术的菌种保藏日期为2021年1月13日，保藏编号为CGMCC NO.21616。分类命名为：白色芽孢杆菌(Bacillus albus)Lv5A。保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为中国科学院微生物研究所，邮编100101。
附图说明
[0016]图1为白色芽孢杆菌Lv5A的表型特征；
[0017]图中，a为平板上形态特征，b为液体培养的发酵液状态；
[0018]图2为白色芽孢杆菌Lv5A的生理生化特征；
[0019]图3为白色芽孢杆菌Lv5A在不同pH下的生长情况表征；
[0020]图4为其他菌株在不同pH下的生长情况表征；
[0021]图5为白色芽孢杆菌Lv5A在不同盐度下的生长情况表征；
[0022]图6为其他菌株在不同盐度下的生长情况表征；
[0023]图7为白色芽孢杆菌Lv5A与有机肥混合时(不加入土壤)对氧化亚氮累积排放通量的影响；
[0024]图8为微宇宙条件下，白色芽孢杆菌Lv5A对水稻土壤氧化亚氮累计排放量的影响；
[0025]图9为微宇宙条件下，白色芽孢杆菌Lv5A对玉米土壤氧化亚氮累计排放量的影响；
[0026]图10为微宇宙条件下，白色芽孢杆菌Lv5A在高盐环境下氧化亚氮累计排放量的影响。
具体实施方式
[0027]根据下述实施例，可以更好地理解本专利技术。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本专利技术，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本专利技术。
[0028]实施例1白色芽孢杆菌Lv5A的分离与筛选
[0029]称取10g水稻根际土(本实施例于2018年8月从江苏省宜兴市大铺镇水稻根际土中采样)，转移至在超净工作台中进行操作。将土样放入装有90mL 0.87％NaCl溶液的锥形瓶中，于28℃、200r/min振荡1h，制备成稀释度为10
‑1的土壤悬液；取10
‑1的土壤悬液10mL，放入装有90mL 0.87％NaCl溶液的锥形瓶中，混合均匀，配成稀释度为10
‑2的土壤悬液；以此类推。分别配成稀释度为10
‑3、10
‑4、10
‑5的土壤悬液。然后用移液器分别移取10
‑3、10
‑4、10
‑5的稀释液100μL涂布于固氮固体培养基(每升含KH2PO4，0.2g；K2HPO4，0.8g；MgSO4·
7H2O，0.2g；CaSO4·
2H2O，0.1g；FeCl3，微量；Na2Mo4·
2H2O，微量；酵母提取物，0.5g；甘露醇，20g，琼脂，15g；pH7.2，溶剂为水)上，每个梯度三个重复。在28℃恒温生化培养箱中倒置培养2～4d，每天观察其生长情况。出现单菌落后，在超净工作台中，用接种环挑取比较大的菌落接种到1/100NBNS(蛋白胨5g
·
L
‑1，牛肉浸粉3g
·
L
‑1，0.3mM NaNO3和4mM琥珀酸钠，pH7.2
‑
7.5，溶剂为
水)培养基平板上进行纯化，纯化5～6代后，用30％的甘油保藏在
‑
80℃中，待用。
[0030]实施例2白色芽孢杆菌Lv5A的鉴定
[0031]在NBNS琼脂培养基上培养呈淡黄色不透明菌落，表面粗糙，有隆起，边缘不规则，在多种培养基上均不产色素；液体培养静止时有菌膜形成，见图1。革兰氏染色呈阳性，杆状，可形成内本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种白色芽孢杆菌(Bacillus albus)Lv5A，其保藏编号为CGMCC NO.21616。2.一种根据权利要求1所述白色芽孢杆菌在制备微生物菌剂中的应用。3.一种根据权利要求1所述白色芽孢杆菌在制备生物有机肥中的应用。4.一种根据权利要求1所述白色芽孢杆菌在减少农田温室气体氧化亚氮排放中的应用。5.一种根据权利要求1所述白色芽孢杆菌在改良土壤微生物群落结构中的应用。6.一种微生物菌剂，含有权利要求1所述的白色芽孢杆菌，其特征在于，所述微生物菌剂通过以下方法制备：将所述白色芽孢杆菌接入pH为7.2
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7.5的发酵培养基中，26
±
1℃培养，至活菌数达到2亿/毫升或2亿/克以上，即得所述微生物菌剂。7.根据权利要求6所...

【专利技术属性】
技术研发人员：申卫收，于心纯，高南，杨思琪，
申请(专利权)人：南京工业大学，
类型：发明
国别省市：