一种鼠源生长激素型垂体腺瘤干细胞细胞系GH3SC的构建方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种鼠源生长激素型垂体腺瘤干细胞细胞系GH3SC的构建方法及其应用。本发明专利技术以无血清培养基为前提，通过添加EGF、FGF及相关营养物质，成功建立了以GH3细胞系为基础的生长激素型垂体腺瘤干细胞细胞系GH3SC，该细胞系具有干细胞的特性，可稳定传代，同时具有高体外成球能力和高体内致瘤能力，可用于制备肿瘤动物模型，为生长激素型垂体腺瘤的发生发展分子机制的研究、药物的开发与筛选及诊断试剂的研发提供了有力的工具，是生长激素型垂体腺瘤基础研究和临床前期应用的理想细胞系。系。系。

【技术实现步骤摘要】
一种鼠源生长激素型垂体腺瘤干细胞细胞系GH3SC的构建方法及其应用


[0001]本专利技术属于细胞培养领域，具体而言，涉及一种鼠源生长激素型垂体腺瘤干细胞细胞系GH3SC的构建方法及其应用。

技术介绍

[0002]垂体腺瘤的发病率在颅内肿瘤中排名第三，虽然绝大多数垂体腺瘤为良性病变，但却长期困扰着大量的患者。其中，约12％的垂体腺瘤患者表现为外周血生长激素升高，通过IGF
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1和GH的作用，患者常表现为肢端肥大，通常伴有嘴唇，舌头，鼻子，手和脚的增大，骨骺未融合的幼儿患者则会表现为巨人症，这种垂体腺瘤称为生长激素型垂体腺瘤(Growth hormone
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pituitary adenoma，GH
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PA)。 GH
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PA是临床上常见的功能性垂体腺瘤，仅次于泌乳素型垂体腺瘤，占垂体腺瘤的10％
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15％。肿瘤本身占位效应导致患者头痛，垂体功能低下和视野缺陷， GH
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PA也是肢端肥大症最常见(99％)的病因。GH
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PA虽病程进展缓慢，但常常并发心肌肥厚、高血压、糖尿病、呼吸暂停综合征等慢性并症，严重危害患者的健康和生活质量。
[0003]大部分情况下，GH
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PA的首选治疗是经蝶窦外科切除腺瘤，但由于一些侵袭性肿瘤及巨大腺瘤的存在，无法完全切除，残留肿瘤的再生使该病有复发的可能，需要联合放疗和化疗。在少数情况下，一些学者认为，药物可以作为治疗 GH
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>PA的首选，包括麦卡角林、生长激素受体拮抗剂和生长抑素类似物等。但对于GH
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PA侵犯海绵状肿瘤，放疗效果在肿瘤减少和生物缓解率方面均较差，同时药物治疗存在不良反应。虽然GH
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PA是良性肿瘤，但治疗效果仍不容乐观，深入研究GH
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PA的发病机制具有重要意义。GH
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PA的发病机制复杂，同时，由于活检病理的不可取性、缺乏分泌功能性激素的人类垂体细胞系和难以重塑激素分泌或非功能性人垂体肿瘤表型的动物模型等原因，人类垂体肿瘤发病机制目前仍尚未完全阐明。
[0004]大量的研究表明肿瘤的发生与增殖取决于肿瘤组织中的一小部分具有干细胞特性的细胞，即肿瘤干细胞(Cancer stem cells，CSCs)，肿瘤干细胞的存在是肿瘤无限增殖的重要机制，目前，已经证实垂体腺瘤中亦存在肿瘤干细胞，具有增殖、多向分化的潜能。虽然相关研究学者对生长激素型垂体腺瘤进行了大量的研究，但是对于GH
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PA发生发展的分子机制仍未阐明。在现今临床和科研应用中均缺乏较为成熟的垂体瘤干细胞细胞系，也是目前临床和科研应用中亟需解决的技术问题。本专利技术针对目前该领域存在的上述问题，以无血清培养基为前提，通过添加EGF、FGF及相关营养物质，成功建立了以GH3细胞系为基础的生长激素型垂体腺瘤干细胞细胞系GH3SC(GH3 stem cell，简称为GH3SC)。可为下一步探索垂体腺瘤的发生发展机制及治疗过程提供实验材料。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于克服现有技术存在的缺陷，提供一种鼠源生长激素型垂体腺瘤干细胞细胞系GH3SC，具体涉及一种鼠源生长激素型垂体腺瘤干细胞细胞系GH3SC的构建方
法及其应用。
[0006]本专利技术构建的鼠源生长激素型垂体腺瘤干细胞细胞系GH3SC可稳定传代，具有肿瘤干细胞的特性、高的体外成球能力和高的体内致瘤能力，该细胞系可用于生长激素型垂体腺瘤发生发展分子机制的研究、药物的开发与筛选、诊断试剂的研发、生长激素型垂体腺瘤相关的新的生物标志物的发现及耐药机理的研究中，是生长激素型垂体腺瘤基础研究和临床前期应用的理想细胞系。
[0007]根据本专利技术的第一个方面，本专利技术提供了一种鼠源生长激素型垂体腺瘤干细胞细胞系，其特征在于，所述细胞系命名为GH3SC，于2020年11月30日由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物保藏中心保藏，保藏号为CGMCC No.21017；
[0008]优选地，所述细胞系包括其产生的子代细胞。
[0009]根据本专利技术的又一个方面，本专利技术提供了本专利技术前面所述的鼠源生长激素型垂体腺瘤干细胞细胞系的制备方法。
[0010]进一步，所述方法包括如下步骤：
[0011](1)采用无血清培养基对GH3细胞系进行培养；
[0012](2)将步骤(1)中培养后的GH3细胞系进行传代，制备稳定的悬浮生长的鼠源生长激素型垂体腺瘤干细胞细胞系。
[0013]进一步，步骤(1)中所述的无血清培养基为包含EGF、bFGF、N2、B27、青
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链霉素的DMEM/F12培养基；
[0014]优选地，所述EGF的浓度为20ng/mL；
[0015]优选地，所述bFGF的浓度为20ng/mL；
[0016]优选地，所述青
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链霉素的浓度为200U/mL。
[0017]进一步，步骤(1)中所述的培养的时间为4周，每2
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3天换液一次。
[0018]进一步，步骤(2)中所述的传代时间为1周。
[0019]在本专利技术的实施例中，通过对所述干细胞细胞系的多种干细胞标志物的表达情况进行检测，证明了本专利技术所述的鼠源生长激素型垂体腺瘤干细胞细胞系能表达多种干细胞标志物，具有干细胞的特性。
[0020]在本专利技术的实施例中，通过体外成球实验，证明了本专利技术所述的鼠源生长激素型垂体腺瘤干细胞细胞系具有高的体外成球的能力。
[0021]在本专利技术的实施例中，通过皮下成瘤实验，证明了本专利技术所述的鼠源生长激素型垂体腺瘤干细胞细胞系具有高的体内致瘤的能力。
[0022]在本专利技术的实施例中，GH3细胞系是Wistar大鼠来源的肿瘤细胞系。
[0023]采用本专利技术前面所述的方法获得的鼠源生长激素型垂体腺瘤干细胞细胞系具有稳定的生物学特性，以及高体外成球能力，可传代培养，表达多种干细胞标志物，具有干细胞的自我更新、定向分化的潜能，同时，所述细胞系移植至小鼠皮下的成瘤能力强，成瘤率高，具有肿瘤的性质。
[0024]根据本专利技术的又一个方面，本专利技术提供了一种肿瘤动物模型。
[0025]进一步，所述模型是通过将本专利技术前面所述的细胞系接种到非人哺乳动物体内形成的；
[0026]优选地，所述非人哺乳动物为小鼠；
[0027]更优选地，所述非人哺乳动物为免疫缺陷的小鼠；
[0028]优选地，接种的细胞数量为5000个；
[0029]更优选地，接种方式为皮下注射。
[0030]在本专利技术的实施例中，所述免疫缺陷的非人哺乳动物优选为6周龄的NOG 免疫缺陷小鼠。
[0031]根据本专利技术的又一个方面，本专利技术提供了本专利技术前面所述的细胞系在制备生长激素型垂体腺瘤动物模型中的应用。
[0032]在本专利技术的实施例中，本专利技术涉及采用本发本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种鼠源生长激素型垂体腺瘤干细胞细胞系，其特征在于，所述细胞系命名为GH3SC，于2020年11月30日由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物保藏中心保藏，保藏号为CGMCC No.21017；优选地，所述细胞系包括其产生的子代细胞。2.权利要求1所述的鼠源生长激素型垂体腺瘤干细胞细胞系的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)采用无血清培养基对GH3细胞系进行培养；(2)将步骤(1)中培养后的GH3细胞系进行传代，制备稳定的悬浮生长的鼠源生长激素型垂体腺瘤干细胞细胞系。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述的无血清培养基为包含EGF、bFGF、N2、B27、青
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链霉素的DMEM/F12培养基；优选地，所述EGF的浓度为20ng/mL；优选地，所述bFGF的浓度为20ng/mL；优选地，所述青
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链霉素的浓度为200U/mL。4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤...

【专利技术属性】
技术研发人员：贾旺，康鹏，原林皓，
申请(专利权)人：首都医科大学附属北京天坛医院，
类型：发明
国别省市：