一种原代胎盘壁蜕膜间充质干细胞的处理和培养方法技术

本发明专利技术提供了一种原代胎盘壁蜕膜间充质干细胞的处理和培养方法，其包括以下步骤：将离体的胎盘组织边缘连接的绒毛膜组织及附着于上面的组织去除，清洗掉血液和血凝块；刮取壁蜕膜组织，清洗后剪碎；加入消化酶消化；终止消化，过滤出组织和胎盘壁蜕膜间充质干细胞，加入组织保护液清洗并稀释；分离出上清液，加入红细胞裂解液，离心，去上清；加入组织保护液清洗并稀释至，加入羟乙基淀粉和谷氨酰胺，沉降，吸出上清液去除底部红细胞，离心；移除上清，重悬细胞沉淀得细胞悬液，接种培养；换液，继续培养；传代。本发明专利技术的方法操作方便，能够有效提高原代胎盘壁蜕膜间充质干细胞的纯度、存活率、数量和活性，并缩短培养时间。

【技术实现步骤摘要】
一种原代胎盘壁蜕膜间充质干细胞的处理和培养方法
本专利技术属于干细胞与再生医学领域，具体涉及一种原代胎盘壁蜕膜间充质干细胞的处理和培养方法。
技术介绍
胎盘壁蜕膜间充质干细胞(PlacentaDeciduaParietalis,PCDP)壁蜕膜作为母体组成部分之一，从中分离得到的壁蜕膜间充质干细胞可以用于母亲自身细胞的移植或冻存，具有针对性。蜕膜间充质干细胞在表型、增殖及细胞因子表达等方面与其他来源的间充质干细胞存在差别，具有独特的性质，如低免疫原性等，近年来已经引起众多科学家关注，蜕膜间充质干细胞子宫内膜重建、盆腔脏器脱垂、膀胱组织修复等组织修复具有广阔的应用前景。胎盘来源间充质干细胞与骨髓间充质干细胞相比，具有来源充足、免疫原性低、病毒污染率较低，且无社会伦理争议等方面的优点，使其具有更好的临床应用前景，较易获取。胎盘在离开人体后，通常由医护人员通过采集装置存放，并由运输人员运输至实验室进行代胎盘壁蜕膜间充质干细胞的处理和培养，且为了获取高质量的样本，需要在采集过程中避免接触污染和交叉污染，同时需要运输全程保持低温。目前现有的采集、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种原代胎盘壁蜕膜间充质干细胞的处理和培养方法，其特征在于包括以下步骤：/nS1、将离体的胎盘组织边缘连接的绒毛膜组织及附着于上面的组织去除，用组织保护液清洗掉血液和血凝块；/nS2、刮取1.3g壁蜕膜组织，清洗后剪碎；/nS3、按壁蜕膜组织与消化酶的体积比为2:5的比例加入消化酶，在37℃、150rpm的条件下震荡消化至少1小时，再按消化酶与0.05％胰酶的体积比为1:1的比例加入0.05％胰酶，在37℃、在37℃、150rpm的条件下震荡消化15min；/nS4、用含有双抗的完全培养基终止消化，将消化后的组织液通过100μm滤器过滤出组织和胎盘壁蜕膜间充质干细胞两部分，组织留在滤器上面...

【技术特征摘要】
1.一种原代胎盘壁蜕膜间充质干细胞的处理和培养方法，其特征在于包括以下步骤：
S1、将离体的胎盘组织边缘连接的绒毛膜组织及附着于上面的组织去除，用组织保护液清洗掉血液和血凝块；
S2、刮取1.3g壁蜕膜组织，清洗后剪碎；
S3、按壁蜕膜组织与消化酶的体积比为2:5的比例加入消化酶，在37℃、150rpm的条件下震荡消化至少1小时，再按消化酶与0.05％胰酶的体积比为1:1的比例加入0.05％胰酶，在37℃、在37℃、150rpm的条件下震荡消化15min；
S4、用含有双抗的完全培养基终止消化，将消化后的组织液通过100μm滤器过滤出组织和胎盘壁蜕膜间充质干细胞两部分，组织留在滤器上面，向下层的胎盘壁蜕膜间充质干细胞加入组织保护液清洗并稀释至100ml，得到稀释后的细胞培养液；
S5、向所述稀释后的细胞培养液中加入红细胞裂解液，上清液与红细胞裂解液的体积比为4:1，混匀后4℃保存1min，在1300rpm、6min条件下离心，弃上清；
S6、向离心沉淀物加入组织保护液清洗并稀释至100ml，加入1％羟乙基淀粉和谷氨酰胺，稀释后的细胞培养液与1％羟乙基淀粉的体积比为4:1，1...

【专利技术属性】
技术研发人员：何美弟，江嘉豪，刘锐，吴远武，
申请(专利权)人：广东唯泰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44