一种单细胞测序筛选软骨细胞标记分子的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用单细胞测序筛选软骨细胞标记分子的方法，包括以下步骤：(1)分离软骨组织；(2)分离单细胞并进行裂解；(3)对样品的mRNA进行逆转录得到cDNA；(4)以cDNA为模板进行PCR扩增，产物纯化，进行Tagmentation反应，完成cDNA测序文库构建；(5)对构建的cDNA文库进行高通量测序；(6)测序结果进行生物信息学分析，寻找软骨细胞特异性的标记分子。

【技术实现步骤摘要】
一种单细胞测序筛选软骨细胞标记分子的方法
本专利技术属于生物医学领域，尤其是涉及一种利用单细胞测序筛选软骨细胞标记分子的方法。
技术介绍
骨关节炎是以关节软骨退化、软骨下骨硬化，骨赘形成并伴有关节疼痛、肿胀、畸形及活动障碍的慢性退行性关节病，且多发于膝、髓等负重关节叫。据统计全世界骨关节炎患病率约为15％，其中50岁以上老年人群的发病率达到50％，最终致残率高达53％。我国流行病调查研究发现我国40岁以上人群膝、手、颈、腰关节炎的总患病率则高达46.3％。关节功能的丧失及致残不仅严重影响老年人群的生活质量还加重家庭和社会的经济负担，有效预防该病已成为国内外重大的公共卫生问题。骨关节炎发病与衰老软骨细胞的累积导致的软骨细胞外基质合成降解平衡失调，关节软骨组织的分解退变，关节内持续病理性炎症状态密切相关。临床骨关节炎患者的关节软骨细胞常会出现衰老现象，且该现象随着关节软骨组织退变的严重程度越专利技术显。软骨细胞衰老在骨关节炎的发生发展过程中起着重要作用，因此延缓或清除衰老软骨细胞有可能抑制骨关节炎的炎性反应，保护关节软骨组织的完整性，改善骨本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种单细胞测序筛选软骨细胞标记分子的方法，其特征在于：包括以下步骤：/n1)提取软骨组织；/n2)分离单细胞并进行裂解：分离单细胞，加入裂解缓冲液中进行裂解，得到细胞裂解液；/n3)对样品的mRNA进行逆转录得到cDNA：使用美国ThermoFisher公司的SuperScript试剂盒构建逆转录体系，对上述步骤2)获得的细胞裂解液进行逆转录，得到cDNA；/n4)以cDNA为模板进行PCR扩增，构建测序文库，进行测序：使用美国Illumina公司的NexteraXT试剂盒，对上述步骤3)得到的逆转录产物进行扩增和纯化，构建高通量测序文库；完成后将文库送交测序；/n5)对测序结果进行生物信...

【技术特征摘要】
1.一种单细胞测序筛选软骨细胞标记分子的方法，其特征在于：包括以下步骤：
1)提取软骨组织；
2)分离单细胞并进行裂解：分离单细胞，加入裂解缓冲液中进行裂解，得到细胞裂解液；
3)对样品的mRNA进行逆转录得到cDNA：使用美国ThermoFisher公司的SuperScript试剂盒构建逆转录体系，对上述步骤2)获得的细胞裂解液进行逆转录，得到cDNA；
4)以cDNA为模板进行PCR扩增，构建测序文...

【专利技术属性】
技术研发人员：于腾波，陈进利，赵海波，赵夏，姜弘元，王天瑞，马金龙，孙泽文，于承浩，李天予，韩增帅，
申请(专利权)人：青岛大学附属医院，
类型：发明
国别省市：山东;37