含氨基或羧基基团物质标记的RBP抗体、人RBP免疫层析检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种含氨基或羧基基团物质标记的RBP抗体、人RBP免疫层析检测试剂盒及其制备方法，所述含氨基或羧基基团物质标记的抗体的制备方法，包括以下步骤：1)将RBP单克隆抗体溶于酸性缓冲液中，之后加入胃蛋白酶进行酶切反应；2)将酶切后的混合溶液使用中性缓冲液透析过夜；3)将得到的液体通过Protein A亲和纯化，DEAE纤维素阴离子交换层析法纯化获得RBP

【技术实现步骤摘要】
含氨基或羧基基团物质标记的RBP抗体、人RBP免疫层析检测试剂盒及其制备方法


[0001]本专利技术属于体外诊断领域，具体涉及一种含氨基或羧基基团物质标记的RBP抗体、人RBP免疫层析检测试剂盒及其制备方法。

技术介绍

[0002]常用的检测用抗体为单克隆抗体或多克隆抗体，是一种IgG。当抗体结合抗原后，补体与抗体Fc段的补体结合位点结合，对检测试剂造成干扰。此外，Fc段的存在也可能使检测试剂存在假性干扰。
[0003]另外，当前的抗体偶联技术多采用共价偶联。由于抗体表面含有丰富的氨基和羧基，这两类基团也是抗体偶联中使用最多的官能团。通常采用的策略是将固相如磁性微球，聚苯乙烯微球或者酶类等表面的羧基用EDC/NHS活化，再与抗体表面氨基形成稳定的酰胺键。极少会采用EDC/NHS对抗体表面的羧基进行活化，因为抗体表面本身带有氨基，容易产生自交联的情况。由于氨基和羧基在抗体表面是普遍存在的，因此这种偶联方法也是随机的。当标记于抗体的互补决定区时，会使抗体失活。即使标记位于Fc段也会因空间位阻的存在造成免疫活性的降低。r/>[0004]视本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种含氨基或羧基基团物质标记的RBP抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将RBP单克隆抗体溶于酸性缓冲液中，之后加入胃蛋白酶进行酶切反应；2)将步骤1)酶切后的混合溶液使用中性缓冲液透析过夜；3)步骤2)得到的液体通过Protein A亲和纯化，DEAE纤维素阴离子交换层析法纯化获得RBP
‑
F(ab
’
)2；4)将步骤3)得到的RBP
‑
F(ab
’
)2与HOOC
‑
(CHCHO)n
‑
NH2共价偶联，形成抗体中间体；5)将步骤4)得到的抗体中间体与含氨基或羧基基团的物质共价结合，得到含氨基或羧基基团物质标记的RBP抗体。2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中，所述RBP抗体、胃蛋白酶与酸性缓冲液与的质量比例为(0.5
‑
1)：(0.5
‑
1)：10000；所述酶切反应的温度为37℃
‑
55℃；所述酶切反应的时间为0.5
‑
2小时；所述酸性缓冲液的pH值在1～7之间，其选自柠檬酸缓冲液、醋酸缓冲液、磷酸缓冲液、Tris
‑
磷酸盐缓冲液、有机酸缓冲液、氨基酸缓冲液和MES缓冲液中的一种。3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中，所述中性透析缓冲液的pH值在6～8之间，其为磷酸缓冲液、Tris
‑
盐酸缓冲液、巴比妥钠
‑
盐酸缓冲液、硼酸
‑
硼砂缓冲液或MES缓冲液。4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤4)中，所述HOOC
‑
(CHCHO)n
‑
NH2中n为3～100000之间；所述RBP
‑
F(ab
...

【专利技术属性】
技术研发人员：林斯，付琼，徐亚涛，陶鑫，韩艳华，
申请(专利权)人：北京华科泰生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：