复合微生物菌剂及其制备和在饲料添加剂中的应用制造技术

本发明专利技术涉及微生物菌种及其应用，特别是指一种提高饲料转化率，降低粪便氮磷残留的复合微生物菌剂及其制备和在饲料添加剂中的应用。本发明专利技术提供了一种由异常威克汉姆酵母、植物乳杆菌以及黑曲霉组成的复合微生物菌剂及其制备方法，本发明专利技术所制备的该微生物菌剂对畜禽具有显著的诱食及增重效果，能显著提高饲料的消化率，降低粪便中的氮磷残留，经济和生态效益均十分显著。均十分显著。

【技术实现步骤摘要】
复合微生物菌剂及其制备和在饲料添加剂中的应用


[0001]本专利技术涉及微生物菌种及其应用，特别是指一种提高饲料转化率，降低粪便氮磷残留的复合微生物菌剂及其制备和在饲料添加剂中的应用。

技术介绍

[0002]我国是畜禽养殖大国，畜禽养殖产生的大量粪污、臭气等不仅对生态环境带来了巨大压力，也会直接影响畜禽和饲养员的健康。饲料的消化和转化率低是粪便产生量大，粪尿中氮磷残留多的重要原因；粪便中残留的有机物质成为腐败菌滋生的营养来源，造成养殖场环境恶劣、动物免疫力低，最终导致养殖效益不高。因此通过源头减量，即通过提高饲料转化率，降低粪尿中的氮磷残留量是减少养殖场环境氨臭和粪尿处理压力，实现绿色养殖的首要环节。
[0003]目前，减少粪尿氮磷残留的方法主要有饲喂低蛋白饲料，添加酶制剂、活菌制剂等。低蛋白饲料大多会影响适口性、进食量，进而影响日增重；添加酶制剂有一定效果，但成本较高；微生物具有十分丰富的酶系统，饲料发酵过程中，由于微生物的代谢作用，伴随着大量的生物转化反应，降低饲料中营养抗性因子，产生微量高活性物质，可以改善动物肠道健康，提高代谢功能。活菌制剂以其具有的促消化、提高机体免疫、降低粪尿氮磷残留、抑制腐败菌滋生等特性受到人们的重视，特别是使用简单、成本低等经济性成为目前研究和应用的热点。
[0004]原农业部颁布的《饲料添加剂品种目录》中对于饲料添加剂的类别、名称及适用范围提出了明确要求。
[0005]评价饲料或饲料添加剂一般通过饲养对比试验，从饲养天数、净增重、饲料价格、生猪销售价格及耗料量上得到多个数据，如日增重、料肉比、增重成本(即钱肉比)、扣除饲料成本后的增重效益等等。通常为养殖企业普遍接受的是价格便宜、饲料转化率高、生长速度快等直观可见的评价指标，科学评价作为评价饲料或饲料添加剂性能优劣的主要技术指标应为扣除饲料成本后的收益，即扣除饲料成本后的收益越高，产品越好。
[0006]申请人检索到的
技术介绍
包括：
[0007]申请号为202011026640.1的专利文献中公开了一种饲料添加剂的制备方法及其应用，其主要技术思路是通过米曲霉孢子粉、酿酒酵母菌、干酪乳杆菌、丁酸梭菌多菌种组合异步发酵，并控制一定的发酵条件得到，发酵过程历期25
‑
30天。按照4％的添加量添加至饲料中应用于猪育肥，受试动物平均日增重596g/头/天，该文献中未对粪尿氮磷残留进行说明。
[0008]申请号为202010960093.8的专利文献中公开了一种保育猪用生物发酵饲料添加剂及其制备、使用方法，其主要技术思路是由豆粕、米糠或水稻壳粉、玉米胚芽饼或玉米胚芽粕、蔗糖糖蜜和干酪乳杆菌与酿酒酵母菌组合海藻发酵液发酵制成，饲料试验结果表明，受试动物平均日增重最低为0.500kg/头/天、最高达到0.519kg/头/天，平均日采食量最低为0.784kg/头/天、最高达到0.800kg/头/天，料肉比最高为1.587、最低达到1.522，该文献
中未对粪尿氮磷残留进行说明。

技术实现思路

[0009]本专利技术的目的之一是提供一种复合微生物菌剂。
[0010]其中含有如下固体原菌粉质量份数的原料：
[0011]异常威克汉姆酵母或含有其的发酵液 15～28；
[0012]植物乳杆菌或含有其的发酵液
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15～32；
[0013]黑曲霉或含有其的发酵液
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5～15；
[0014]所述的复合微生物菌剂中异常威克汉姆酵母活菌数＞1
×
108cfu/g，黑曲霉活菌数＞1
×
108cfu/g，植物乳杆菌活菌数＞2
×
109cfu/g；异常威克汉姆酵母的拉丁文名称为Wickerhamomyces anomalus，保藏编号为CGMCC No.20654；植物乳杆菌的拉丁文名称为lactobacillus plantarum，保藏编号为CGMCC No.20656；黑曲霉的拉丁文名称为Aspergillus niger，保藏编号为CGMCC No.3.1454。
[0015]本专利技术中的菌种——异常威克汉姆酵母是从生猪养殖粪污中分离获得的，该菌株于2020年9月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，分类命名为异常威克汉姆酵母(Wickerhamomyces anomalus)，保藏编号CGMCC No.20654，保藏机构地址位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所(简称CGMCC)。
[0016]该菌种的菌落形态及生理生化特性如下：
[0017]该菌株在在YPD培养基平皿上培养，菌落形态呈圆屋顶状，灰白色，不透明，表面平滑，边缘较整齐，粘稠；单细胞为椭圆形或纺锤形，个体大，单一或聚集分布，菌株的生理生化特征如表1，通过菌株形态学特征、生理生化特征和16S rRNA序列分析，该菌株被鉴定为异常威克汉姆酵母菌，其拉丁文名称为Wickerhamomyces anomalus。
[0018]菌株的生长特征如下：
[0019]拉丁文名称为Wickerhamomyces anomalus的异常威克汉姆酵母CGMCC No.20654，可以在20℃～40℃下生长，最适温度为28～35℃，兼性厌氧，最适的pH为6.0～6.5。整个生长周期中延迟期特别短，增殖速度快，能快速进入对数期(6～30小时)，培养30小时后进入稳定期(30～54小时)，培养到54小时后逐渐进入衰退期。
[0020]表1异常威克汉姆酵母菌(Wickerhamomyces anomalus)的生理生化实验
[0021]项目结果项目结果糖发酵 麦芽糖+葡萄糖+蔗糖+麦芽糖+乳糖
‑
蔗糖+淀粉+乳糖
‑
蜜二糖
‑
半乳糖+棉籽糖+蜜二糖
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假菌丝无棉籽糖+类淀粉化合物
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碳源同化实验 硝酸盐+阿拉伯糖
‑
气味浓郁果香味
[0022]注：“+”表示阳性或生长；
“‑”
表示不生长或阴性。
[0023]该菌株的筛选方法如下：
[0024]1、菌株的分离
[0025]将采集的样品各取10g，放入到含有灭菌玻璃珠和50ml生理盐水的三角瓶中，于30℃、160转/分钟的转速下震荡2小时，静置20分钟，取上清液1ml，用无菌水稀释成10
～4
～10
～6
等不同浓度梯度，吸取不同稀释度悬液100μl涂布在YPD琼脂培养基上，30℃培养48小时，离出酵母菌47株。
[0026]2.菌株的初筛
[0027]取10mL NH3选择性培养基装于PA瓶中，高压灭菌后注入10μL体积百分比浓度为25％的氨水，将分离得到的菌株接种至培养基，在摇床上30℃、160转/分钟培养48小时，按体积百分比为3％接种量接种至PA瓶中，于30℃、160转/分钟本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.复合微生物菌剂，其特征在于其中含有如下固体原菌粉质量份数的原料：异常威克汉姆酵母或含有其的发酵液
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15～28；植物乳杆菌或含有其的发酵液
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15～32；黑曲霉或含有其的发酵液
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5～15；所述的复合微生物菌剂中异常威克汉姆酵母活菌数＞1
×
108cfu/g，黑曲霉活菌数＞1
×
108cfu/g，植物乳杆菌活菌数＞2
×
109cfu/g；异常威克汉姆酵母的拉丁文名称为Wickerhamomyces anomalus，保藏编号为CGMCC No.20654；植物乳杆菌的拉丁文名称为lactobacillus plantarum，保藏编号为CGMCC No.20656；黑曲霉的拉丁文名称为Aspergillus niger，保藏编号为CGMCC No.3.1454。2.根据权利要求1所述的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于是将拉丁文名称为Wickerhamomyces anomalus、保藏编号为CGMCC No.20654的异常威克汉姆酵母，拉丁文名称为lactobacillus plantarum，保藏编号为CGMCC No.20656的植物乳杆菌，以及拉丁文名称为Aspergillus niger，保藏编号为CGMCC No.3.1454的黑曲霉接种于灭菌后且含有碳源、氮源及无机盐的培养基中进行通气培养制成复合微生物菌剂。3.根据权利要求2所述的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于包括如下工艺步骤：(1)分别将拉丁文名称为Wickerhamomyces anomalus、保藏编号为CGMCC No.20654的异常威克汉姆酵母，拉丁文名称为lactobacillus plant arum，保藏编号为CGMCC No.20656的...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡栋，王占武，王旭，张翠绵，彭杰丽，贾楠，马佳，
申请(专利权)人：河北省农林科学院遗传生理研究所河北省农林科学院农产品质量安全研究中心，
类型：发明
国别省市：