一种人脐带间充质干细胞的分离培养方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种人脐带间充质干细胞的分离培养方法及应用，所述分离培养方法包括如下步骤：从脐带组织中分离得到脐带华通氏胶；在脐带华通氏胶中添加含有褪黑素的无血清培养基并剪碎脐带华通氏胶，再置于1.5％～2.5％的O

【技术实现步骤摘要】
一种人脐带间充质干细胞的分离培养方法及应用
本专利技术涉及细胞培养
，具体涉及一种人脐带间充质干细胞的分离培养方法及应用。
技术介绍
细胞治疗的出现为当前没有有效治疗方法的疾病，提供了突破性的技术手段，例如Car-T细胞治疗肿瘤和间充质干细胞治疗免疫异常疾病。其中间充质干细胞通过旁分泌产生大量免疫调节的细胞因子，对许多免疫异常疾病都有突出疗效。在常规的间充质干细胞分离培养过程中，由于遗传的不稳定性和过氧化物累积，导致细胞随着细胞代次增加逐渐累加基因突变，有文献报道当干细胞传代至P8以后，间充质干细胞的遗传突变将显著增加。除了干细胞的遗传突变，在临床中发现间充质干细胞表达组织因子，作为凝血因子3参与到凝血过程中，因此间充质干细胞在临床使用过程中，静脉注射间充干细可能导致血栓的发生。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种人脐带间充质干细胞的分离培养方法及应用，该分离培养方法得到的人脐带间充质干细胞能够保持较高的细胞干性、CXCR4高表达以及TissueFactor表达下调，显著降低间充质干细胞静脉输注时的栓塞本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种人脐带间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，包括如下步骤：/n(a)从脐带组织中分离得到脐带华通氏胶；/n(b)将脐带华通氏胶进行剪碎并添加含有褪黑素的无血清培养基，再置于1.5％～2.5％的O

【技术特征摘要】
1.一种人脐带间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，包括如下步骤：
(a)从脐带组织中分离得到脐带华通氏胶；
(b)将脐带华通氏胶进行剪碎并添加含有褪黑素的无血清培养基，再置于1.5％～2.5％的O2浓度下进行贴壁培养，待贴壁细胞融合度为50％～80％时，弃掉脐带华通氏胶碎块并继续培养；
(c)待培养结束，消化分散细胞，然后，离心、接种进行传代培养，得到人脐带间充质干细胞。


2.根据权利要求1所述的分离培养方法，其特征在于，所述步骤(b)中，脐带华通氏胶剪碎至1～3mm3。


3.根据权利要求1所述的分离培养方法，其特征在于，所述置于1.5％～2.5％O2浓度下进行贴壁培养包括：
将剪碎的脐带华通氏胶进行平铺，并置于1.5％～2.5％的O2浓度下进行培养，次日补充含有褪黑素的无血清培养基，之后每间隔3～4天换液一次。


4.根据权利要求1所述的分离培养方法，其特征在于，所述步骤(b)中，弃掉脐带华通氏胶碎块并继续培养包括：
弃掉脐带华通氏胶碎块后，添加含有褪黑素的无血清培养基继续培养2～3天。


5.根据权利要求1～4任一所述的分离培养方法，其特征在于，所述含有褪黑素的无血清培养基中褪黑素的浓度为5～15μM。


6.根据权利要求1所述的分离培养方法，其特征在于，所述步骤(...

【专利技术属性】
技术研发人员：贾在美，
申请(专利权)人：贾在美，
类型：发明
国别省市：山东;37