本发明专利技术公开了一种抗HLA
【技术实现步骤摘要】
抗HLA-G异构体分子HLA-G5及HLA-G6的单克隆抗体及其用途
[0001]本专利技术属于生物医药领域，涉及抗HLA-G异构体抗体(9Y5G6)的以下方面：采用HLA-G分子重链第229-319位氨基酸序列的抗原肽为免疫原，制备抗HLA-G异构体HLA-G5及HLA-G6的抗体(9Y5G6)；编码本专利技术所述9Y5G6抗体的核酸分子及氨基酸序列，以及所述抗体(9Y5G6)用于HLA-G5及HLA-G6免疫组化及免疫印迹检测等用途。
技术介绍
[0002]人类白细胞抗原-G(human leukocyte antigen-G,HLA-G)基因，全长6.0kb，位于人类第6号染色体短臂远侧6p21.3。在蛋白质翻译过程中，HLA-G mRNA第 1外显子编码信号肽，第2、3和第4外显子分别编码细胞外区的α1、α2和α3 结构域，第5位外显子编码跨膜区；第6外显子编码仅含6个氨基酸残基的HLA-G 分子胞内段；由于外显子6内含有终止密码子，第7外显子不被转录；第8外显子对应于HLA-G基因的3
′
UTR。
[0003]HLA-G初始转录产物经选择性剪接，可产生7种成熟mRNA，分别编码7种不同分子量的异构体分子(HLA-G1、-G2、-G3、-G4、-G5、-G6及HLA-G7)。HLA-G1 是由全长HLA-G mRNA编码，结构上类似于HLA Ia抗原分子。HLA-G2缺乏α2 结构域；HLA-G3缺乏α2和α3结构域；HLA-G4缺乏α3结构域；HLA-G5及HLA-G6 胞外区结构域分别与HLA-G1及HLA-G2相同，但它们由含有内含子4的HLA-G mRNA编码，因内含子4中含有终止密码子，所编码的蛋白分子缺乏由外显子5 所编码的跨膜区，形成可溶性HLA-G分子。编码HLA-G7的mRNA由于内含子2 中含有终止密码子，胞外区仅含α1结构域及由内含子2所编码的2个氨基酸残基相连(图1)。HLA-G1～-G7异构体分子的分子量分别为39kD,31kD,22kD,30kD, 34kD,23kD及16kD。
[0004]生理情况下，HLA-G分子仅表达在母胎界面的绒毛外滋养层细胞，在维持母胎免疫耐受中起重要作用。病理情况下，HLA-G分子能在多种肿瘤细胞及病毒感染等组织细胞中诱导性表达，与疾病的发生及进展密切相关。HLA-G分子是体内一个重要的免疫致耐分子，其免疫抑制功能主要通过结合免疫抑制性受体免疫球蛋白样转录物-2(immunoglobulin-like transcript-2,ILT2/LILRB1/CD85j)、免疫球蛋白样转录物-4(ILT4/LILRB2/CD85d),传递抑制信号，诱导免疫耐受。具体作用机制有：
①
与表达在T细胞、NK细胞和B细胞上的ILT2结合，抑制T 细胞和NK细胞免疫杀伤活性，及B细胞增殖和抗体分泌等功能。
②
与树突状细胞(DC)上的ILT2、ILT4结合，抑制DC细胞的成熟和分化，诱导产生耐受性 DC细胞。
③
与骨髓来源抑制性细胞(MDSC)和巨噬细胞(Mφ)上的ILT2、ILT4 结合，诱导促炎抗肿瘤的M1向免疫致耐性M2细胞分化等，在机体的免疫调节中起到重要作用。HLA-G分子在免疫调解过程中，HLA-G与受体ILT2、ILT4结合，具有分子结构特异性。受体ILT2、ILT4与HLA-G结合的位点HLA-G胞外区α3 结构域。ILT2仅结合HLA-G/β2m复合物，而ILT4不仅可以与HLA-G/β2m结合，同时可以与不含β2m的游离HLA-G分子结合。由于HLA-G1、-G2、-G3、-G4、-G5、
ꢀ-
G6及HLA-G7在表达机制及分子结构上存在差异，如HLA-G3、-G4、及HLA-G7 异构体胞外区不含α3结构域，不能与ILT2和ILT4结合。因此，不同HLA-G异构体分子可在病理生理过程中发挥特定的免疫学效应。在不同病理状态下，尤其在肿瘤组织细胞中，HLA-G异构体表达存在广泛的异
质性，不同HLA-G分子异构体的表达具有特定的临床意义。因此，分析特定HLA-G异构体分子表达及不同 HLA-G异构体分子表达谱，对于阐述特定HLA-G异构体分子的生物学功能及其临床意义具有重要意义。
[0005]HLA-G分子与其他HLA-I分子在胞外区80％氨基酸序列具有同源性。因此，目前已有HLA-G抗体可能与其他HLA-I分子存在交叉反应。但HLA-G与其他HLA-I 分子不同，其胞内区结构域显著小于其他HLA-I分子。因此，HLA-G与其他HLA-I 分子在分子量上有所不同。其他HLA-I分子的分子量为45Kda，而全长的HLA-G1 分子量为39Kda。除HLA-G1分子外，HLA-G其他异构体分子包括HLA-G2～-G7异构体分子量分别为31kD,23kD,30kD,37kD,27kD及16kD，可通过免疫印迹来鉴定HLA-G分子及其异构体的表达与否。
[0006]目前国内外用于HLA-G免疫组化和免疫印迹的抗体主要有4H84，MEM-G1， MEM-G2，2A12及5A6G7。其中抗体4H84，其识别位点位于7种HLA-G异构体分子均具有的胞外区α1结构域，特异性上能够检测含有α1结构域的7种HLA-G异构体分子，在免疫组化中不能区分具体特定HLA-G异构体分子的表达。抗体 MEM-G1及MEM-G2由全长HLA-G重链免疫小鼠得到，具体识别位点无法预测，这两种抗体理论上能够识别7种HLA-G异构体分子，不能区分具体特定HLA-G异构体分子的表达。抗体2A12及5A6G7，由位于HLA-G5和HLA-G6分子羧基端22个氨基酸残基免疫小鼠获得，能够识别HLA-G5和HLA-G6分子。但抗体2A12及5A6G7 同时还可以识别其他分子量在36-175kDa范围内的未知的其他非HLA-G5和 HLA-G6分子，在免疫组化的应用上可能存在交叉反应，出现假阳性，不能正确 HLA-G5和HLA-G6分子表达。
[0007]因此，在分析HLA-G分子表达及临床意义的判断中，现有的检测HLA-G分子的抗体不都是尽如人意，迫切需要更加特异的、新的抗HLA-G分子的单克隆抗体。
技术实现思路
[0008]鉴于现有HLA-G抗体存在上述不足，本专利技术的目的是提供一种抗HLA-G5及 HLA-G6异构体分子的特异性单克隆抗体(9Y5G6)、编码本专利技术所述抗体(9Y5G6) 的核酸分子及氨基酸序列；以及所述9Y5G6抗体用于HLA-G5及HLA-G6免疫组化及免疫印迹检测等用途。
[0009]本专利技术采用HLA-G分子重链第229-319位氨基酸序列的抗原肽为免疫原，其氨基酸序列为SEQ ID No.17所示氨基酸序列，并基于此制备抗HLA-G5及HLA-G6异构体分子的特异性单克隆抗体(9Y5G6)。
[0010]根据专利技术人的研究成果，本专利技术提供了一种抗HLA-G异构体分子HLA-G5及 HLA-G6的单克隆抗体(9Y5G6)，至少包括重链高变区CDR1、C本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种抗HLA-G异构体分子HLA-G5及HLA-G6的单克隆抗体(9Y5G6)，所述单克隆抗体(9Y5G6)由保藏编号为CCTCC NO:C202045的杂交瘤细胞株9Y5G6产生。2.一种抗HLA-G异构体分子HLA-G5及HLA-G6的单克隆抗体(9Y5G6)，其特征在于，所述单克隆抗体(9Y5G6)至少包括重链高变区CDR1、CDR2和CDR3中的一种或多种，或/和轻链高变区CDR1、CDR2和CDR3中的一种或多种；所述单克隆抗体(9Y5G6)抗体轻链的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.1所示序列具有同等功能的氨基酸序列；所述抗体轻链高变区CDR1的氨基酸序列为SEQ ID No.3所示的序列QSLLHSNGHTY或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.3所示的序列具有同等功能的氨基酸序列；所述轻链高变区CDR2的氨基酸序列为SEQ ID No.4所示的序列KVS或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.4所示的序列具有同等功能的氨基酸序列，和所述轻链高变区CDR3的氨基酸序列为SEQ ID No.5所示的序列SQSTHVPWT或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.5所示的序列具有同等功能的氨基酸序列；所述单克隆抗体(9Y5G6)抗体重链的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.2所示序列具有同等功能的氨基酸序列；所述抗体重链高变区CDR1的氨基酸序列为SEQ ID No.6所示的序列GFTFRDFG或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.6所示的序列具有同等功能的氨基酸序列，所述重链高变区CDR2的氨基酸序列为SEQ ID No.7所示的序列ISNLARII或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.7所示序列具有同等功能的氨基酸序列，和所述重链高变区CDR3的氨基酸序列为SEQ ID No.8所示的序列ARVTTIVPDY或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.8所示的序列具有同等功能的氨基酸序列。3.根据权利要求2所述的一种抗HLA-G异构体分子HLA-...
【专利技术属性】
技术研发人员：颜卫华，林爱芬，章霞，
申请(专利权)人：台州恩泽医疗中心集团，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。