龟肽的生产方法技术

本发明专利技术属生物制备技术领域，涉及一种龟肽的生产方法，取成年活龟经宰杀、清洗、去骨后破碎成龟肉糜浆体；将龟甲提取物与龟肉糜浆体混合并经超声波均质化后，用超纯水调制成底物溶液，加入蛋白酶进行酶解；酶解所得反应产物经灭酶、灭菌、超滤法分离、真空冷冻干燥后得到可溶性粉末状龟肽。本发明专利技术以多种龟种复合组分为原料应用酶解法生产的龟肽，最大限度地提取了成龟中的活性肽分子，同时保存了原料中的其他生物活性成分，诸多生物活性成分相辅相成，能有效地调节免疫、抗氧化、抗肿瘤、抗疲劳、调节血脂、改善睡眠、延缓衰老，从而达到滋阴壮阳、强身健体、美容养颜、延年益寿的作用。

【技术实现步骤摘要】
龟肽的生产方法
本专利技术属生物制备
，涉及一种龟肽的生产方法，具体地说，涉及一种多龟种来源、以及氨基酸聚合度相对均匀分布的龟肽的生产方法。
技术介绍
现代科学研究发现，在中国传统文化中有着“长寿、吉祥”寓意的龟类之所以长寿，不仅因为它们独特的生理结构和生活习性，还因为它们体内含有丰富的调节免疫、抗氧化、抗肿瘤、抗疲劳、调节血脂、改善睡眠、延缓衰老等功能的生物活性物质，比如不饱和脂肪酸、维生素E、硒等微量元素、活性蛋白、胶原蛋白、游离脂肪酸等，使之得以幸免于癌症、心脑血管疾病、糖尿病等人类最常见的疾病。研究成果表明，肽是构成蛋白质的重要成分。同时，作为构成所有人体细胞的基本材料，肽涉及到人体中激素、神经、生殖，以及细胞的更新、代谢、生长、修复等多个领域。肽还具有调节体内各个系统器官和细胞的生理功能。现今，在各种来源的肽当中，龟肽极可能是肽中的皇冠，同时，有关龟肽的研究成果也对我国龟类入药、保健养生的悠久药食传统提供了有力的科学佐证，还为开发有益于人类健康长寿的养生食品、保健食品、特医食品乃至生物药品指明了方向。目前，以龟类生物为原料制备龟肽的方法，均采用单一龟种作为原料，且要么以活龟组织为原料，要么以龟甲胶为原料，通过酶解法制取龟肽，但龟肽产品的成分受到局限，没法体现全龟成分。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种龟肽的生产方法，以多种龟种进行搭配，分别取龟组织、龟甲作为原料来源，应用酶解法生产的龟肽，最大限度地提取了成龟中的活性肽分子，同时保存了原料中的其他生物活性成分，诸多生物活性成分相辅相成，能有效地调节免疫、抗氧化、抗肿瘤、抗疲劳、调节血脂、改善睡眠、延缓衰老，从而达到滋阴壮阳、强身健体、美容养颜、延年益寿的作用。本专利技术所采用的技术方案：一种龟肽的生产方法，其步骤如下：1、取不同种类的成年活龟经宰杀、清洗、去骨，按重量等份数比例将龟肉混合后经机械破碎、超声波破碎成龟肉糜浆体。所述不同种类的成年活龟是指金钱龟(即三线闭壳龟)、石金钱龟(即黄喉拟水龟)、中华草龟、乌龟、鳄鱼龟、黄缘盒龟、苏卡达龟、大头龟、平胸龟、箱龟、锦龟或泥龟中的3种或3种以上。所述龟肉糜浆体中的固形物不超过10目。2、按重量比为1：1～10的比例取龟甲提取物(按专利CN104946488A中所述的方法制备)与龟肉糜浆体混匀并均质化后，再用超纯水制备成5～50％(W/V)的底物溶液。3、在底物溶液中加入0.1～1.0mg/mL蛋白酶，恒温条件下酶解，期间调节pH至5～8(用0.01～0.5mol/L的NaOH或HCl来调节pH值)。所述蛋白酶为胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶中的一种、二种或二种以上复合。所述恒温的温度是40～70℃。所述的酶解时间为1～24h。4、将酶解产物灭酶、灭菌后，依次用截留分子量分别为9KD、6KD以及3KD的超滤膜过滤，获得4种不同分子量的龟肽酶解液，其分子量分别为：大于9KD、6～9KD、3～6KD和小于3KD。所述的灭酶过程：将反应体系置于90～100℃的热水中，均匀搅拌下维持5～30min。所述的超滤膜过滤过程中，采用二氧化碳气体保护反应体系。5、将所得各分子量段的龟肽酶解液分别真空冷冻干燥后，得到4种不同分子量的肽组分粗品(白色至浅黄色可溶性粉末)。6、将制取的4种肽组分粗品按照重量比1:1:1:1的比例均匀混合得到全龟成分龟肽。本专利技术的有益效果：(1)原料活龟同时选用3种或3种以上，并且在投料时保持一定的比例，最大限度地提取了成龟中的活性肽分子，同时保存了原料中的其他生物活性成分，以保障最终产品中功效成分的种类和含量尽可能均衡，诸多生物活性成分相辅相成，能有效地调节免疫、抗氧化、抗肿瘤、抗疲劳、调节血脂、改善睡眠、延缓衰老，从而达到滋阴壮阳、强身健体、美容养颜、延年益寿的作用。(2)从龟甲胶制取龟肽，具有生产效率高的优势。然而在从龟甲熬制龟甲胶的过程中，部分蛋白质不可避免地会在高温下产生变性、分解而失去生物活性。本专利技术同时采用活龟组织以及龟甲胶为原料生产龟肽，既可以最大化利用活龟组织中的蛋白质资源，又兼顾了生产效率。(3)从酶解产物中，截取不同分子量的肽按照相同的重量比来配制成最终产品，同时满足了“均衡营养”、“小分子肽更易于被人体吸收”这两方面的医学需求，是一种更先进的配方形式。具体实施方式下面结合实施例，对本专利技术的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例一(1)取金钱龟、石金钱龟、中华草龟的鲜活成龟，经宰杀、清洗、去骨后，按照1:1:1的重量比例将龟肉混合后分别经机械破碎、超声波破碎成龟肉糜浆体，其中的固形物不超过10目。(2)按专利CN104946488A中所述的方法，取龟壳制取龟甲提取物。(3)取1000g龟肉糜浆体、100g龟甲提取物混匀并均质化后，再用超纯水制备成10％(W/V)的底物溶液。(4)在底物溶液中加入0.5mg/mL木瓜蛋白酶，65℃恒温下酶解15h，期间调节pH至6.5±0.1。(5)将所得酶解产物灭酶、灭菌后，依次用截留分子量分别为9KD、6KD以及3KD的超滤膜过滤，分别获得4种不同分子量(大于9KD、6～9KD、3～6KD和小于3KD)的龟肽酶解液。(6)将所得各分子量段的龟肽酶解液分别真空冷冻干燥后，得到分子量大小不同的4种白色至浅黄色可溶性粉末，即肽组分粗品；(7)鉴于分子量越小的肽越易于被人体吸收的原理，将制取的4种肽组分粗品按照重量比1:1:1:1的比例均匀混合得到全龟成分龟肽217g。实施例二(1)取金钱龟、鳄鱼龟、黄缘盒龟、平胸龟、箱龟的鲜活成龟，经宰杀、清洗、去骨后，按照1:1:1:1:1的重量比例将龟肉混合后分别经机械破碎、超声波破碎成龟肉糜浆体，其中的固形物不超过10目。(2)按专利CN104946488A中所述的方法，取龟壳制取龟甲提取物。(3)取2000g龟肉糜浆体、400g龟甲提取物混匀并均质化后，再用超纯水制备成20％(W/V)的底物溶液。(4)在底物溶液中加入0.8mg/mL复合蛋白酶，55℃恒温下酶解20h，期间调节pH至5.5±0.1。(5)将所得酶解产物灭酶、灭菌后，依次用截留分子量分别为9KD、6KD以及3KD的超滤膜过滤，分别获得4种不同分子量(大于9KD、6～9KD、3～6KD和小于3KD)的龟肽酶解液。(6)将所得各分子量段的龟肽酶解液分别真空冷冻干燥后，得到分子量大小不同的4种白色至浅黄色可溶性粉末，即肽组分粗品；(7)鉴于分子量越小的肽越易于被人体吸收的原理，将制取的4种肽组分粗品按照重量比1:1:1:1的比例均匀混合得到全龟成分龟肽584g。实施例三、(1)本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种龟肽的生产方法，其特征在于，其步骤如下：/n1)、取不同种类的成年活龟经宰杀、清洗、去骨，按重量等份数比例将龟肉混合后经机械破碎、超声波破碎成龟肉糜浆体；/n2)、按重量比为1：1～10的比例取龟甲提取物与龟肉糜浆体混匀并均质化后，再用超纯水制备成5～50％(W/V)的底物溶液；/n3)、在底物溶液中加入0.1～1.0mg/mL蛋白酶，恒温条件下酶解，期间调节pH至5～8；/n4)、将酶解产物灭酶、灭菌后，依次用截留分子量分别为9KD、6KD以及3KD的超滤膜过滤，获得4种不同分子量的龟肽酶解液，其分子量分别为：大于9KD、6～9KD、3～6KD和小于3KD；/n5)、将所得各分子量段的龟肽酶解液分别真空冷冻干燥后，得到4种不同分子量的肽组分粗品；/n6)、将制取的4种肽组分粗品按照重量比1:1:1:1的比例均匀混合得到全龟成分龟肽。/n

【技术特征摘要】
1.一种龟肽的生产方法，其特征在于，其步骤如下：
1)、取不同种类的成年活龟经宰杀、清洗、去骨，按重量等份数比例将龟肉混合后经机械破碎、超声波破碎成龟肉糜浆体；
2)、按重量比为1：1～10的比例取龟甲提取物与龟肉糜浆体混匀并均质化后，再用超纯水制备成5～50％(W/V)的底物溶液；
3)、在底物溶液中加入0.1～1.0mg/mL蛋白酶，恒温条件下酶解，期间调节pH至5～8；
4)、将酶解产物灭酶、灭菌后，依次用截留分子量分别为9KD、6KD以及3KD的超滤膜过滤，获得4种不同分子量的龟肽酶解液，其分子量分别为：大于9KD、6～9KD、3～6KD和小于3KD；
5)、将所得各分子量段的龟肽酶解液分别真空冷冻干燥后，得到4种不同分子量的肽组分粗品；
6)、将制取的4种肽组分粗品按照重量比1:1:1:1的比例均匀混合得到全龟成分龟肽。


2.根据权利要求1所述的龟肽的生产方法，其特征在于：所述不同种类的成年活龟是指金钱龟、石...

【专利技术属性】
技术研发人员：张世凯，
申请(专利权)人：海南金龟岛生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：海南;46