用于诊断抗AMA-M2抗体阳性与阴性PBC患者的糖链标志物及其用途制造技术

本发明专利技术通过采用含有56种凝集素的凝集素芯片检测PBC中抗AMA‑M2抗体阳性患者与阴性患者血清IgG与凝集素特异性结合的聚糖差异。结果显示，与阴性患者相比，ABA和GNL凝集素结合聚糖的含量在抗AMA‑M2抗体阳性患者中是降低的。由于ABA凝集素是特异性结合半乳糖，GNL凝集素是特异性结合甘露糖，这表明半乳糖和甘露糖水平在抗AMA‑M2抗体阳性患者中的表达是减少的。凝集素免疫印迹验证结果表明，ABA和GNL凝集素结合聚糖的含量在抗线粒体抗体AMA‑M2阳性患者中依然是降低的。可见，ABA凝集素与IgG结合所形成的复合物和/或GNL凝集素与IgG结合所形成的复合物可作为用于诊断抗AMA‑M2抗体阳性PBC患者与抗AMA‑M2抗体阴性PBC患者的糖链标志物。

【技术实现步骤摘要】
用于诊断抗AMA-M2抗体阳性与阴性PBC患者的糖链标志物及其用途
本专利技术属于生物检测领域，具体涉及一种用于诊断抗AMA-M2抗体阳性PBC患者与抗AMA-M2抗体阴性PBC患者的糖链标志物及其用途。
技术介绍
原发性胆汁性胆管炎(primarybiliarycholangitis，PBC)，是一种自身免疫性疾病，其特征在于慢性炎症和肝内胆管破坏。PBC主要在中年女性中观察到。PBC患者通常表现出异常的肝脏检查，包括碱性磷酸酶(ALP)升高，γ谷氨酰转肽酶(GGT)以及症状的组合，包括瘙痒，疲劳和门静脉高压症。抗线粒体抗体(AMA)是PBC的血清学标志，在将近95％的患者中发现。血清AMA，尤其是AMA-M2亚型，被认为是PBC最具体，最可接受的诊断指标之一。AMA-M2在PBC中的敏感性和特异性很高，可高达84.5/97.8％。无PBC临床症状但AMA阳性的人群极有可能发展为PBC。研究表明仍有5％～l0％的PBC患者血清AMA阴性，AMA阴性和阳性PBC患者临床表现相同，但AMA阴性患者预后更差且表现出更严重的胆管损伤、CD4细胞在导管区浸润增加和胆管损伤早期的B细胞浸润增加。IgG是人体内含量最丰富的抗体。它参与多种体液免疫过程：抗原中和、补体激活和补体依赖性细胞毒(CDC)、抗体依赖性细胞介导的细胞毒(ADCC)和超敏反应。多糖是由多达15个单糖残基组成的复杂低聚糖，约占IgG重量的15％，是IgG不可分割的部分，它组成的变化会影响IgG的结构稳定性、构象和半衰期，以及它的效应器功能。事实上，如果多糖完全去除会导致IgG促炎活性和抗炎活性的丧失。自从在类风湿性关节炎患者中发现IgG糖基化异常改变后，已有越来越多的证据表明IgG糖基化在自身免疫性疾病中发挥着重要的作用。本研究拟通过高通量的糖基化分析技术——凝集素微阵列技术来检测抗AMA-M2亚型阳性患者与阴性患者血清IgG糖基化修饰差异，以期探讨糖基化两者在PBC中的临床应用价值。
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术提供一种用于诊断抗AMA-M2抗体阳性PBC患者与抗AMA-M2抗体阴性PBC患者的糖链标志物及其用途。首先，本专利技术提供一种用于诊断抗AMA-M2抗体阳性PBC患者与抗AMA-M2抗体阴性PBC患者的糖链标志物，其为ABA凝集素与IgG结合所形成的复合物和/或GNL凝集素与IgG结合所形成的复合物。其中，所述的IgG含有半乳糖和/或甘露糖。其次，本专利技术还提供所述糖链标志物在用于制备诊断抗AMA-M2抗体阳性PBC患者与抗AMA-M2抗体阴性PBC患者的试剂中的用途。具体地，所述诊断包括：测定待测的生物样品中ABA凝集素与IgG结合所形成的复合物和/或GNL凝集素与IgG结合所形成的复合物水平；任选地，与对照数据比较所述生物样品中ABA凝集素与IgG结合所形成的复合物的水平和/或GNL凝集素与IgG结合所形成的复合物的水平，其中，相对于所述对照数据，所述样品中ABA凝集素与IgG结合所形成的复合物的水平和/或GNL凝集素与IgG结合所形成的复合物的水平可检测地降低表明生物样品来自PBC抗AMA-M2抗体阳性的可能性，其中，所述生物样品为血清样品。优选的，ABA凝集素与IgG结合所形成的复合物以及GNL凝集素与IgG结合所形成的复合物的水平均通过以下步骤来测量，包括：a.使来自患者的生物样品与ABA凝集素或GNL凝集素接触；b.在生物样品中存在的IgG与ABA凝集素或GNL凝集素形成凝集素-聚糖复合物；c.洗涤来除去任何未结合的IgG；d.添加被标记的并且对来自生物样品的抗体为反应性的检测抗体；e.洗涤来除去任何未结合的被标记的所述检测抗体；和f.将所述检测抗体的标记物转化为可检测信号。其中，所述的ABA凝集素和/或GNL凝集素沉积或固定在固相表面载体上，优选地，所述的固相表面载体是乳胶珠子、多孔平板或膜条、纳米管道、带二维码的薄片等的形式，优选地，所述检测抗体通过共价连接到酶、具有荧光化合物或金属的标记物、或具有化学发光化合物的标记物来标记。本专利技术还提供ABA凝集素和/或GNL凝集素在制备用于诊断抗AMA-M2抗体阳性PBC患者与抗AMA-M2抗体阴性PBC患者的试剂中的用途。所述诊断包括：测定待测的生物样品中ABA凝集素与IgG结合所形成的复合物和/或GNL凝集素与IgG结合所形成的复合物水平；任选地，与对照数据比较所述生物样品中ABA凝集素与IgG结合所形成的复合物的水平和/或GNL凝集素与IgG结合所形成的复合物的水平，其中，相对于所述对照数据，所述样品中ABA凝集素与IgG结合所形成的复合物的水平和/或GNL凝集素与IgG结合所形成的复合物的水平可检测地降低表明生物样品来自PBC抗AMA-M2抗体阳性的可能性。其中，所述生物样品为血清样品。其中，所述的ABA凝集素和/或GNL凝集素沉积或固定在固相表面载体上。其中，所述的固相表面载体优选为乳胶珠子、多孔平板或膜条、纳米管道、带二维码的薄片等的形式。其中，所述检测抗体通过共价连接到酶、具有荧光化合物或金属的标记物、或具有化学发光化合物的标记物来标记。本研究通过采用含有56种凝集素的凝集素芯片检测PBC中抗AMA-M2抗体阳性患者与阴性患者血清IgG与凝集素特异性结合的聚糖差异。结果显示，与阴性患者相比，ABA和GNL凝集素结合聚糖的含量在抗AMA-M2抗体阳性患者中是降低的。由于ABA凝集素是特异性结合半乳糖，GNL凝集素是特异性结合甘露糖，这表明半乳糖和甘露糖水平在抗AMA-M2抗体阳性患者中的表达是减少的。为了证实这一结果的可靠性，本研究还采用凝集素免疫印迹验证结果。结果表明，ABA和GNL凝集素结合聚糖的含量在抗线粒体抗体AMA-M2阳性患者中依然是降低的，与凝集素微芯片的结果相符合。附图说明图1A为整张凝集素芯片；1B为芯片微阵列56种凝集素；1C为Cy5标记的IgG抗体与凝集素反应荧光强度。图2所示为凝集素芯片检测PBC患者中抗AMA-M2抗体阳性和阴性血清IgG与凝集素ABA和GNL特异性结合信噪比(*p<0.05，**p<0.01)。图3所示为凝集素ABA免疫印迹图。图4所示为凝集素印迹检测检测PBC患者中抗AMA-M2抗体阳性和阴性血清IgG与凝集素ABA特异性结合强度(*p<0.05)。图5所示为凝集素GNL免疫印迹图。图6所示为凝集素印迹检测检测PBC患者中抗AMA-M2抗体阳性和阴性血清IgG与凝集素GNL特异性结合强度(*p<0.05)。具体实施方式以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。实施例1凝集素微阵列分析血清IgG糖基化实验标本：本次研究PBC患者：抗AMA-M2阳性(20例)，抗AMA-M2阴性(20例)，见表1。其中PBC患者的诊断均本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于诊断抗AMA-M2抗体阳性PBC患者与抗AMA-M2抗体阴性PBC患者的糖链标志物，其为ABA凝集素与IgG结合所形成的复合物和/或GNL凝集素与IgG结合所形成的复合物。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于诊断抗AMA-M2抗体阳性PBC患者与抗AMA-M2抗体阴性PBC患者的糖链标志物，其为ABA凝集素与IgG结合所形成的复合物和/或GNL凝集素与IgG结合所形成的复合物。


2.权利要求1所述的糖链标志物在用于制备诊断抗AMA-M2抗体阳性患者与抗AMA-M2抗体阴性PBC患者的试剂中的用途。


3.如权利要求2所述的用途，其特征在于，所述诊断包括：测定待测的生物样品中ABA凝集素与IgG结合所形成的复合物和/或GNL凝集素与IgG结合所形成的复合物水平；任选地，
与对照数据比较所述生物样品中ABA凝集素与IgG结合所形成的复合物的水平和/或GNL凝集素与IgG结合所形成的复合物的水平，其中，相对于所述对照数据，所述样品中ABA凝集素与IgG结合所形成的复合物的水平和/或GNL凝集素与IgG结合所形成的复合物的水平可检测地降低表明生物样品来自PBC抗AMA-M2抗体阳性的可能性。


4.ABA凝集素和/或GNL凝集素在制备用于诊断抗AMA-M2抗体阳性PBC患者与抗AMA-M2抗体阴性PBC患者的试剂中的用途。


5.如权利要求4所述的用途，其特征在于，所述诊断包括：测定待测的生物样品中ABA凝集素与IgG结合所形成的复合物和/或GNL凝集素与IgG结合所形成的复合物水平；任选地，
与对照数据比较所述生物样品中ABA凝集素与IgG结合所形成的复合物的水平和/或GN...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡朝军，李斯亭，李晞，曾小莉，唐诗逸，李梦涛，曾小峰，
申请(专利权)人：中国医学科学院北京协和医院，
类型：发明
国别省市：北京;11