一种具有阿尔法螺旋结构的拟抗体筛选库、其构建方法及应用技术

本发明专利技术涉及蛋白质类药物筛选系统，具体涉及一种具有阿尔法螺旋结构的拟抗体筛选库、其构建方法及应用。本发明专利技术提供用于拟抗体筛选的DNA库，由多个DNA分子组成，所述多个DNA分子具有如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列；所述核苷酸序列中的N为A，T，G或C，K为G或T。还提供一种RNA库，是由所述DNA库经转录反应获得。还提供一种拟抗体筛选库，是由所述RNA库经体外无细胞表达获得的RNA‑拟抗体库，或者由所述RNA‑拟抗体库经反转录获得的cDNA‑拟抗体库。还提供一种筛选针对靶蛋白质的拟抗体的方法，该方法使用本发明专利技术的拟抗体筛选库进行筛选，可得到高效及特异结合靶蛋白质的拟抗体。

【技术实现步骤摘要】
一种具有阿尔法螺旋结构的拟抗体筛选库、其构建方法及应用
本专利技术涉及蛋白质类药物筛选系统，具体涉及一种具有阿尔法螺旋结构的拟抗体筛选库、其构建方法及应用。
技术介绍
拟抗体是一种功能与抗体类似，但结构与之没有任何关系的有机化合物，它可以与抗原特异结合，通常它是人造的肽或者蛋白质。以阿尔法螺旋结构为基础构型的拟抗体(英文文献中被命名为affibody)是一类经蛋白质工程设计合成的结合蛋白。此类型拟抗体的设计来源于金黄色葡萄球菌的A蛋白的与免疫球蛋白结合的结构域，由不含半胱氨酸的氨基酸折叠而成，含有三个阿尔法螺旋结构，大小约6.5千道尔顿(Tashiro,M.,Tejero,R.,Zimmerman,D.E.,Celda,B.,Nilsson,B.,&Montelione,G.T.(1997).High-resolutionsolutionNMRstructureoftheZdomainofstaphlococcalproteinA.JournalofMolecularBiology.)。既往研究表明，以该螺旋结构为主体的拟抗体在本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于拟抗体筛选的DNA库，由多个DNA分子组成，其特征在于：所述多个DNA分子具有如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列；所述核苷酸序列中的N为A，T，G或C，K为G或T。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于拟抗体筛选的DNA库，由多个DNA分子组成，其特征在于：所述多个DNA分子具有如SEQIDNO:1所示的核苷酸序列；所述核苷酸序列中的N为A，T，G或C，K为G或T。


2.根据权利要求1所述的DNA库，其特征在于：所述多个DNA分子的5’端还包含T7噬菌体RNA聚合酶启动子序列和核糖体结合位点序列，3’端还包含用于连接嘌呤霉素连接体的链接DNA序列和终止密码子。


3.根据权利要求1所述的DNA库，其特征在于：所述多个DNA分子具有如SEQIDNO:2所示的核苷酸序列；所述核苷酸序列中的N为A，T，G或C，K为G或T。


4.根据权利要求1所述的DNA库，其特征在于：所述DNA库的DNA多样性为2013。


5.一种用于拟抗体筛选的RNA库，其特征在于：是由权利要求1-4任一所述的DNA库经转录反应获得。


6.一种拟抗体筛选库，其特征在于：是由权利要求5所述的RNA库经体外无细胞表达获得的RNA-拟抗体库，或者由所述RNA-拟抗体库经反转录获得的cDNA-拟抗体库。


7.包含权利要求1-4任一所述的DNA库或权利要求5所述的RNA库或权利要求6所述的拟抗体筛选库的试剂盒。


8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包含用于拟抗体筛选的通用试剂；所述通用试剂包括PCR试剂、DNA提取与纯化试剂、体外转录试剂、RNA提取与纯化试剂、体外无细胞表达试剂，和/或反转录试剂。


9.一种拟抗体筛选库的构建方法，其特征在于：包括如下步骤：
1)合成权利要求1-4任一所述的DNA库；
2)以所述DNA库为模板，合成RNA库；
3)将所述RNA库与嘌呤霉素连接体连接，获得嘌呤霉素连接体-RNA库；
4)以所述嘌呤霉素连接体-RNA库为模板进行体外无细胞表达，获得RNA-拟抗体库；
5)以所述RNA-拟抗体库为模板进行反转录，获得拟抗体筛选库。


10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：
步骤1)中，通过两步重叠PCR反应合成DNA库；第一步PCR反应使用核苷酸序列如SEQIDNO:4和SEQIDNO:5所示的引物；第二步PCR反应使用核苷酸序列如SEQIDNO:6和SEQIDNO:7所示的引物；引物中的N为A，T，G，C的等摩尔混合物，K为G，T的等摩尔混合物；
步骤3)中，所述嘌呤霉素连接体由SEQIDNO:8所示的寡核苷酸经5’端修饰PO4...

【专利技术属性】
技术研发人员：李永琦，
申请(专利权)人：北京创智智能健康技术研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11