无标记精氨酸加压素受体细胞模型构建和配体筛选方法技术

本发明专利技术涉及一种无标记精氨酸加压素受体细胞模型构建和筛选方法，具体地说是涉及一种精氨酸加压素受体的亚型(V1a受体)，用无标记细胞动态质量重置技术在不同细胞系上进行模型建立和配体筛选。本发明专利技术所述V1a受体模型在内源性表达V1a受体的HEK293细胞系和转染的CHO‑V1a细胞系上分别构建。该方法具有接近体内真实环境、无标记、实时监测、通量高、操作简单的特点，可以筛选具有V1a受体活性的配体，包括激动剂和拮抗剂。

【技术实现步骤摘要】
无标记精氨酸加压素受体细胞模型构建和配体筛选方法
本专利技术属于药理学研究及药物筛选研究领域，具体涉及精氨酸加压素受体的亚型，即精氨酸受体1a亚型(V1a)受体的在内源细胞和转染细胞上的模型建立，本专利技术还涉及V1a受体的配体筛选方法。
技术介绍
精氨酸加压素(AVP)是由下丘脑的视上核和室旁核细胞产生的一种9肽环状激素，贮存于神经垂体，通过与精氨酸加压素受体(AVPR)作用，介导调节循环和水平衡等一系列生理作用。精氨酸加压素受体属于G蛋白偶联受体中的视紫红质A类家族，根据传导机制的不同，精氨酸加压素受体在人体内有三种亚型:V1a、V1b和V2。V1a受体主要分布于血管平滑肌细胞、血小板、肝细胞和子宫肌层，可通过与精氨酸加压素的结合，介导动脉血管收缩和血管内皮生长因子的释放。V1b受体主要分布于垂体前叶，介导促肾上腺皮质激素(ATCH)的释放。V2受体位于肾脏集合管细胞，主要参与调节集合管对水的通透性。AVPR还参与了雷诺氏综合征、痛经、早产、焦虑症、抑郁症等过程。因此，AVPR抑制剂一直是药物研究的热点。在最近的研究中，V1a受体拮抗剂对于本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种无标记精氨酸加压素受体细胞模型构建和配体筛选方法，其特征在于：/n1)由内源性表达或转染表达V1a受体的细胞作为载体，将该细胞置于光学生物传感器微孔板中进行培养，培养结束后将其放置于Epic仪器的信号检测位置，并在微孔板的孔中加入V1a受体激动剂或拮抗剂，对其进行实时响应信号的检测，获得实时响应信号，通过对实时响应信号的处理结果来表征和评判V1a受体配体的药理学特性，从而实现无标记V1a受体细胞模型构建；/n2)由内源性表达或转染表达V1a受体的细胞作为载体，将该细胞置于光学生物传感器微孔板中进行培养，培养结束后将其放置于Epic仪器的信号检测位置，并在微孔板的孔中加入待测样品，对其进...

【技术特征摘要】
1.一种无标记精氨酸加压素受体细胞模型构建和配体筛选方法，其特征在于：
1)由内源性表达或转染表达V1a受体的细胞作为载体，将该细胞置于光学生物传感器微孔板中进行培养，培养结束后将其放置于Epic仪器的信号检测位置，并在微孔板的孔中加入V1a受体激动剂或拮抗剂，对其进行实时响应信号的检测，获得实时响应信号，通过对实时响应信号的处理结果来表征和评判V1a受体配体的药理学特性，从而实现无标记V1a受体细胞模型构建；
2)由内源性表达或转染表达V1a受体的细胞作为载体，将该细胞置于光学生物传感器微孔板中进行培养，培养结束后将其放置于Epic仪器的信号检测位置，并在微孔板的孔中加入待测样品，对其进行实时响应信号的检测，获得实时响应信号，通过对实时响应信号的处理结果来表征和评判待测样品是否是V1a受体的配体，如果是V1a受体的配体，可进一步表征其药理学特性，从而实现待测样品对无标记V1a受体细胞的筛选。


2.如权利要求1所述的构建和筛选方法，其特征在于：以带有V1a受体的HEK293或带有V1a受体的CHO-V1a细胞为载体，通过光学生物传感器微孔板得到实时响应信号，通过对实时响应信号的处理来建立V1a受体模型；
具体V1a受体模型由如下方法构建得到：
A.培养带有V1a受体的HEK293或带有V1a受体的CHO-V1a细胞；
B.收获步骤A所培养的HEK293或CHO-V1a细胞，接种到Epic光学生物传感器微孔板中，置于培养箱中培养；
C.吸弃步骤B微孔板中培养细胞的培养基，加入HBSS缓冲液，置于Epic仪器上平衡孵育至细胞状态稳定(仪器检测反射波长信号变化在±5pm之间)；
D.在Epic仪器的系统上建立基线，在微孔板的不同孔内加入不同剂量的V1a受体激动剂或拮抗剂作为探针分子，继续监测细胞响应信号指定时间，记为步骤S1，得探针分子的实时响应DMR信号曲线；
E.重新在Epic仪器的系统上建立基线，在微孔板的不同孔里再次加入相同剂量的V1a受体激动剂继续监测到指定时间，记为步骤S2，得激动剂的实时响应DMR信号曲线；
F.以S1中的探针分子剂量与本身S1的DMR信号或者S2中V1a受体激动剂引起DMR响应信号的对应关系(分别作为横坐标和纵坐标)，绘制模型量效关系曲线，计算激动剂或拮抗剂在V1a受体上的药理学参数(结合强度模型EC50值和模型IC50值)，完成V1a受体模型在HEK293或CHO-V1a细胞系上的构建。


3.如权利要求1所述的构建和筛选方法，其特征在于：以带有V1a受体的HEK293或带有V1a受体的CHO-V1a细胞为载体，通过光学生物传感器微孔板得到实时响应信号，通过对实时响应信号的处理来建立V1a受体筛选系统；具体V1a受体筛选系统由如下方法构建得到：
A.培养带有V1a受体的HEK293或带有V1a受体的CHO-V1a细胞；
B.收获步骤A所培养的HEK293或CHO-V1a细胞，接种到Epic光学生物传感器微孔板中，置于培养箱中培养；
C.吸弃步骤B微孔板中培养细胞的培养基，加入HBSS缓冲液，置于Epic仪器上平衡孵育至细胞状态稳定(仪器检测反射波长信号变化在±5pm之间)；
D.在Epic仪器的系统上建立基线，在微孔板的不同孔内加入不同剂量的待测样品，继续监测细胞响应信号到指定时间，记为步骤S1，得待测样品的DMR信号曲线；
E.重新在Epic仪器的系统上建立基线，在微孔板的不同孔内加入相等的所需浓度的V1a受体激动剂继续监测至指定时间，记为步骤S2，所需浓度为激动剂在V1a受体上...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁鑫淼，曲腊腊，侯滔，刘艳芳，王纪霞，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：辽宁;21