紫堇灵的对照品的制备方法技术

本发明专利技术提供一种紫堇灵的对照品的制备方法，包括第一正相色谱柱提纯工序，难溶性溶剂析出处理工序，第二正相色谱柱提纯工序。本发明专利技术的方法制备的对照品不但HPLC纯度高，而且TLC的纯度也非常高。另外，本发明专利技术获得的紫堇灵的固体对照品在水分、溶剂残留及灼烧残渣等方面的指标也非常优秀。

【技术实现步骤摘要】
紫堇灵的对照品的制备方法
本专利技术涉及一种紫堇灵的制备方法，尤其涉及能够制备可以用于TCL高纯度的紫堇灵的固体对照品的制备方法。
技术介绍
苦地丁(Corydalisbungeana)为罂粟科紫堇属植物紫堇的干燥全草，别名小鸡菜、彭式紫堇，性寒，味苦，具有清热解毒，散结消肿的功效，用于治疗时疫感冒，咽喉肿痛，疔疮肿痛，痈疽发背，痄腮丹毒，日常用地丁草煎服即可起到一定的日常保健的作用，对排除毒素，增强抵抗力均有一定的作用。作为苦地丁中药材的质量控制方法，《中华人民共和国药典》规定的其中的主要化合物紫堇灵是其指标成分。紫堇灵为苦地丁中的主要成分。紫堇灵(corynoline)，分子式为C21H21NO5，结构式如下：然而，如此重要的化合物，市场范围内几乎没有高纯度的中药对照品的贩卖，可以购买的标准品普遍的纯度97～98％左右。已经公开的紫堇灵的现有提取制备方法非常有限。郑建芳等发表的《苦地丁生物碱的化学成分》，该文献公开的方法是从苦地丁干燥全草中，粉碎后用90％乙醇加热回流提取3次，减压回收乙醇，浸膏用2％盐酸研磨，用石油醚萃取3次，回收溶剂得石油醚浸膏，盐酸液用氨水调pH至10，用氯仿反复萃取，合并氯仿液并回收氯仿得总碱。硅胶柱层析分离，石油醚.氯仿、氯仿.甲醇梯度脱，得到多种生物碱，此法是研究苦地丁生物碱种类的方法，不是紫堇灵的专有方法。张浩曾发表《紫堇灵的分离制备及抗炎活性》(中国药科大学学报,2017(6):715-720.)，介绍了使用氯仿、丙酮等毒害性较大溶剂的分离方法，但是该方法不适合放大规模。黄阁发表了《苦地丁中紫堇灵和乙酰紫堇灵的制备和HPLC测定》(中国中药杂质,2003(28):346-349)，其中提及了紫堇灵的制备方案，但是得到的产品纯度较低，不能作为对照品的制备方法。更为重要的是，紫堇灵对照品除了用于HPLC用于含量、纯度测定，在中药的质量检测过程中，还经常用于TLC的定性检测。现有的制备方法获得的紫堇灵以及市场上能够买到的标准品，虽然HPLC纯度尚可，但是用于TLC定性检测时，本身存在杂质，使得作为对照品而言的应用场景受到了很大的限制。现状是，紫堇灵已被药典列为指标成分，获得紫堇灵对照品显得十分必要。研发提供高通量、能提供高纯度、特别是高TLC的纯度紫堇灵，且适合大量制备的紫堇灵对照品制备方法是非常迫切的。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种高通量、能提供高纯度、特别是高TLC的纯度紫堇灵，且适合大量制备的紫堇灵对照品制备方法。本专利技术中，紫堇灵有时也称为分离目标物。如果并未特殊说明，本专利技术中目标物的纯度和含量的百分数，为以质量比计的含量。如果并未特殊说明，本专利技术中液体与液体含量配比的百分数，例如甲酸在乙腈水溶液中的含量配比，以体积分数计量。本专利技术通过简单高效的操作流程，能够分离得到纯度很高的紫堇灵，而且所得到的紫堇灵的TLC纯度也非常优异。本专利技术的制备分离方法依次包括以下步骤：第一正相色谱柱提纯工序，将苦地丁药材粉碎物的萃取物浓缩液上样至正相色谱柱，用包含石油醚、乙酸乙酯、三乙胺的混合溶剂洗脱去除杂质，此时石油醚：乙酸乙酯：三乙胺混合比例是3～6：0.5～2：0.05～0.2洗脱，杂质先被洗脱下来，收集后部被洗脱的目标物，浓缩得到含有目标物的粗品浓缩液。难溶性溶剂析出处理工序，将所述含有目标物的粗品浓缩液用二氯甲烷溶解，再利用二氯甲烷：甲醇1.5～0.8：1的混合溶液进行稀释，再加入对于紫堇灵而言为难溶性溶剂的溶剂，在50～60℃下将溶液进行浓缩，析出固体，抽滤，用20～40％的甲醇清洗抽滤得到的固体，得到目标物的半成品固体粉末；第二正相色谱柱提纯工序：将目标物的半成品固体粉末上样至正相色谱柱，用包含二氯甲烷、乙酸乙酯、三乙胺的混合溶剂洗脱，先以二氯甲烷：乙酸乙酯：三乙胺梯度的比例为5～6:0.7～0.9:0.1的洗脱液洗脱去除杂质，再以二氯甲烷：乙酸乙酯：三乙胺梯度的比例为5～6:1～1.1:0.1的洗脱液洗脱去除杂质；然后以二氯甲烷：乙酸乙酯：三乙胺梯度的比例为5～6:1.2～1.3:0.1的洗脱液洗脱得到含目标品的洗脱液，收集该洗脱液，浓缩，冷冻干燥，获得固体的目标物。在优选的本专利技术的制备方法中，所述苦地丁药材粉碎物的萃取物浓缩液的制备方法如下：将苦地丁药材粉碎为粉末，利用70％～95％的乙醇进行浸泡，将浸泡液过滤，浓缩得到第一原料浓缩液，将第一原料浓缩液用水溶解，利用酸性物质调整至pH至2～3，用等体积的第一有机溶剂萃取去除杂质，弃第一有机溶剂层，水层利用碱性物质调节调pH至8～9，再用等体积第二有机溶剂萃取，将第二有机溶剂萃取液浓缩得到浓缩液。在优选的本专利技术的制备方法中，难溶性溶剂析出处理工序，所述对于紫堇灵而言为难溶性溶剂的溶剂，是70～90％的甲醇、乙醇或异丙醇的水溶液，优选为75～85％的甲醇水溶液。在优选的本专利技术的制备方法中，第一正相色谱柱提纯工序中，所述溶剂清洗中使用的石油醚：乙酸乙酯：三乙胺混合比例是为4～4.5：0.5～2：0.1～0.15。在优选的本专利技术的制备方法中，难溶性溶剂析出处理工序中，将所述含有目标物的粗品浓缩液用二氯甲烷溶解，再利用二氯甲烷：甲醇1.2～0.9：1的混合溶液进行稀释，再加入75～85％的甲醇水溶液。在优选的本专利技术的制备方法中，第一正相色谱柱提纯工序中，正相色谱柱的填料为粒径为50～200目的硅胶，第二正相色谱柱提纯工序中，正相色谱柱的填料为粒径为100～300目的硅胶。在优选的本专利技术的制备方法中，第二正相色谱柱提纯工序中，先以二氯甲烷：乙酸乙酯：三乙胺梯度的比例为4～4.5:0.7～0.9:0.1的洗脱液洗脱去除杂质，再以二氯甲烷：乙酸乙酯：三乙胺梯度的比例为4～4.5:1～1.1:0.1的洗脱液洗脱去除杂质；然后以二氯甲烷：乙酸乙酯：三乙胺梯度的比例为4～4.5:1.2～1.3:0.1的洗脱液洗脱得到含目标品的洗脱液。在优选的本专利技术的制备方法中，用于调整第一原料浓缩液用水溶解的pH值的酸性物质为3～6％的盐酸，用于调整第二原料浓缩液用水溶解的pH值的碱性物质为浓氨水。在优选的本专利技术的制备方法中，苦地丁药材粉碎物的萃取物浓缩液的制备时使用的第一有机溶剂为选自苯、四氯化碳、正己烷、环己烷、庚烷、乙醚、石油醚中的一种，第二有机溶剂为选自二氯甲烷、乙酸乙酯、乙醚、氯仿中的一种。在优选的本专利技术的制备方法中，难溶性溶剂析出处理工序，在53～57℃下将溶液进行浓缩，析出固体。本专利技术还提供一种纯度为98.5％以上的紫堇灵的固体对照品，其通过权利要求1的制备方法制备得到，本专利技术的方法制备的对照品不但HPLC纯度高，而且TLC的纯度也非常高。另外，参照实施例可知，本专利技术获得的紫堇灵的固体对照品在水分、溶剂残留及灼烧残渣等方面的指标也非常优秀。本专利技术具有以下特点：1、工艺步骤少，耗时短，得率高，操作简便，易于工业化生产；2、所用的溶剂为乙醇、甲醇、石油醚、二氯甲烷及乙酸乙酯等，毒性本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种紫堇灵的对照品的制备方法，其特征在于，依次包括以下步骤：/n第一正相色谱柱提纯工序，将苦地丁药材粉碎物的萃取物浓缩液上样至正相色谱柱，用包含石油醚、乙酸乙酯、三乙胺的混合溶剂洗脱去除杂质，此时石油醚：乙酸乙酯：三乙胺混合比例是3～6：0.5～2：0.05～0.2洗脱，杂质先被洗脱下来，收集后部被洗脱的目标物，浓缩得到含有目标物的粗品浓缩液，/n难溶性溶剂析出处理工序，将所述含有目标物的粗品浓缩液用二氯甲烷溶解，再利用二氯甲烷：甲醇1.5～0.8：1的混合溶液进行稀释，再加入对于紫堇灵而言为难溶性溶剂的溶剂，在50～60℃下将溶液进行浓缩，析出固体，抽滤，用20～40％的甲醇清洗抽滤得到的固体，得到目标物的半成品固体粉末；/n第二正相色谱柱提纯工序：将目标物的半成品固体粉末上样至正相色谱柱，用包含二氯甲烷、乙酸乙酯、三乙胺的混合溶剂洗脱，先以二氯甲烷：乙酸乙酯：三乙胺梯度的比例为5～6:0.7～0.9:0.1的洗脱液洗脱去除杂质，再以二氯甲烷：乙酸乙酯：三乙胺梯度的比例为5～6:1～1.1:0.1的洗脱液洗脱去除杂质；然后以二氯甲烷：乙酸乙酯：三乙胺梯度的比例为5～6:1.2～1.3:0.1的洗脱液洗脱得到含目标品的洗脱液，收集该洗脱液，浓缩，冷冻干燥，获得固体的目标物。/n...

【技术特征摘要】
1.一种紫堇灵的对照品的制备方法，其特征在于，依次包括以下步骤：
第一正相色谱柱提纯工序，将苦地丁药材粉碎物的萃取物浓缩液上样至正相色谱柱，用包含石油醚、乙酸乙酯、三乙胺的混合溶剂洗脱去除杂质，此时石油醚：乙酸乙酯：三乙胺混合比例是3～6：0.5～2：0.05～0.2洗脱，杂质先被洗脱下来，收集后部被洗脱的目标物，浓缩得到含有目标物的粗品浓缩液，
难溶性溶剂析出处理工序，将所述含有目标物的粗品浓缩液用二氯甲烷溶解，再利用二氯甲烷：甲醇1.5～0.8：1的混合溶液进行稀释，再加入对于紫堇灵而言为难溶性溶剂的溶剂，在50～60℃下将溶液进行浓缩，析出固体，抽滤，用20～40％的甲醇清洗抽滤得到的固体，得到目标物的半成品固体粉末；
第二正相色谱柱提纯工序：将目标物的半成品固体粉末上样至正相色谱柱，用包含二氯甲烷、乙酸乙酯、三乙胺的混合溶剂洗脱，先以二氯甲烷：乙酸乙酯：三乙胺梯度的比例为5～6:0.7～0.9:0.1的洗脱液洗脱去除杂质，再以二氯甲烷：乙酸乙酯：三乙胺梯度的比例为5～6:1～1.1:0.1的洗脱液洗脱去除杂质；然后以二氯甲烷：乙酸乙酯：三乙胺梯度的比例为5～6:1.2～1.3:0.1的洗脱液洗脱得到含目标品的洗脱液，收集该洗脱液，浓缩，冷冻干燥，获得固体的目标物。


2.根据权利要求1所述的紫堇灵的对照品的制备方法，其特征在于，
所述苦地丁药材粉碎物的萃取物浓缩液的制备方法如下，
将苦地丁药材粉碎为粉末，利用70％～95％的乙醇进行浸泡，将浸泡液过滤，浓缩得到第一原料浓缩液，将第一原料浓缩液用水溶解，利用酸性物质调整至pH至2～3，用等体积的第一有机溶剂萃取去除杂质，弃第一有机溶剂层，水层利用碱性物质调节调pH至8～9，再用等体积第二有机溶剂萃取，将第二有机溶剂萃取液浓缩得到浓缩液。


3.根据权利要求1所述的紫堇灵的对照品的制备方法，其特征在于，第一正相色谱柱提纯工序中，...

【专利技术属性】
技术研发人员：李雪松，丁云，吴佳，卢宗元，钱勇，谢天培，
申请(专利权)人：上海诗丹德标准技术服务有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31