一种大黄三味制剂检测方法技术

本发明专利技术涉及一种大黄三味制剂的检测方法，该方法包括诃子薄层色谱鉴别，大黄有效成分的HPLC含量测定方法，以及指纹图谱法。能更全面、准确检测大黄三味制剂的药效成分，更加符合蒙中药药效作用物质基础的多成分多靶点特点，利于大黄三味制剂的质量提高和标准控制。

【技术实现步骤摘要】
一种大黄三味制剂检测方法
本专利技术属于蒙中药制药技术，尤其涉及一种大黄三味制剂的检测方法。
技术介绍
大黄三味片现执行局部颁标准WS-10173(ZD-0173)-2002，是申请人的独家品种，它由大黄、诃子、碳酸氢钠等以上三味，将大黄与诃子粉碎成粗粉，加水煎煮三次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.30～1.35(50℃)的稠膏，减压干燥，粉碎成细粉，加入碳酸氢钠，混匀，制成颗粒，压制1000片，包糖衣或薄膜衣，即得。其具有蒙医：缓泻，清热。用于大便干燥，胃胀，腹痛，闭经。中医：清热通便。用于热结便秘，胃胀胃痛，呕逆吞酸。目前局部颁标准的检测方法主要包括大黄药材的鉴别，以及大黄酚和大黄素的高效液相含量测定。然而该质量检测方法仅针对其中一种中药大黄，以及大黄中仅两个单体成分。刘圆等报道大黄三味胶囊的质量标准研究，提供了诃子的定性鉴别，采用没食子酸为对照，并采用A氯仿-醋酸乙酯-甲酸(6∶4∶1)、B醋酸乙酯-甲酸-甲醇(9∶1∶0.2)两种展开剂，同时对大黄酸、大黄酚进行含量测定。然而目前的方法对大黄三味制剂的质量把控仍显不足，不能满足当前蒙中药制药水平提高的需要。王伽伯在大黄药材两种化学型蒽醌比例特点及其对金葡菌生长代谢热动力学变化的影响的报道中，表明不同品种、规格的大黄药材其所含的蒽醌单体成分的含量比例差别较大；且研究证明其不同蒽醌单体成分之间生物活性存在明显差异。因此，大黄药材质量的整体疗效优劣不仅与总蒽醌的含量有关，可能还受到蒽醌单体成分含量比例的影响。该研究还进一步报道大黄药材可根据其酸水解后大黄酸或大黄酚含量的多少，将其区分为大黄酸型和酚型2种化学类型,其中大黄酸型药材大多产于青海、西藏、川西、甘肃等传统道地产区,且报道大黄酸在多种药理作用方面以及药代动力学性质都优于大黄酚,初步认为大黄酸型药材可能是优质大黄药材。研究结果表明由于大黄药材中所含的蒽醌单体成分对其抑菌活性都有影响,特别当大黄酸和大黄酚两种成分的比例非常接近的时候,两种化学型大黄药材的抑菌活性差别较小。结果还表明大黄酸型药材的抑菌活性与总大黄酸或游离大黄酸的含量无关，推断大黄药材对金葡菌抑制作用的强弱除与化学型相关外,可能还受到其他未知特征成分的影响。因此，现有技术仍未发现检测控制大黄三味制剂中主要蒽醌成分含量比例对药效质量影响这一技术问题，也未提供有力的解决方案。另外，大黄三味制剂中主要含有大黄、诃子两种成分，詹轶雯在诃子活性成分及抑菌作用研究进展中报道，诃子对金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯氏菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌和志贺氏菌等细菌的感染具有显著的抑制作用。鞣质成分在诃子干燥果实中含量较高，约占23.6％～37％。鞣质含有多种成分，鞣花酸、诃子酸、安石榴苷均易溶于水；葡萄糖没食子鞣苷易溶于水和乙醇。诃子中的酚酸类物质多数为苯甲酸的衍生物，其中苯甲酸为醇溶性，没食子酸与莽草酸为水溶性，原儿茶酸既溶于水也溶于醇，没食子酸甲酯与没食子酸乙酯则为脂溶性。对于大黄，胡会娟在不同干燥方法对大黄9种活性成分含量的影响研究中报道，大黄主要含有蒽醌类、鞣质类、多糖类等活性成分，现代药理研究表明其具有抗病毒、抗肿瘤、抗动脉粥样硬化、抗真菌和抗过敏、抑制血管增生、促智和泻下等作用。因此，诃子、大黄中酚酸、鞣质在检测中容易存在明显的干扰，不能准确控制产品的质量。对于诃子的检测鉴别主要包括薄层层析法，CN102520111A公开了八味沉香制剂的检测方法，对诃子鉴别，以诃子为对照药材，在硅胶G薄层板上，以2-15∶1-6∶0.2-2的三氯甲烷-丙酮-甲酸为展开剂，薄层展开，喷以10％的三氯化铁溶液。CN103175907A公开了二十五味鬼臼丸质量检验方法，对诃子鉴别，以诃子为对照药材，以氯仿、甲酸、甲醇为展开剂，氯仿、甲酸、甲醇的体积比为8：1：1，展开、取出、晾干，喷以2％三氯化铁乙醇溶液。CN104833736A公开了一种二十五味珊瑚丸的一测多评快速定性与定量检测方法，对诃子鉴别，以诃子为对照药材，以体积比为5.5∶4.5∶0.5的环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点；再喷10％硫酸乙醇溶液。如上所述，由于大黄三味制剂中，大黄、诃子的活性成分存在干扰，且药物组成也存在较大差距，不适用于大黄三味制剂。因此，目前仍未有大黄三味制剂中诃子鉴别的有效方法。
技术实现思路
本申请要解决的技术问题是提供一种大黄三味制剂的检测方法，该方法能更全面、准确检测大黄三味制剂的药效成分，更加符合蒙中药药效作用物质基础的多成分多靶点特点，利于大黄三味制剂的质量提高和标准控制。为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案如下：本专利技术的大黄三味制剂的检测方法，所述大黄三味制剂由大黄、诃子、碳酸氢钠制成，其包括诃子薄层色谱鉴别，大黄有效成分的HPLC含量测定方法，以及大黄三味制剂的特征图谱方法和指纹图谱法；所述诃子薄层色谱鉴别的方法包括：供试品溶液的制备：取大黄三味制剂除去糖衣，研细后加甲醇超声提取，滤过，取续滤液作为供试品溶液，阴性对照样品溶液的制备：另取阴性对照样品，同法制成阴性对照样品溶液，对照药材溶液的制备：另取诃子对照药材，加水回流提取，离心，取上清液，蒸干，残渣，加甲醇超声提取，滤过，取续滤液作为对照药材溶液，薄层色谱法：吸取上述溶液，分别点于同一硅胶G板上，乙酸乙酯—甲酸—水为展开剂，展开，晾干，喷以2％三氯化铁-1％铁氰化钾试液，自然光下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的蓝色斑点。上述乙酸乙酯—甲酸—水体积比为(10-15)：(2-3)：(1-3)，优选(11-13)：(2-3)：(1.5-2.5)，优选12.5:2.5:2。本专利技术进一步包括大黄有效成分的HPLC含量测定方法，其包括：色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.025mol/L磷酸溶液为流动相；检测波长为424-432nm，优选428nm；柱温36-45℃，优选40℃；理论板数按大黄酚峰计算应不低于6000，所述流动相为以体积比(3.5-4.5):(0.5-1.50)的甲醇-0.025mol/L磷酸溶液，优选体积比4：1。5种对照品各自与相邻峰的分离度应不低于1.5。对照品溶液的制备：精密称取芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄素对照品、大黄酚对照品、大黄素甲醚对照品适量，加甲醇分别制成芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的溶液。对照品溶液的制备优选：精密称取芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄素对照品、大黄酚对照品、大黄素甲醚对照品适量，加甲醇分别制成每1ml含芦荟大黄素18.08μg、大黄酸4.27μg、大黄素4.60μg、大黄酚23.08μg，大黄素甲醚8.283μg的溶液。供试品溶液的制备：取大黄三味制剂除去包衣，研细，加乙醇与盐酸，称定重量，放置后超声处理，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种大黄三味制剂的检测方法，所述大黄三味制剂由大黄、诃子、碳酸氢钠制成，其特征在于：其包括诃子薄层色谱鉴别，大黄有效成分的HPLC含量测定方法，以及大黄三味制剂的特征图谱法和指纹图谱法；/n所述诃子薄层色谱鉴别的方法包括：/n供试品溶液的制备：取大黄三味制剂除去糖衣，研细后加甲醇超声提取，滤过，取续滤液作为供试品溶液，/n阴性对照样品溶液的制备：另取阴性对照样品，同法制成阴性对照样品溶液，/n对照药材溶液的制备：另取诃子对照药材，加水回流提取，离心，取上清液，蒸干，残渣，加甲醇超声提取，滤过，取续滤液作为对照药材溶液，/n薄层色谱法：吸取上述溶液，分别点于同一硅胶G板上，乙酸乙酯—甲酸—水为展开剂，展开，晾干，喷以2％三氯化铁-1％铁氰化钾试液，自然光下检视；/n供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的蓝色斑点。/n

【技术特征摘要】
1.一种大黄三味制剂的检测方法，所述大黄三味制剂由大黄、诃子、碳酸氢钠制成，其特征在于：其包括诃子薄层色谱鉴别，大黄有效成分的HPLC含量测定方法，以及大黄三味制剂的特征图谱法和指纹图谱法；
所述诃子薄层色谱鉴别的方法包括：
供试品溶液的制备：取大黄三味制剂除去糖衣，研细后加甲醇超声提取，滤过，取续滤液作为供试品溶液，
阴性对照样品溶液的制备：另取阴性对照样品，同法制成阴性对照样品溶液，
对照药材溶液的制备：另取诃子对照药材，加水回流提取，离心，取上清液，蒸干，残渣，加甲醇超声提取，滤过，取续滤液作为对照药材溶液，
薄层色谱法：吸取上述溶液，分别点于同一硅胶G板上，乙酸乙酯—甲酸—水为展开剂，展开，晾干，喷以2％三氯化铁-1％铁氰化钾试液，自然光下检视；
供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的蓝色斑点。


2.如权利要求1所述的大黄三味制剂的检测方法，其特征在于，乙酸乙酯—甲酸—水体积比为(10-15)：(2-3)：(1-3)。


3.如权利要求1所述的大黄三味制剂的检测方法，其特征在于，所述大黄有效成分的HPLC含量测定方法包括：
色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.025mol/L磷酸溶液为流动相；检测波长为424-432nm；柱温36-45℃；理论板数按大黄酚峰计算应不低于6000，
对照品溶液的制备：精密称取芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄素对照品、大黄酚对照品、大黄素甲醚对照品适量，加甲醇分别制成芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的溶液，
供试品溶液的制备：取大黄三味制剂除去包衣，研细，加乙醇与盐酸，称定重量，放置后超声处理，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液，蒸干，残渣加2.5mol/L硫酸溶解，加热回流，放冷，加三氯甲烷，加热回流30分钟，放冷，取三氯甲烷液，水液加三氯甲烷振摇提取，合并三氯甲烷液，加无水硫酸钠脱水，放置滤过，用三氯甲烷分次洗涤无水硫酸钠及滤器，洗液并入滤液中，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至量瓶中并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液；
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入高效液相色谱仪，测定含量。


4.如权利要求3所述的大黄三味制剂的检测方法，其特征在于，所述流动相为以体积比(3.5-4.5):(0.5-1.50)的甲醇-0.025mol/L磷酸溶液，优选4：1。


5.如权利要求3所述的大黄三味制剂的检测方法，其特征在于，所述大黄三味制剂的每单位制剂中含芦荟大黄素15-20μg、大黄酸19...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘卫东，王锦华，赵利军，
申请(专利权)人：内蒙古奥特奇蒙药股份有限公司，内蒙古奥特奇医药研发有限公司，乌兰浩特中蒙制药有限公司，
类型：发明
国别省市：内蒙古;15