一种检测新型冠状病毒的抗体及检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种检测新型冠状病毒的抗体及检测试剂盒。本发明专利技术还涉及编码抗体的核酸分子以及使用这些抗体进行诊断的方法。分子以及使用这些抗体进行诊断的方法。分子以及使用这些抗体进行诊断的方法。

【技术实现步骤摘要】
一种检测新型冠状病毒的抗体及检测试剂盒


[0001]本专利技术属于细胞免疫学、分子生物学领域，涉及一种检测新型冠状病毒的抗体及检测试剂盒。

技术介绍

[0002]国际病毒分类委员会将新型冠状病毒命名为SARS-CoV-2，世界卫生组织将感染此病毒引起的肺炎称为COVID-19。此病毒传染性强，传播途径广。该病毒能迅速适应人体环境，感染后在潜伏期即具有传播能力，同时还有一些无症状感染者报道，甚至在多种动物体内也检测到病毒核酸。这些因素使得对该病毒的防控变的非常复杂，而且目前没有有效治疗药物及疫苗上市。 SARS-CoV-2属于冠状病毒属，为单股正链RNA病毒，大小约30kb，与 SARS-CoV相似性为79％，与蝙蝠体内分离的冠状病毒(Coronavirus，CoV) 相似性最高约88％。SARS-CoV-2具有典型的冠状病毒特征，病毒包膜上有典型的棘突，形似日冕。核衣壳为螺旋对称型，主要结构蛋白是核衣壳蛋白 (Nucleocapsid protein,NP)，NP全长420个氨基酸。NP在病毒结构蛋白中含量最多，在宿主感染早期大量表达，且免疫原性较强，能引起宿主强烈的免疫应答。因此，NP可作为SARS-CoV-2感染血清学诊断的主要靶标抗原。
[0003]由于特异性治疗药物及有效疫苗尚未研发成功，早期诊断成为防控疫情重要的措施，早期核酸诊断及临床诊断为确诊重要依据。虽然核酸诊断速度快，受采样的质量的影响大，存在假阳性和假阴性，影响防控措施的落实。部分无症状感染者在病程晚期核酸检测也呈阴性，单凭核酸检测很容易出现漏诊。血清学诊断是检测病原感染后机体的免疫反应，持续时间长，免疫反应稳定，且免疫反应随着病程进展呈动态变化趋势。因此，血清学诊断同样也是早期诊断和感染现状评价的的重要手段。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供了抗体或其抗原结合片段，它们能特异地结合新型冠状病毒NP 蛋白。这些抗体是人源单克隆杭体。
[0005]根据本专利技术的一个方面，本专利技术提供了能与新型冠状病毒NP蛋白特异性结合的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含含有SEQ IDNO.1-3所示的序列的CDR区的重链可变区。
[0006]在本专利技术的具体实施方案中，重链可变区包含SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列。
[0007]本专利技术的抗体或其抗原结合片段进一步包含含有SEQ ID NO.5-7所示的序列的CDR区的轻链可变区。
[0008]在本专利技术的具体实施方案中，轻链可变区包含SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列。
[0009]本专利技术的抗体或其抗原结合片段可以是免疫球蛋白G(IgG)、IgM、IgE、IgA 或IgD分子，在一种优选的实施方案中，这种人源抗体是IgG。可能是IgG1、IgG2、 IgG3、或IgG4亚型。这种抗体或其抗原结合片段可以从Fab片段、F(ab
’
)2片段、 Fv片段、单链抗体或嵌合抗体衍生而来。
[0010]在一些实施方案中，本专利技术的抗体或其抗原结合片段可以作为融合蛋白的一部分。
[0011]根据本专利技术的另一个方面，本专利技术提供了包含前面所述的抗体或其抗原结合片段编码序列的多核苷酸分子，特别是提供了编码重链和轻链可变区、编码重链和轻链CDR1到CDR3连续的氨基酸序列以及编码单独CDRs的核苷酸序列。
[0012]所述核酸分子包括SEQ ID NO.17和18所示的序列。
[0013]根据本专利技术的又一个方面，本专利技术提供了一种表达载体，其包含前面所述的多核苷酸分子。
[0014]进一步，所述表达载体还包含与前面所述的多核苷酸分子可操作性连接的表达控制序列。
[0015]根据本专利技术的又一个方面，本专利技术提供了一种宿主细胞，其被前面所述的多核苷酸分子或前面所述的表达载体所转化。
[0016]根据本专利技术的又一个方面，本专利技术提供了一种组合物，所述组合物可以是经过标记的或衍生的前面所述的抗体或其抗原结合片段。在一种实施方案中，这种抗体或其抗原结合片段是经过放射性标记物、酶标记物、毒素、滋性物质或药物偶联物的标记。在另一种实施方案中，这种抗体或其抗原结合片段经过衍生以提高其一种或多种特性，比如半衰期、生物利用度或活性。在一种优选的实施方案中，这种抗体或其抗原结合片段用聚乙二醇，至少1个甲基或乙基或至少一个糖链衍生。在另一种优选的实施方案中，经过标记或衍生的抗体或其抗原结合片段被用于诊断或治疗方法。
[0017]所述组合物可以是几种抗体的组合，所述组合除了包含前面所述的抗体或其抗原结合片段之外，还包含其他一种或几种抗体或其抗原结合片段。作为其他抗体的实例，本专利技术的组合物还包含第二种抗体或其抗原结合片段，所述第二种抗体或其抗原结合片段包含重链可变区CDR1、重链可变区CDR2、重链可变区 CDR3、轻链可变区CDR1、轻链可变区CDR2、轻链可变区CDR3；其中，
[0018]重链可变区CDR1含有SEQ ID NO.9所示的氨基酸序列；
[0019]重链可变区CDR2含有SEQ ID NO.10所示的氨基酸序列；
[0020]重链可变区CDR3含有SEQ ID NO.11所示的氨基酸序列；
[0021]轻链可变区CDR1含有SEQ ID NO.13所示的氨基酸序列；
[0022]轻链可变区CDR2含有SEQ ID NO.14所示的氨基酸序列；
[0023]轻链可变区CDR3含有SEQ ID NO.15所示的氨基酸序列；
[0024]优选地，所述第二种抗体包含重链可变区、轻链可变区；其中，重链可变区含有SEQ ID NO.12所示的氨基酸序列，轻链可变区含有SEQ ID NO.16所示的氨基酸序列。
[0025]根据本专利技术的又一个方面，本专利技术提供了包含前面所述的抗体或其抗原结合片段的试剂盒。
[0026]所述试剂盒还可包括前面所述的第二种抗体。
[0027]进一步，所述试剂盒还包含显色剂。试剂盒中还有诊断方法的说明书。该试剂盒可利用包含的前面所述的抗体或其抗原结合片段以检测生物样品中的新型冠状病毒。
[0028]检测方法包括常规的免疫实验，包括(不限于)ELISA、RIA、FACS、免疫组化、Westernblot或免疫沉淀等。本专利技术的抗体或其抗原结合片段可用于检测新型冠状病毒NP
LaboratoryManual Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor， N.Y.(1990)等。酶促反应和纯化技术按制造商说明书操作，有的是本领域的常规方法，有的在这里做了描述。这里使用的与分析化学、有机合成化学和药物化学相关的名词或实验操作程序都是本领域众所周知的和常用的。化学合成、化学分析、药物制剂、处方、运输和对病人的治疗均采用标准技术。
[0041]除非特别说明下列名词术语均为下述含义：
[0042]术语“免疫球蛋白”是一种四聚体分子。自然界存在的免本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.能与新型冠状病毒NP蛋白特异性结合的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO.1-3所示的序列的CDR区的重链可变区。2.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，重链可变区包含SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列。3.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其进一步包含含有SEQ ID NO.5-7所示的序列的CDR区的轻链可变区。4.如权利要求3所述的抗体或其抗原结合片段，轻链可变区包含SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列。5.一种多核苷酸分子，其编码权利要求1-4中任一项所述的抗体或其抗原结合片段；优选地，所述多核苷酸分子包括SEQ ID NO.17和18所示的序列。6.一种表达载体，其包含权利要求5所述的多核苷酸分子以及与其可操作性连接的表达控制序列。7.一种宿主细胞，其被权利要求5所述的多核苷酸分子或权利要求6所述的表达载体所转化。8.一种制备特异性结合新型冠状病毒NP蛋白的抗体或其抗原结合部分的方法，所述方法包括培养权利要求7所述的宿主细胞的步骤。9.一种组合物或试剂盒，其含有权利要求1-4中任一项所述的抗体或其抗原结合片段；优选地，所述组合物或试剂盒还包含第...

【专利技术属性】
技术研发人员：张黎，高行素，郑滨洋，潘红星，唐蓉，胡家垒，贾斯月，储凯，朱凤才，
申请(专利权)人：江苏省疾病预防控制中心江苏省公共卫生研究院，
类型：发明
国别省市：