一种斯赤列提取物的应用制造技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，公开了一种斯赤列提取物的应用。以斯赤列为原料，用溶剂超声提取2次，抽滤后合并滤液，减压浓缩得浸膏，所得浸膏经冷冻干燥后即得斯赤列提取物。该提取物能够提高成骨细胞的增殖能力，促进碱性磷酸酯酶、骨矿化结节的形成，使得成骨细胞分化标记基因RUNX2、BSP、OCN和COL1A1相对表达量上升，促进成骨细胞分化，具有治疗/预防骨质疏松的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种斯赤列提取物的应用
本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种斯赤列提取物的应用。
技术介绍
骨质疏松是一种骨形成和骨吸收紊乱导致的代谢性骨疾病。该病与年龄呈正相关，目前我国人口老龄化日趋严重，骨质疏松症已成为我国面临的公共健康问题[2-4]。骨质疏松性骨折是老年患者致残和致死的主要原因之一，有研究表明，髋部发生骨折后1年之内，20%患者死于各种并发症，有50%患者因致残生活质量显著降低，造成巨大的家庭和社会负担。在骨骼组织微环境中，成骨细胞和破骨细胞的动态平衡维持着骨骼的稳态和重塑。成骨细胞主要负责骨形成，而破骨细胞主要负责骨吸收，健康状态下，二者的功能和活性处于平衡状态。当破骨细胞异常激活时，骨吸收量高于骨形成量，则会发生骨质流失骨密度减少，矿物质含量降低，骨骼脆性升高，导致骨质疏松，进而增加骨折的风险。目前临床上骨质疏松的治疗方案主要是使用双膦酸盐和降钙素类药物来抑制破骨细胞的活性，使骨吸收进程减慢，但是长期应用会导致破骨细胞处于“无应答”状态，临床效果不尽人意。近年来以增强成骨细胞的活性进而加快骨形成的方法引起学者注意，有望成为理想的治疗方法。斯赤列（SambucusadnataWall.）为忍冬科接骨木属植物，干燥地上部分或全草，又名血满草、接骨药、接骨丹、大血草等，主要分布于云南四川等地。专利技术人在对斯赤列的提取分离过程中，意外地发现斯赤列提取物能够促进成骨细胞增殖与分化活性，具有成为治疗/预防骨质疏松药物的前景。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供斯赤列提取物在制备治疗/预防骨质疏松药物中的应用。本专利技术的目的是这样实现的：斯赤列提取物在制备治疗/预防骨质疏松药物中的应用。斯赤列提取物提高成骨细胞的增殖能力。斯赤列提取物促进碱性磷酸酯酶的形成。斯赤列提取物促进骨矿化结节的形成。斯赤列提取物使得成骨细胞分化标记基因RUNX2、BSP、OCN和COL1A1相对表达量上升。斯赤列提取物促进成骨细胞分化。斯赤列提取物通过以下方式得到：称取斯赤列样品100g，置具塞锥形瓶中，加溶剂50mL，超声提取2次，每次1h，抽滤，合并滤液减压浓缩得浸膏，所得浸膏经冷冻干燥后即得。溶剂为水、二氯甲烷、乙醇、甲醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、石油醚或正丁醇。一种药物组合物，包含斯赤列提取物作为活性成分或者是药用载体。本专利技术优点：本专利技术提供的斯赤列提取物能够有效治疗/预防骨质疏松。附图说明图1为成骨细胞的分离培养（×200）。图2为SAW-A/SAW-B对成骨细胞的毒性分析。图3为SAW-A/SAW-B对成骨细胞凋亡的影响。图4为SAW-A/SAW-B对碱性磷酸酶活性的影响（×200）。图5为SAW-A/SAW-B对成骨细胞钙化结节的影响（×200）。图6为SAW-A/SAW-B对细胞增殖的影响。图7为SAW-A/SAW-B对成骨细胞分化基因的影响。具体实施方式下面对本专利技术作进一步的说明，但不以任何方式对本专利技术加以限制，基于本专利技术所作的任何变换，均属于本专利技术的保护范围。斯赤列提取物在制备治疗/预防骨质疏松药物中的应用。斯赤列提取物提高成骨细胞的增殖能力。斯赤列提取物促进碱性磷酸酯酶的形成。斯赤列提取物促进骨矿化结节的形成。斯赤列提取物使得成骨细胞分化标记基因RUNX2、BSP、OCN和COL1A1相对表达量上升。斯赤列提取物促进成骨细胞分化。斯赤列提取物通过以下方式得到：称取斯赤列样品100g，置具塞锥形瓶中，加溶剂50mL，超声提取2次，每次1h，抽滤，合并滤液减压浓缩得浸膏，所得浸膏经冷冻干燥后即得。溶剂为水、二氯甲烷、乙醇、甲醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、石油醚或正丁醇。一种药物组合物，包含斯赤列提取物作为活性成分或者是药用载体。实施例1称取斯赤列样品100g，置具塞锥形瓶中，加水50mL，超声提取2次，每次1h，抽滤，合并滤液减压浓缩得浸膏，所得浸膏经冷冻干燥后即得斯赤列水提物（SAW-A）样品（1.5g，提取率为1.5%）。实施例2称取斯赤列样品100g，置具塞锥形瓶中，加二氯甲烷50mL，超声提取2次，每次1h，抽滤，合并滤液减压浓缩得浸膏，所得浸膏经冷冻干燥后即得斯赤列二氯甲烷提取物（SAW-B）样品（2.0g，提取率为2.0%）。上述样品置于4℃冰箱保存、备用。实施例3同实施例1，其中不同的地方是：溶剂为乙醇。实施例4同实施例1，其中不同的地方是：溶剂为甲醇。实施例5同实施例1，其中不同的地方是：溶剂为丙酮。实施例6同实施例1，其中不同的地方是：溶剂为氯仿。实施例7同实施例1，其中不同的地方是：溶剂为乙酸乙酯。实施例8同实施例1，其中不同的地方是：溶剂为石油醚。实施例9同实施例1，其中不同的地方是：溶剂为正丁醇。实施例10以实施例1和实施例2制备得到的斯赤列提取物进行试验，具体试验方法和结果如下：1.实验方法1.1大鼠成骨细胞分离与培养将新生SD大鼠用体积分数为75%乙醇浸洗，在超净操作台内解剖取出颅骨，去除其他组织后剪成1mm×1mm×1mm大小组织块，组织块放入无菌离心管中并加入0.25%胰蛋白酶在37℃下消化30min，离心弃去上清液，加入2g/mLⅡ型胶原酶在37℃下消化4h，再次离心弃去上清液，加入体积分数为10%胎牛血清和1%抗生素混合物的DMEM培养基，调整细胞浓度为5×106个/L，将细胞悬液接种于100mm培养皿，每皿接种10mL，置于37℃、体积分数为5%的CO2培养箱中培养，1d后更换培养基，弃未贴壁细胞，之后每3d换液；待细胞基本融合后，用胰酶消化，以1:2比例传代之后继续培养，选取生长良好的第3代成骨细胞进行下列实验。1.2CCK-8检测取第3代对数生长期的成骨细胞以5×103个/孔接种于96孔培养板，培养24h后更换分别含有SAW-A或SAW-B（78.125～20000µg/mL）的L-DMEM培养基干预培养，受试物干预48h后，进行CCK8检测SAW-A和SAW-B的细胞毒性。确定两受试物的最大无毒浓度后，另取成骨细胞以5×103个/孔接种于96孔细胞培养板内，各组细胞均同时设置3个复孔。分别加SAW-A和SAW-B干预24h、48h、72h后，进行CCK-8检测。酶标仪测定450nm处的OD值。1.3流式细胞仪检测取第3代对数生长期成骨细胞以2×104个/孔接种于6孔培养板，培养24h后，分别加SAW-A（312.5µg/mL）和SAW-B（156.15µg/mL）干预培养6d，消化细胞，PBS洗3遍，将爬片置入FDA/PI混合液（FDA与PI工作终浓度分别为100，400mg/L）中，避光染色5min，流式细胞仪检测细胞活性。1.本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种斯赤列提取物的应用，其特征在于所述的斯赤列提取物在制备治疗/预防骨质疏松药物中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.一种斯赤列提取物的应用，其特征在于所述的斯赤列提取物在制备治疗/预防骨质疏松药物中的应用。


2.根据权利要求1所述的斯赤列提取物的应用，其特征在于所述的斯赤列提取物提高成骨细胞的增殖能力。


3.根据权利要求1所述的斯赤列提取物的应用，其特征在于所述的斯赤列提取物促进碱性磷酸酯酶的形成。


4.根据权利要求1所述的斯赤列提取物的应用，其特征在于所述的斯赤列提取物促进骨矿化结节的形成。


5.根据权利要求1所述的斯赤列提取物的应用，其特征在于所述的斯赤列提取物使得成骨细胞分化标记基因RUNX2、BSP、OCN和COL1A1相对表达量上...

【专利技术属性】
技术研发人员：王文静，王葳，李莲慧，郑梅梅，李维熙，邵立东，李大山，
申请(专利权)人：云南中医药大学，
类型：发明
国别省市：云南;53