标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体的方法、试剂条及试剂盒技术

本发明专利技术涉及一种标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体的方法，标记方法包括以下步骤：（1）制备胶体金溶液；（2）将制备好的胶体金溶液调节pH值至低于最适pH值1.0～1.5；（3）一次性加入标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体，加入量低于最适标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体用量的60%～70%；（4）加入封闭剂和稳定剂，标记结束；打破安全范围，把免疫金放在一个相对不稳定但可控条件下，可明显提升产品显色强度和灵敏度，上述“相对不稳定但可控条件”指胶体金标记pH值略低于待标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体等电点，标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体用量为不饱和量，以及封闭剂和稳定剂的同时加入，最终体现在产品上显色强度明显加深，灵敏度显著提高。

【技术实现步骤摘要】
标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体的方法、试剂条及试剂盒
本专利技术属于金免疫
，具体涉及一种标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体的方法、试剂条及试剂盒。
技术介绍
金免疫技术是一种以胶体金作为标记物的免疫标记技术，胶体金是氯金酸在还原剂的作用下，形成的带负电的疏水胶溶液，该溶液由于静电作用而成为稳定的胶体状态，即为胶体金，胶体金表面带负电荷，蛋白质的正电荷基团因静电吸附力而包被到胶体金颗粒表面，此过程即为胶体金标记，也称为金免疫。免疫金的特性主要受金颗粒、标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体用量、pH值影响，最适标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体用量一般为标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体完全吸附于胶体金的最大量，最适pH值一般为接近或略高于待标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体的等电点，但最适标记状态仅能够保证免疫金的稳定性，无法在免疫层析法中明显提升产品显色强度和灵敏度。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是针对以上不足，提供一种标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体的方法，通过该方法可以提升产品显色强度和灵敏度。还提供一种标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体的试剂条，其检测灵敏度高、显色速度快，显色强度好。还提供一种标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体的试剂盒，其使用便捷、操作简单。为了解决以上技术问题，本专利技术采用的技术方案如下：一种标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体的方法，标记方法包括以下步骤：（1）制备胶体金溶液；（2）将制备好的胶体金溶液调节pH值至低于最适pH值1.0～1.5；（3）一次性加入标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体，加入量低于最适标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体用量的60%～70%；（4）加入封闭剂和稳定剂，标记结束。作为一种优化方案，步骤（3）中标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体加入时间为1s。作为一种优化方案，步骤（3）中的标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体的加入量为：每1mL胶体金溶液加入3.6~4.2µg抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体，反应时间为10min。作为一种优化方案，步骤（2）中调节pH值所用溶液为锡酸钾溶液，用锡酸钾溶液将胶体金溶液pH值调至5.5~6.0。锡酸钾溶液制备方法为称取2g锡酸钾，室温溶于100mL超纯水，用0.22μm滤膜过滤，4℃保存备用。作为一种优化方案，步骤（1）中胶体金溶液为采用柠檬酸三钠还原法制备的万分之二的纳米金。作为一种优化方案，步骤（1）中胶体金溶液的制备方法为：氯金酸溶液：将10g氯金酸溶于超纯水中，待完全溶解后定容至1000mL，4℃避光保存备用。柠檬酸三钠溶液：称取1g柠檬酸三钠，室温溶于100mL超纯水，用0.22μm滤膜过滤，4℃保存备用。将2mL氯金酸溶液和98mL超纯水加入三口烧瓶中，加热至沸腾，然后加入4.5mL柠檬酸三钠溶液，待烧瓶内液体由蓝紫色变为酒红色，反应20min，冷却后室温避光保存备用。作为一种优化方案，步骤（4）中封闭剂和稳定剂为BSA溶液和PEG20000溶液，先加入稳定剂PEG20000溶液，每100mL胶体金溶液加入1mLPEG20000溶液，再加入封闭剂BSA溶液，每100mL胶体金溶液加入1mLBSA溶液。作为一种优化方案，BSA溶液制备方法为称取10gBSA，室温溶于100mL超纯水，4℃存放，现用现配；PEG20000溶液制备方法为称取10gPEG20000，室温溶于100mL超纯水，4℃存放，现用现配。一种标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体的试剂条，试剂条制备方法如下：（1）膜的包被包膜稀释液配方：0.01MPB，pH7.4，质量百分比浓度为0.05%海藻糖，将检测线和质控线从下至上依次包被于NC膜上。（2）胶体金垫的制备制备出胶体金溶液，然后分别按常规方法和上述方法标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体；标记完成后离心，用金复溶液浓缩，均匀铺于玻璃纤维上，放烘房烘24小时成胶体金垫。（3）样品垫的处理样品垫处理液配方：0.1MPBS，pH7.4，质量百分比浓度为0.1%蔗糖，质量百分比浓度0.1%BSA，质量百分比浓度0.5%Tween-20，质量百分比浓度0.5%TritonX-100，质量百分比浓度0.1%NaN3；将处理液均匀地涂布到玻璃纤维上，放烘房烘24小时，制成样品垫。（4）试剂条的组装将吸水纸、NC膜、胶体金垫、样品垫、PVC底板按顺序组装后裁切成试纸条。一种标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体的试剂盒，试剂盒包括检测卡和样本稀释液，检测卡包括相互扣合的卡体和卡盖，卡体和卡盖之间具有上述的试纸条。本专利技术采取以上技术方案，具有以下优点：标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体的过程，是通过正负电荷的静电作用相互吸附的过程，在免疫金稳定的安全范围内，吸附到胶体金颗粒上的抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体越多，产品的显色强度和灵敏度就越高，但如果打破安全范围，把免疫金放在一个“相对不稳定但可控条件”下，可明显提升产品显色强度和灵敏度，上述“相对不稳定但可控条件”指胶体金标记pH值略低于待标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体等电点，标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体用量为不饱和量，以及封闭剂和稳定剂的同时加入，此条件会造成免疫金部分团聚但稳定可控，最终体现在产品上显色强度明显加深，灵敏度显著提高。下面结合实施例对本专利技术作进一步说明。具体实施方式下面将结合实施例对本专利技术的实施方案进行详细描述，实施例中未注明具体条件，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市场购买获得的常规产品。所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例，基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1：一种标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体的方法，标记方法包括以下步骤：（1）液体配制氯金酸溶液：将10g氯金酸溶于超纯水中，待完全溶解后定容至1000mL，4℃避光保存备用。柠檬酸三钠溶液：称取1g柠檬酸三钠，室温溶于100mL超纯水，用0.22μm滤膜过滤，4℃保存备用。锡酸钾溶液：称取2g锡酸钾，室温溶于100mL超纯水，用0.22μm滤膜过滤，4℃保存备用。BSA溶液：称取10gBSA，室温溶于100mL超纯水，4℃存放，现用现配。PEG20000溶液：称取10gPEG20000，室温溶于100mL超纯水，4℃存放，现用现配。（2）胶体金溶液制备将2mL氯金酸溶液和98mL超纯水加入三口烧瓶中，加热至沸腾，然后加入4.5mL柠檬酸三钠溶液，待烧瓶内液体由蓝紫色变为酒红色后，再反应20min，冷却后室温避光保存备用。（3）胶体金标记用锡酸钾溶液将胶本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体的方法，其特征在于：标记方法包括以下步骤：/n（1）制备胶体金溶液；/n（2）将制备好的胶体金溶液调节pH值至低于最适pH值1.0～1.5；/n（3）一次性加入标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体，加入量低于最适标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体用量的60%～70%；/n（4）加入封闭剂和稳定剂，标记结束。/n

【技术特征摘要】
1.一种标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体的方法，其特征在于：标记方法包括以下步骤：
（1）制备胶体金溶液；
（2）将制备好的胶体金溶液调节pH值至低于最适pH值1.0～1.5；
（3）一次性加入标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体，加入量低于最适标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体用量的60%～70%；
（4）加入封闭剂和稳定剂，标记结束。


2.如权利要求1的标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体的方法，其特征在于：步骤（3）中标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体加入时间为1s。


3.如权利要求1的标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体的方法，其特征在于：步骤（3）中的标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体的加入量为：
每1mL胶体金溶液加入3.6~4.2µg抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体，反应时间为10min。


4.如权利要求1-3任一项的标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体的方法，其特征在于：步骤（2）中调节pH值所用溶液为锡酸钾溶液，用锡酸钾溶液将胶体金溶液pH值调至5.5~6.0；
锡酸钾溶液制备方法为称取2g锡酸钾，室温溶于100mL超纯水，用0.22μm滤膜过滤，4℃保存备用。


5.如权利要求1-3任一项的标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体的方法，其特征在于：步骤（1）中胶体金溶液为采用柠檬酸三钠还原法制备的万分之二的纳米金。


6.如权利要求1-3任一项的标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体的方法，其特征在于：步骤（1）中胶体金溶液的制备方法为：
氯金酸溶液：将10g氯金酸溶于超纯水中，待完全溶解后定容至1000mL，4℃避光保存备用；
柠檬酸三钠溶液：称取1g柠檬酸三钠，室温溶于100mL超纯水，用0.22μm滤膜过滤，4℃保存备用；
将2mL氯金酸溶液和98mL超纯水加入三口烧瓶中，加热至沸腾，然后加入4.5mL柠檬酸三钠溶液，待烧瓶内液体由蓝紫色变为酒红色...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨帆，曲文英，郑雯雯，梁莉甜，杨明霞，
申请(专利权)人：山东康华生物医疗科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37