特异性结合VEGF和ANG2的双特异性抗体制造技术

本公开提供了特异性结合VEGF和ANG2的双特异性抗体，其包含特异性结合VEGF的抗VEGF抗体或其抗原结合片段和特异性结合ANG2的抗ANG2单域抗体，其中所述的抗ANG2单域抗体直接地或间接地连接至抗VEGF抗体或其抗原结合片段。本公开还提供了抗ANG2单域抗体及其抗原结合片段，以及上述抗体的制备和应用。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】特异性结合VEGF和ANG2的双特异性抗体
本公开属于生物制药领域，具体地，本公开涉及抗ANG2单域抗体或其抗原结合片段、抗VEGF抗体或其抗原结合片段，以及抗ANG2单域抗体与抗VEGF抗体融合形成的双特异性抗体的制备和应用。
技术介绍
这里的陈述仅提供与本公开有关的背景信息，而不必然地构成现有技术。新血管的生成为肿瘤细胞提供氧气和养料，使得肿瘤细胞获得生长优势，从无血管的慢速生长期到有血管的快速增长期。因此，通过抑制血管生成来抑制肿瘤的生长是一个较有潜力的有效策略。在众多促进血管生成的相关因子中，血管内皮生长因子VEGF是非常关键和重要的促进血管生成的因子。VEGF可以通过与VEGF受体结合来促进细胞的增殖、迁移、增加血管通透性等来促进肿瘤细胞的新生血管生成。因此通过阻断VEGF可抑制肿瘤血管的生成，进而达到抑制肿瘤生长和转移的目的。临床上有很多通过不同策略阻断VEGF的生物制剂，诸如针对VEGF的单抗阿瓦斯汀(Avastin)，中和VEGF的可溶性VEGF受体，针对VEGF受体的单抗等都显示出较好的活性。但肿瘤血管的生成是由众多分子、多信本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种特异性结合VEGF和ANG2的双特异性抗体，其包含特异性结合VEGF的抗VEGF抗体或其抗原结合片段和特异性结合ANG2的抗ANG2单域抗体，其中所述的抗ANG2单域抗体直接地通过肽键或间接地通过接头共价连接至抗VEGF抗体或其抗原结合片段。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20190318 CN 2019102042463一种特异性结合VEGF和ANG2的双特异性抗体，其包含特异性结合VEGF的抗VEGF抗体或其抗原结合片段和特异性结合ANG2的抗ANG2单域抗体，其中所述的抗ANG2单域抗体直接地通过肽键或间接地通过接头共价连接至抗VEGF抗体或其抗原结合片段。


根据权利要求1所述的特异性结合VEGF和ANG2的双特异性抗体，其中所述的抗ANG2单域抗体直接地通过肽键或间接地通过接头连接至抗VEGF抗体或其抗原结合片段的重链羧基端，优选地，所述接头为(G)
n，其中n>＝1。



根据权利要求1或2所述的特异性结合VEGF和ANG2的双特异性抗体，其中所述的抗ANG2单域抗体包含如SEQIDNO:5所示或与其具有至多3个氨基酸替换突变的CDR1，如SEQIDNO:6所示或与其具有至多6个氨基酸替换突变的CDR2和如SEQIDNO：7所示或与其具有至多3个氨基酸替换突变的CDR3区。


根据权利要求1至3中任一项所述的特异性结合VEGF和ANG2的双特异性抗体，其中所述的抗ANG2单域抗体包含如SEQIDNO:14所示的CDR1，如SEQIDNO:15所示的CDR2和如SEQIDNO:7所示的CDR3。


根据权利要求1至4中任一项所述的特异性结合VEGF和ANG2的双特异性抗体，其中所述的抗ANG2单域抗体包含如下任一项所示的CDR1、CDR2和CDR3：
i)如SEQIDNO:5所示的CDR1、如SEQIDNO:6所示的CDR2和如SEQIDNO:7所示的CDR3；
ii)如SEQIDNO:8所示的CDR1、如SEQIDNO:9所示的CDR2和如SEQIDNO:7所示的CDR3；
iii)如SEQIDNO:5所示的CDR1、如SEQIDNO:10所示的CDR2和如SEQIDNO:7所示的CDR3；或
iv)如SEQIDNO:5所示的CDR1、如SEQIDNO:11所示的CDR2和如SEQIDNO:7所示的CDR3。


根据权利要求1至5中任一项所述的特异性结合VEGF和ANG2的双特异性抗体，其中所述的抗ANG2单域抗体为羊驼抗体或人源化抗体。


根据权利要求6所述的特异性结合VEGF和ANG2的双特异性抗体，其中所述的人源化抗体包含来源自人抗体的重链框架区或其框架区变体，所述框架区变体在人抗体的重链框架区上具有至多10个氨基酸的回复突变；
优选地，所述回复突变选自5Q、30N、83K、84P、93N和94A中的一个或更多个。


根据权利要求6所述的特异性结合VEGF和ANG2的双特异性抗体，其中所述的抗ANG2单域抗体包含如下任一项所示的序列：
v)如SEQIDNO:16所示的序列，优选地，如SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:12或SEQIDNO:13所示的序列，或
vi)如SEQIDNO:27所示的序列，优选地，如SEQIDNO:17、18、19、20、21、22、23、24、25或26所示的序列。


根据权利要求1至8中任一项所述的特异性结合VEGF和ANG2的双特异性抗体，其中所述的抗VEGF抗体或其抗原结合片段包含：
分别如SEQIDNO：32、SEQIDNO：33和SEQIDNO：34所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和分别如SEQIDNO：35、SEQIDNO：36和SEQIDNO：37所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3。


根据权利要求9所述的特异性结合VEGF和ANG2的双特异性抗体，其中所述的抗VEGF抗体或其抗原结合片段包含如SEQIDNO:28所示的轻链可变区和如SEQIDNO:30所示的重链可变区。


根据权利要求10所述的特异性结合VEGF和ANG2的双特异性抗体，其中所述的抗VEGF抗体或其抗原结合片段包含如SEQIDNO:29所示的轻链和如SEQIDNO:31或54所示的重链。


根据权利要求1至11中任一项所述的特异性结合VEGF和ANG2的双特异性抗体，其包含选自SEQIDNO：38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、55或56中任一所示的第一多肽链，和/或如SEQIDNO:29所示的第二多肽链。


一种抗ANG2单域抗体，其包含如SEQIDNO:5所示或与其具有至多3个氨基酸替换突变的CDR1，如SEQIDNO:6所示或与其具有至多6个氨基酸替换突变的CDR2和如SEQIDNO：7所示或与其具有至多3个氨基酸替换突变的CDR3区。


根据权利要求13所述的抗ANG2单域抗体，其中所述的抗ANG2单域抗体包含如SEQIDNO:14所示的CDR1，如SEQIDNO:15所示的CDR2和如SEQIDNO:7所示的CDR3。

【专利技术属性】
技术研发人员：应华，石金平，毛浪勇，葛虎，杨筱莹，陶维康，
申请(专利权)人：江苏恒瑞医药股份有限公司，上海恒瑞医药有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32