鸡JAZF1基因多克隆抗体及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种鸡JAZF1基因多克隆抗体及其制备方法与应用，属于生物技术领域。该方法包括以下步骤：步骤1：通过对鸡源JAZF1基因进行生物学分析筛选优质核苷酸序列，用以构建重组质粒；步骤2：构建JAZF1重组质粒，制备JAZF1重组蛋白，并将其作为抗原；步骤3：通过抗原免疫反应，制备鸡JAZF1基因多克隆抗体。该方法可以制备高质量的多克隆抗体，并且该多克隆抗体可用于动物机体中JAZF1蛋白的检测，具有应用范围广、特异性强、操作简便和费用较低等多方面优点，还为多种肉鸡及其他家禽类疾病病理机制的研究和诊断奠定了材料基础。理机制的研究和诊断奠定了材料基础。理机制的研究和诊断奠定了材料基础。

【技术实现步骤摘要】
鸡JAZF1基因多克隆抗体及其制备方法与应用


[0001]本专利技术涉及生物
，涉及一种鸡JAZF1基因多克隆抗体及其制备方法与应用，特别涉及与肉鸡肺动脉高压(腹水)类等疾病发生发展相关的鸡JAZF1基因多克隆抗体及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]肉鸡腹水综合征(ascites syndrome，AS)是一种具有精神萎靡、肉冠发白、呼吸困难、腹部肿胀呈深紫色并排出白绿色稀粪等主要临床病理症状的严重非传染性、代谢性群发禽病，又称肉鸡肺动脉高压综合征和心衰综合征。这类疾病主要由营养、环境、遗传和饲养管理等因素引起，并在快速生长的幼龄鸡群中高发，这是因为雏鸡的生长速度迅速，营养代谢旺盛，生物需氧量与供氧量之间的平衡遭到破坏，致使大量携氧红细胞在肺部毛细血管内无法畅通流出，抑制血液灌注到肺部，引起肺动脉压持续增加，最终导致心脏衰竭形成腹水。已有研究表明，这种肺动脉高压和腹水类疾病已经对我国的商业肉鸡养殖业带来严重的危害，这类肉鸡疾病一般多发生于寒冷的冬春季节，且伴有明显的群发性，发病率可达的10％
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40％，死亡率一般为10％
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20％，严重时可达60％，且呈逐年上升趋势。目前在美国、加拿大、英国等其他国家也接连出现该类疾病的报道，在全世界范围内该病的发病率约为4％,死亡率可达到2～5％左右,每年经济损失高达数亿美元，显然这类疾病正严重危害着全球的肉鸡养殖产业。
[0003]锌指并列基因1(Juxtaposed with Another Zinc Finger gene 1，JAZF1)又名Tip27(TAK1
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interacting protein 27)，参与调节机体的多种生物活动。已有研究表明，JAZF1的表达可以通过增强脂质的降解来减少脂质的累积，并调节关键酶磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPCK)的表达来调控糖异生，进而控制机体的糖、脂代谢，防止因肺动脉出现大量的脂肪沉积而阻碍血液的流动，造成机体心肺血灌注不足出现明显缺氧，进而引起动脉血管内皮细胞损伤。同时，作为TAK1的辅助性抑制因子，该基因还会抑制NF
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kB信号通路，削弱异常损伤细胞的增殖扩散，促进其发生大量凋亡，进而对动物机体起到一个多效保护作用。综上可知，JAZF1与肉鸡肺动脉高压和腹水类疾病存在着密切的联系。
[0004]在本实验室前期研究中，Yang等已经证明与正常组相比较，肉鸡发生此类疾病时，会降低JAZF1基因mRNA的表达。这表明在分子水平上，JAZF1的表达对此类疾病的发生发展有着明显的影响。但是，在蛋白水平上对此类疾病的影响尚未明确。目前通过调节JAZF1的表达来调节机体的生长和改善糖尿病等症状的研究较多，但是通过制备JAZF1多克隆抗体为肉鸡的腹水类疾病的检测和病理机制研究几乎未见报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种鸡JAZF1基因多克隆抗体及其制备方法与应用，以解决上述现有技术存在的问题，该多克隆抗体的制备简便，成本低，灵敏度高，作用范围广，为后期JAZF1蛋白的检测和腹水类疾病病理机制的研究提供了物质支撑。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
[0007]本专利技术提供一种鸡JAZF1基因多克隆抗体的制备方法，包括以下步骤：
[0008]步骤1：通过对鸡源JAZF1基因进行生物学分析筛选优质核苷酸序列，用以构建重组质粒；
[0009]步骤2：构建JAZF1重组质粒，制备JAZF1重组蛋白，并将其作为抗原；
[0010]步骤3：通过抗原免疫反应，制备鸡JAZF1基因多克隆抗体。
[0011]优选的是，所述JAZF1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，其编码的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。
[0012]优选的是，JAZF1重组蛋白含有如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。
[0013]优选的是，所述步骤2中，具体方法为：
[0014]S1：获取JAZF1基因序列，并构建PET32a
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JAZF1重组表达载体；
[0015]S2：所述PET32a
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JAZF1重组表达载体转入大肠杆菌诱导表达JAZF1重组蛋白，经过分理纯化后，得到JAZF1重组蛋白。
[0016]优选的是，所述鸡JAZF1基因多克隆抗体的制备方法包括：将所述抗原免疫新西兰大白兔，再从免疫的新西兰大白兔中分离纯化血清，获得多克隆抗体。
[0017]本专利技术还提供一种所述的鸡JAZF1基因多克隆抗体的制备方法制备得到的鸡JAZF1基因多克隆抗体。
[0018]本专利技术还提供所述的鸡JAZF1基因多克隆抗体在制备肉鸡肺动脉高压和腹水类疾病药物中的应用。
[0019]本专利技术还提供所述的鸡JAZF1基因多克隆抗体在制备检测肉鸡肺动脉高压和腹水类疾病的检测试剂中的应用。进一步地，本专利技术并不限于肉鸡肺动脉高压和腹水类疾病,还包括与家禽JAZF1基因相关的其他类疾病。
[0020]本专利技术公开了以下技术效果：
[0021]本专利技术采用克隆、亚克隆技术构建出PET32a
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JAZF1表达载体，经由异丙基
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β
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D
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硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达的重组JAZF1蛋白纯化后作为抗原免疫新西兰大白兔，从而制备高质量的多克隆抗体。利用酶联免疫吸附试验、蛋白免疫印记和间接免疫荧光技术等检测方法对JAZF1基因表达进行检测以验证该多克隆抗体的灵敏度和特异性，结果显示免疫新西兰大白兔的抗JAZF1的血清效价高达1:102400，并且该多克隆抗体能特异性结合动物组织中的JAZF1蛋白，且JAZF1蛋白的表达主要集中于动物各种器官的细胞质部分，充分证实了该抗体具有灵敏度好、特异性强、应用范围广等方面的优点，这为后期JAZF1蛋白的检测和腹水类疾病病理机制的研究提供了物质支撑。
附图说明
[0022]图1为与肉鸡肺动脉高压和腹水类疾病发生发展相关的JAZF1基因多克隆抗体研制方法的技术路线图；
[0023]图2为克隆和表达重组质粒的构建的结果；A：JAZF1基因的聚合酶链式反应扩增产物(669bp)，泳道1、2：JAZF1基因蛋白的PCR扩增产物；泳道3：阴性对照；B：克隆重组质粒的菌液PCR结果图，泳道1
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3：
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T3
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JAZF1重组质粒中已经插入的JAZF1基因片段；泳道4：阴性对照；C：表达载体PET32a
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JAZF1的菌液PCR结果图，泳道1、2：PET32a
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JAZF1表达重组
质粒中已经插入的目的片段；泳道3：阴性对照；D：BamHI和HindIII对重组质粒PET32a
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JAZF1和PET
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32a空载质粒双酶切鉴定，泳道1：重组质粒PET32a
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种鸡JAZF1基因多克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：通过对鸡源JAZF1基因进行生物学分析筛选优质核苷酸序列，用以构建重组质粒；步骤2：构建JAZF1重组质粒，制备JAZF1重组蛋白，并将其作为抗原；步骤3：通过抗原免疫反应，制备鸡JAZF1基因多克隆抗体。2.如权利要求1所述的鸡JAZF1基因多克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述JAZF1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，其编码的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。3.如权利要求1所述的鸡JAZF1基因多克隆抗体的制备方法，其特征在于，JAZF1重组蛋白含有如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。4.如权利要求1所述的鸡JAZF1基因多克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述步骤2中，具体方法为：S1：获取JAZF1基因序列，并构建PET32a

【专利技术属性】
技术研发人员：刘平，胡国良，郭小权，顾玥明，刘佩，许兰娇，程素芳，李麟，李谷月，庄煜，杨帆，胡睿铭，黄橙，黄露佳，郭凤萍，李庆庆，方玮乐，
申请(专利权)人：江西农业大学，
类型：发明
国别省市：