本发明专利技术提供了一种靶向Siglec‑15的噬菌体多肽及其应用，属于生物技术领域。本发明专利技术通过噬菌体展示技术获得特异性靶向Siglec‑15的噬菌体多肽，所述噬菌体多肽与Siglec‑15具有较高的亲和性和特异性。本发明专利技术所述的靶向Siglec‑15的噬菌体多肽可广泛应用于生物医学的各个领域，如生物分析检测、肿瘤成像、药物靶向治疗记忆肿瘤细胞的捕获和释放等领域，同时为临床筛选适合用于Siglec‑15靶向治疗的患者提供了前提。
【技术实现步骤摘要】
一种靶向Siglec-15的噬菌体多肽
本专利技术属于生物
，具体涉及一种靶向Siglec-15的噬菌体多肽及其应用。
技术介绍
癌症(cancer)是指起源于上皮组织的恶性肿瘤，是恶性肿瘤中最常见的一类，而实体瘤是其常见形式。实体瘤细胞在肿瘤微环境为逃避免疫攻击形成了多种机制，免疫系统的激活如肿瘤特异T细胞的激活不一定就能杀灭肿瘤，最常见的是PD-1/PD-L1机制。所以靶向肿瘤微环境中肿瘤诱导的免疫逃逸是有效杀死肿瘤的关键。阻断PD-L1/PD-1相互作用被认为是减少肿瘤免疫逃逸的关键。最近研究发现，还存在另一种重要的免疫逃逸机制-唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素15(Sialicacid-bindingimmunoglobulin-likelectin15，siglec-15)，决定着不表达PD-L1的肿瘤的生死命运。通过在线数据库分析发现，siglec-15在肿瘤细胞的表达比正常细胞高，并和癌症预后紧密相关。正常情况下Siglec-15只出现在一些髓系细胞，在肿瘤细胞和肿瘤浸润髓系细胞广泛上调。利用基因组T细胞活性芯片，发现Siglec-15是主要的免疫抑制物，Siglec-15和PD-L1的表达是相互排斥的。这种特征和巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)的诱导、γ干扰素(IFN-γ)的下调有关。不管是体外还是体内Siglec-15都抑制抗原特定性T细胞的反应，Siglec-15的遗传去除或者抗体阻断增强了肿瘤微环境的抗肿瘤免疫力，并抑制小鼠模型的肿瘤生长。Siglec-15还是关键的预后生物标志物，在肿瘤中发挥免疫调节作用。例如：肺癌病人Siglec-15表达增加则CD20阳性B细胞和星状细胞显著减少、细胞因子实时转录增加，存活时间、无进展存活期显著减少(LiB,ZhangB,WangX,Zetal.Expressionsignature,prognosisvalue,andimmunecharacteristicsofSiglec-15identifiedbypan-canceranalysis.Oncoimmunology.2020Aug28；9(1):1807291)。非小细胞癌的研究发现腺癌的Siglec-15的表达高于鳞癌，S-15的表达和基质中CD8阳性T细胞密度正相关，而鳞癌的PD-L1的表达高于腺癌。Siglec-15在遗传和表观遗传水平被调控。Siglec-15糖基化稳定了溶酶体依赖，并促进Siglec-15向细胞膜转运。通过微芯片的研究发现Siglec-15和唾液酸化的多糖结合，而不和唾液酸化的Tn抗原结合或其它相关抗原序列结合。肿瘤相关的多糖(tumor-associatedcarbohydrates，TACA)通过白细胞上的受体能够抑制抗肿瘤的免疫反应，髓系细胞、自然杀伤细胞和T细胞通过Siglec受体抑制抗肿瘤活性。其它受体如selectins也和肿瘤进展相关。多糖和lectin的相互作用是癌症免疫治疗的另一重要靶点。在肾透明细胞癌中，长非编码RNALINC00973正调节miR-7109，而miR-710直接作用于Siglec-15，起到癌症免疫抑制作用。LINC00973-miR-7109-Siglec-15在免疫逃逸中起重要作用，可用于癌症的治疗、诊断和预后研究(LiuY,LiX,ZhangC,etal.LINC00973isinvolvedincancerimmunesuppressionthroughpositiveregulationofSiglec-15inclear-cellrenalcellcarcinoma.CancerSci.2020Aug11；111(10):3693–704)。噬菌体展示技术(phagedisplaytechnology)是将外源蛋白或多肽的DNA序列插入到噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置，使外源基因随外壳蛋白的表达而表达，同时，外源蛋白随噬菌体的重新组装而展示到噬菌体表面的生物技术。被展示的多肽或蛋白可以保持相对独立的空间结构和生物活性，以利于靶分子的识别和结合。肽库与固相上的靶蛋白分子经过一定时间孵育后，洗去未结合的游离噬菌体，然后以竞争受体或酸洗脱下与靶分子结合吸附的噬菌体，洗脱的噬菌体感染宿主细胞后经繁殖扩增，进行下一轮洗脱，经过3-5轮的“吸附-洗脱-扩增”后，与靶分子特异结合的噬菌体得到高度富集。所得的噬菌体制剂可用来做进一步富集，得到可结合特性目标的噬菌体。Siglec-15单克隆抗体已经用于肺癌、乳腺癌、肝癌、结直肠癌、黑色素瘤、卵巢癌等15种癌症的临床试验，发现对PD-1无效或耐药的患者可能出现肿瘤缩小或完全消失。Siglec-15单克隆抗体的治疗效果和癌细胞上Siglec-15的表达密切相关，而传统的病理活检和免疫组织化学分析具有创伤性。受限于肿瘤的非均一性，活检组织并不一定能代表癌组织整体状况。特别是在治疗中，受体的表达还会随时间而变化。综上所述，亟需建立一种非侵入性的显像方法用于癌细胞上Siglec-15的实时监测，为癌症患者提供适时治疗。
技术实现思路
针对上述不足，本专利技术提供了一种靶向Siglec-15的噬菌体多肽及其应用。本专利技术通过噬菌体展示技术获得特异性结合Siglec-15的多肽，利用该多肽可以制备非侵入性显示癌细胞上Siglec-15表达的实时探针，为临床筛选适合用于Siglec-15靶向治疗的患者提供了前提。为了实现上述专利技术目的，本专利技术的技术方案如下：一方面，本专利技术提供了一种靶向Siglec-15的噬菌体多肽，所述的噬菌体多肽为噬菌体展示肽。具体地，所述的噬菌体展示肽中的多肽为线性多肽。具体地，所述的噬菌体展示肽的氨基酸序列为SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4和/或SEQIDNO:5所示的序列。进一步具体地，所述的噬菌体展示肽的编码基因序列为SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9和/或SEQIDNO:10所示的核苷酸序列。另一方面，本专利技术提供了上述噬菌体多肽的制备方法，所述的制备方法包括如下步骤：(1)将Siglec-15-BSA包被在酶标板上，用5％BSA封闭酶标板，将噬菌体展示随机七肽库加入包被和封闭后的酶标板中进行亲合筛选，筛选过程按照“吸附-洗涤-洗脱-扩增”的循环进行，共5轮筛选；(2)经5轮筛选后，挑取阳性克隆进行扩增，质粒提取，测序，得到上述靶向Siglec-15的噬菌体多肽；(3)采用ELISA方法检测步骤(2)得到的噬菌体多肽与Siglec-15结合的亲和性和特异性。又一方面，本专利技术提供了一种检测或鉴定Siglec-15的产品，所述的产品包括上述噬菌体多肽。具体地，所述的产品包括但不限于独立试剂、试剂盒、探针、药物或医疗装置。又一方面，本专利技术提供了上述噬菌体多肽在制备检测或鉴定Siglec-15产品中的应用。又一方面，本专利技术提供了一种检测或鉴定癌症的产品，所述的产品包括上述噬菌本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种靶向Siglec-15的噬菌体多肽，其特征在于：/n所述的噬菌体多肽为噬菌体展示肽；/n所述的噬菌体展示肽中的多肽为线性多肽；/n所述的噬菌体展示肽的氨基酸序列为SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQID NO:4和/或SEQ ID NO:5所示的序列。/n
【技术特征摘要】
1.一种靶向Siglec-15的噬菌体多肽，其特征在于：
所述的噬菌体多肽为噬菌体展示肽；
所述的噬菌体展示肽中的多肽为线性多肽；
所述的噬菌体展示肽的氨基酸序列为SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4和/或SEQIDNO:5所示的序列。
2.根据权利要求1所述的噬菌体多肽，其特征在于：所述的噬菌体展示肽的编码基因序列为SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9和/或SEQIDNO:10所示的核苷酸序列。
3.一种权利要求1所述的噬菌体多肽的制备方法，其特征在于：所述的制备方法包括以下步骤：
(1)将Siglec-15-BSA包被在酶标板上，用5％BSA封闭酶标板，将噬菌体展示随机七肽库加入包被和封闭后的酶标板中进行亲合筛选，筛选过程按照“吸附-洗涤-洗脱-扩增”的循环进行，共5轮筛选；
(2)经5轮筛选后，挑取阳性克隆进行扩增，质粒提取，测序，得到上述靶向Siglec-15的噬菌体多肽；
(3)采用ELISA方...
【专利技术属性】
技术研发人员：蔡炯，刘毅，高大林，宋旭，肖凯，梁晨，丁国中，刘明霞，
申请(专利权)人：江苏元本生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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