本发明专利技术涉及一种防治番茄枯萎病的水丛毛单胞菌菌株，命名为水丛毛单胞菌Ca28，保藏日期为2020年11月9日，保藏编号：CGMCC NO.21148；本发明专利技术的水丛毛单胞菌Ca28，生产工艺简单、培养时间短、成本低，且该菌株可以通过简单、快捷低成本的制备方法获得防治番茄枯萎病的生防菌剂，经过试验证明，本发明专利技术提供的生防菌剂在温室盆栽条件下对番茄幼苗上枯萎病的防效达到了74.25％，田间条件下单独施用生防菌剂对番茄枯萎病的防效达到了48.75％，而与施用量减半的10％苯醚甲环唑联用的防效达到了81.17％，优于单独施用全量的10％苯醚甲环唑的防效(79.43％)。环唑的防效(79.43％)。
【技术实现步骤摘要】
一种防治番茄枯萎病的水丛毛单胞菌菌株、生防菌剂及其制备方法与应用
[0001]本专利技术涉及微生物应用
，具体涉及一种防治番茄枯萎病的水丛毛单胞菌菌株、生防菌剂及其制备方法与应用。
技术介绍
[0002]番茄是一种经济价值很高的蔬菜，它既可以作为水果直接食用，又可以作为蔬菜进行烹饪，受到人们普遍的喜爱。据农业部统计，2015年我国番茄的产量达到5594万吨，居亚洲首位，在世界也占据着领先地位。随着番茄在人们生活中占据的比重越来越大，为了更好满足人们的需求，设施番茄的种植面积持续增加，导致番茄受到各种病虫危害也愈发严重，尤其以土传的番茄枯萎病尤为严重。番茄枯萎病一般发病率在10％～30％，当病情较重时，植株的叶片会从下到上逐渐变黄，最后只剩植株顶部的嫩叶正常，其他的叶片全都枯萎死亡，一旦发病，将对番茄的质量和产量造成严重影响，已是制约番茄设施栽培的瓶颈问题。
[0003]番茄枯萎病的病原菌是尖孢镰刀菌番茄转化型(Fusarium oxysporum f.sp.lycopersici SnyderetHansen)，病菌多在分苗、定植时从根系伤口、自然裂口、根毛侵入，到达维管束，在维管束内繁殖，堵塞导管，阻碍植株吸水吸肥，导致叶片萎蔫、枯死。针对番茄枯萎病的防治采用高温闷棚的措施，效果并不理想，连作障碍发生依然严重；而且化学药剂的长期大量使用会污染土壤和水体等自然环境，并对人类健康构成危害，还会导致病原菌产生耐药性，从而降低防效。因此，研发高效、绿色、安全的防治番茄枯萎病的方法显得尤为重要。生物农药具备对生态环境比较安全、对非靶标生物不会产生较大影响、原材料来源广泛等特点，作为主要的新型防治方法，已被各国广泛采用。
[0004]运用生防细菌防治番茄枯萎病害已有大量报道，但目前应用于番茄枯萎病防治的生防菌主要包括芽胞杆菌Bacillus spp.和假单胞菌Pesudomonas spp.等，且大部分生防菌株在田间实际防效并不理想，因此，开发具有良好应用前景的生防菌剂是当前番茄枯萎病防治中亟待解决的问题。
技术实现思路
[0005]本专利技术的目的是为了解决以上现有技术的不足，提供一种可以防治番茄枯萎病的细菌菌株，还提供了一种包含上述细菌菌株的生防菌剂，可以很好地应用于番茄枯萎病的防治工作中。
[0006]为实现本专利技术的上述目的，采用了以下技术方案：
[0007]一种防治番茄枯萎病的水丛毛单胞菌菌株，命名为水丛毛单胞菌Ca28，保藏日期为2020年11月9日，保藏地址：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏编号：CGMCC NO.21148。
[0008]本专利技术的水丛毛单胞菌菌株为2019年在徐州市铜山区小麦根围土壤中分离得到；
[0009]分离方法：采用5点取样法取田间小麦根围土壤后分别装入灭菌的封口塑料袋中，立即带回实验室；将土样5g加入45mL无菌水中，150r/min下于摇床振荡培养1h后，使用无菌纱布过滤得悬浮液并采用10倍系列稀释法得到10
‑6倍稀释液。分别取100μL稀释液均匀涂布于NA平板上，于28℃恒温培养箱中培养48h后，挑取颜色、光泽度、大小和类型不同的单菌落，划线纯化菌株，统一编号后转入于NA斜面培养基中，用80％灭菌甘油保存，置于
‑
70℃保存备用。
[0010]平板对峙法：选取培养2d的番茄枯萎病菌菌饼(5mm)置于PDA平板中央，在距离菌饼25mm处呈三点对称的3个点打孔(直径5mm)并注入100μL供试菌株的发酵培养液，以加入100μLNB培养基为对照。28℃恒温培养48h后，观察和测量抑菌带的大小，实验重复三次，选出抑菌圈最大的菌株，即为水丛毛单胞菌Ca28。
[0011]生物学特性：革兰氏阴性菌，菌体球形，有鞭毛，无荚膜；菌落形态：圆形，菌落直径较大，表面光滑，垫状，不透明，边缘完整。
[0012]含有所述水丛毛单胞菌Ca28的生防菌剂也属于本申请要求保护的范围，制备方法为是将水丛毛单胞菌Ca28经菌体活化、种子培养、扩大培养后得到。
[0013]具体的制备方法优选包括以下步骤：将水丛毛单胞菌Ca28在NB培养基中，25～30℃、150～200rpm振荡培养12～24h，获得种子液；将种子液以1％的接种量接种于基础盐培养基，于25～30℃、150～200rpm振荡培养，获得活菌总浓度为1
×
108～1
×
109CFU/mL的生防菌剂成品。
[0014]本专利技术还提供了一种上述水丛毛单胞菌菌株或生防菌剂在防治番茄枯萎病中的应用。
[0015]具体方法为：在使用前，将制得的生防菌剂稀释至1
×
107CFU/mL，叶面喷施或灌根处理。
[0016]本专利技术的有益效果如下：
[0017](1)生防菌剂中含有抑制番茄枯萎病病原菌生长的专一性菌株水丛毛单胞菌Ca28，其抑菌效果非常明显，经过试验证明，本专利技术提供的生防菌剂在温室盆栽条件下对番茄幼苗上枯萎病的防效达到了74.25％，田间条件下单独施用生防菌剂对番茄枯萎病的防效达到了48.75％，而与施用量减半的10％苯醚甲环唑联用的防效达到了81.17％，优于单独施用全量的10％苯醚甲环唑的防效(79.43％)。
[0018](2)本专利技术的水丛毛单胞菌Ca28，生产工艺简单、培养时间短、成本低，且该菌株可以通过简单、快捷低成本的制备方法获得防治番茄枯萎病的生防菌剂；
[0019](3)本专利技术提供的生防菌剂为微生物防治剂，无公害，不产生环境污染，可以减少甚至不用其他相应化学农药，不仅节省农民开支，还提高番茄品质；
[0020](4)经过试验证明，本专利技术提供的生防制剂，具有抗病作用，进而大幅度促进农民增收。
具体实施方式
[0021]为了加深对本专利技术的理解，下面将结合实施例对本专利技术作进一步详述，该实施例仅用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术保护范围的限定。
[0022]实施例1：水丛毛单胞菌Ca28的分离纯化与鉴定
[0023]本专利技术所涉及的防治番茄枯萎病的水丛毛单胞菌Ca28，为2019年在徐州市铜山区小麦根围土壤中分离得到；
[0024]分离方法：采用5点取样法取田间小麦根围土壤后分别装入灭菌的封口塑料袋中，立即带回实验室；将土样5g加入45mL无菌水中，于摇床150r/min振荡培养1h后，使用无菌纱布过滤得悬浮液并采用10倍系列稀释法得到10
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6倍稀释液。分别取100μL稀释液均匀涂布于NA平板上，于28℃恒温培养箱中培养48h后，挑取颜色、光泽度、大小和类型不同的单菌落，划线纯化菌株，统一编号后转入于NA斜面培养基中，用80％灭菌甘油保存，置于
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70℃保存备用。
[0025]平板对峙法：选取培养2d的番茄枯萎病菌菌饼(5mm)置于PDA平板中央，在距离菌饼25mm处呈三点对称的3个点打孔(直径5mm)并注入100μL供试菌株本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种防治番茄枯萎病的水丛毛单胞菌菌株，其特征在于，命名为水丛毛单胞菌Ca28，保藏日期为2020年11月9日，保藏编号：CGMCC NO.21148。2.含有权利要求1所述水丛毛单胞菌菌株的生防菌剂。3.根据权利要求2所述的生防菌剂，其特征在于，生防菌剂中活菌总浓度为1
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108～1
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109CFU/mL。4.根据权利要求2所述的生防菌剂，其特征在于，所述的生防菌剂由权利要求1所述的水丛毛单胞菌菌株经菌体活化、种子培养、扩大培养后得到。5.一种如权利要求4所述的生防菌剂的制备方法，其特征在于，包括如下步...
【专利技术属性】
技术研发人员：贾思振，韩先旭，张磊，丁浩然，牛冬冬，郭威，
申请(专利权)人：南京振旭生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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