一种重组寨卡病毒减毒株及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种重组寨卡病毒减毒株，所述重组寨卡病毒减毒株至少存在以下一种非同义突变：包膜蛋白中第304位的丝氨酸突变为苯丙氨酸，非结构蛋白1中第103位的精氨酸突变为赖氨酸，非结构蛋白5中第637位色氨酸突变为精氨酸，还公开了重组寨卡病毒cDNA、重组寨卡病毒表达蛋白、重组表达载体及重组寨卡病毒减毒株在制备重组寨卡病毒疫苗中的应用。本发明专利技术所制备得到的重组寨卡病毒减毒株能够在体外细胞水平稳定复制，实验表明其具有明显的减毒特征，同时该重组寨卡病毒减毒株具有良好的免疫原性，其诱导的抗体可抑制寨卡病毒的感染，具有良好的保护作用，预测其可作为减毒活疫苗进行后续临床研究及应用。

【技术实现步骤摘要】
一种重组寨卡病毒减毒株及其制备方法和应用
本专利技术涉及生物
，特别是涉及一种重组寨卡病毒减毒株及其制备方法和应用。
技术介绍
寨卡病毒(Zikavirus,ZIKV)是一种蚊媒传播的单股正链RNA病毒，属于黄病毒科。大多数人感染ZIKV通常是无症状的或仅引起轻微症状，如皮疹，发烧，关节痛和结膜炎。2013年，法属波利尼西亚爆发了大规模的ZIKV感染，随后蔓延至美洲，太平洋，东南亚和非洲的80多个国家和地区。ZIKV的感染与严重的神经系统症状有关，例如婴儿的小头畸形和成人的格林巴利综合症。尽管疫情已逐渐下降，但全球仍有近61个国家散布着埃及伊蚊的有效传播媒介，这些国家仍存在爆发寨卡疫情的巨大隐患。当前，没有临床可用的ZIKV疫苗与药物。几种候选疫苗正在接受临床前和临床试验，但均未获得临床许可。因此，仍需要安全有效的ZIKV疫苗。ZIKV基因组编码一个大的多聚蛋白，该蛋白被剪切成三个结构蛋白和七个非结构蛋白。包膜蛋白(envelopeprotein，E)介导病毒附着并进入宿主细胞。大多数候选疫苗主要针对E蛋白，因为E蛋白包含中和抗体本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组寨卡病毒减毒株，其特征在于，所述重组寨卡病毒减毒株至少存在以下一种非同义突变：包膜蛋白中第304位的丝氨酸突变为苯丙氨酸，非结构蛋白1中第103位的精氨酸突变为赖氨酸，非结构蛋白5中第637位色氨酸突变为精氨酸。/n

【技术特征摘要】
1.一种重组寨卡病毒减毒株，其特征在于，所述重组寨卡病毒减毒株至少存在以下一种非同义突变：包膜蛋白中第304位的丝氨酸突变为苯丙氨酸，非结构蛋白1中第103位的精氨酸突变为赖氨酸，非结构蛋白5中第637位色氨酸突变为精氨酸。


2.根据权利要求1所述的重组寨卡病毒减毒株，其特征在于，所述重组寨卡病毒减毒株存在以下三种非同义突变：包膜蛋白中第304位的丝氨酸突变为苯丙氨酸，非结构蛋白1中第103位的精氨酸突变为赖氨酸，非结构蛋白5中第637位色氨酸突变为精氨酸。


3.根据权利要求1所述的重组寨卡病毒减毒株，其特征在于，所述重组寨卡病毒减毒株的cDNA的核苷酸序列如SEQIDNO.18所示，或如SEQIDNO.18所示且经取代、缺失和/或添加一个或多个核苷酸，但能编码相同蛋白质的核苷酸序列。


4.一种重组寨卡病毒cDNA，其特征在于，所述重组寨卡病毒减毒株的cDNA为野生型寨卡病毒cDNA且所编码蛋白中存在以下至少一种非同义突变：包膜蛋白中第304位的丝氨酸突变为苯丙氨酸，非结构蛋白1中第103位的精氨酸突变为赖氨酸，非结构蛋白5中第637位色氨酸突变为精氨酸的核苷酸序列；
或所述重组寨卡病毒cDNA的核苷酸序列如SEQIDNO.18所示，或如SEQIDNO.18所示且经取代、缺失和/或添加一个或多个核苷酸，但能编码相同蛋白质的核苷酸序列。


5.一种重组寨卡病毒表达蛋白，其特征在于，其为权利要求1-3任一项所述重组寨卡病毒减毒株所表达的蛋白；或其为权利要求4所述重组寨卡病毒cDNA翻译的蛋白。


6.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体上插入有如权利要求4所述的重组寨卡病毒cDNA，或所述重组表达载体上插入可用于表达权利要求5所述重组寨卡病毒表达蛋白的基因。


7.一种重组寨卡病毒减毒株的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)在野生型的寨卡病毒的NS2A和NS5之间插入了NS2A的3'区域到NS5的5'区域的片段，通过体外连接构建寨卡病毒cDNA克隆pVAX-GZ02-Intron；
(2)以pVAX-GZ02-Intron为模板，以序列如SEQIDNO.14-SEQIDNO.15所示的引物对进行PCR获得5’UTR-optE片段，以序列如SEQIDNO.16-SEQIDNO.1...

【专利技术属性】
技术研发人员：冯立强，陈凌，叶贤苗，
申请(专利权)人：中国科学院广州生物医药与健康研究院，
类型：发明
国别省市：广东;44