一种高效制备霍乱弧菌菌影的方法技术

本发明专利技术提供了一种高效制备霍乱弧菌菌影的方法，包括：在霍乱弧菌工程菌的培养过程中加入阿拉伯糖进行诱导，诱导培养1～3h后，再次加入阿拉伯糖进行二次诱导：在诱导阶段，当检测到溶氧值突然下降时，添加卡那霉素，继续培养0.5～1.5h后活菌数目为0；诱导培养4～6h后，菌影形成率达到99％以上。本发明专利技术利用二次诱导策略，缩短诱导时间，收获菌影量提高了16％以上，且内毒素含量降低至初始工艺的1/5以下，显著提高了生产效率，降低生产成本；本发明专利技术制备的霍乱弧菌菌影形态均匀、完整，活菌数目为0，无需再进行灭活处理，安全性更高。

【技术实现步骤摘要】
一种高效制备霍乱弧菌菌影的方法
本专利技术属于微生物培养
，具体涉及一种高效制备霍乱弧菌菌影的方法。
技术介绍
20世纪80年代奥地利学者LubitzW等首先研发了一种新型疫苗——菌影疫苗(VaccineofBacterialGhost)。细菌菌影(BacterialGhost，BG)是一种不含胞浆成分的完整细菌空壳，其基本原理是噬菌体PhiXl74的E蛋白能将革兰阴性菌裂解，裂解后的革兰阴性菌在细胞膜形成一个跨膜孔道结构，使菌内胞质内容物由孔道排出。这种灭活的细菌空壳作为疫苗使用其免疫原性要优于传统灭活疫苗。霍乱弧菌菌影(VibrioCholeraeGhosts，VCG)可作为递呈系统，且VCG载体本身具有佐剂的性质，可产生很好的体液和细胞免疫应答。VCG在疫苗生产中的应用，不仅能够有效刺激机体的免疫应答，抵抗病原的感染，同时能够产生免疫记忆，抵抗病原的再次感染，同时具有无需佐剂、无致病性、安全性好、能够长时间稳定存在、可作为载体构建多价重组疫苗等优点。在我们之前的研究(CN109355221B)中，通过培养基组分筛选、诱导时间本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高效制备霍乱弧菌菌影的方法，其特征在于，包括如下步骤：/nS1、挑取霍乱弧菌工程菌株的单菌落，接种至种子培养基中，培养8～14h，获得霍乱弧菌种子液；/nS2、将霍乱弧菌种子液接种至发酵培养基中，培养至菌液的吸光度值在600nm为4.5～5.5时，加入阿拉伯糖进行诱导；/nS3、诱导培养1～3h后，再次加入阿拉伯糖进行二次诱导；/nS4、在诱导阶段，当检测到溶氧值突然下降时，添加卡那霉素，继续培养0.5～1.5h后活菌数目为0；/nS5、诱导培养4～6h后，菌影形成率达到99％以上。/n

【技术特征摘要】
1.一种高效制备霍乱弧菌菌影的方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、挑取霍乱弧菌工程菌株的单菌落，接种至种子培养基中，培养8～14h，获得霍乱弧菌种子液；
S2、将霍乱弧菌种子液接种至发酵培养基中，培养至菌液的吸光度值在600nm为4.5～5.5时，加入阿拉伯糖进行诱导；
S3、诱导培养1～3h后，再次加入阿拉伯糖进行二次诱导；
S4、在诱导阶段，当检测到溶氧值突然下降时，添加卡那霉素，继续培养0.5～1.5h后活菌数目为0；
S5、诱导培养4～6h后，菌影形成率达到99％以上。


2.如权利要求1所述高效制备霍乱弧菌菌影的方法，其特征在于，在所述诱导培养的同时，按照1.0mL/min的补加速率补加营养物质与抗生素，所述营养物质与抗生素包括：甘油5.0～8.0mL/L、酵母粉50～80g/L和氨苄霉素150～250mg/L。


3.如权利要求1所述高效制备霍乱弧菌菌影的方法，其特征在于，所述诱导阶段的pH值维持在7.30～7.50，溶氧水平控制在20～30％，温度控制在28～30℃。


4.如权利要求1所述高效制备霍乱弧菌菌影的方法，其特征在于，在步骤S2中，所述霍乱弧菌种子液的接种量按5％～10％进行。


5.如权利要求1所述高效制备霍乱弧菌菌影的方法，其特征在于，在步骤S2中，所述培养是在33～35℃、溶氧水平20～30％、pH值7.30～7.50的条件下，培养时间为5～8h；所述发酵培养基包括如下组分：葡萄糖2.0～8.0g/L、酵母粉2.0～10.0g/L、蛋白胨1.0～5.0g/L、柠檬酸1.0～2.0g/L、KCl1.0～3.0g/L、MgSO4·7H2O1.0～3.0g/L、(NH4)2SO41....

【专利技术属性】
技术研发人员：程立坤，赵修报，沈志强，赵群，张莎莎，林初文，何诚，姜忠兴，付强，李增亮，
申请(专利权)人：山东省滨州畜牧兽医研究院，山东绿都生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37