一种优化的人脂肪间充质干细胞培养体系制造技术

本发明专利技术公开了一种优化的人脂肪间充质干细胞培养体系，属于生物干细胞培养技术领域。该方法包括：(1)将脂肪组织洗涤干净，剪碎后使用I型胶原酶消化后离心弃上清，细胞沉淀重悬于含1％双抗的完全培养基，100μm细胞滤网过滤后接种于T‑175培养瓶，培养72h后更换培养液。之后每隔3天换液，细胞融合度达80％后使用0.125％胰酶消化，1∶3比例传代。(2)取传代细胞接种于培养瓶培养24h后，更换为含油酸或亚麻酸的完全培养基继续培养48‑72h。(3)检测细胞数量及活率、细胞表面抗原、细胞成脂分化能力。本发明专利技术的有益效果：所述方法能够快速诱导细胞增殖且能提高细胞成脂分化能力，因此油酸和亚麻酸可以用作添加剂制备促进人脂肪间充质干细胞增殖的培养基。

【技术实现步骤摘要】
一种优化的人脂肪间充质干细胞培养体系
本专利技术属于生物干细胞培养
，具体涉及的是人脂肪间充质干细胞培养体系的优化方法。
技术介绍
人脂肪间充质干细胞(adipose-derivedstemcells，ADSCs)是从脂肪组织中分离出的一种多潜能干细胞，能多向分化成脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞等多种类型的细胞。ADSCs是目前临床研究广泛使用的间充质干细胞，CDE受理的8个干细胞新药中就有2个脂肪干细胞，其应用价值主要表现在组织修复与重建。ADSCs可作为组织工程的种子细胞，适用于修复各种缺乏再生能力的组织，如软骨、肌肉、心肌、神经等。ADSCs的首例临床应用是用于修复人颅骨缺损。ADSCs回植体内不会产生组织配型和免疫排斥反应，无肿瘤化倾向，可避免伦理法律问题。在美容整形方面，ADSCs可用于除皱、丰胸丰唇、乳腺切除术后乳房重塑、面部缺陷修复等。ADSCs阳性表达CD44、CD73、CD105、CD90，同时阴性表达CD14、CD34、CD45，这些特异性的细胞表面抗原可用于作为区别于其他类型细胞的特征性标志物。同时，在脂肪组织发育的过程本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种优化的人脂肪间充质干细胞培养体系，包括如下步骤/n(1)人脂肪间充质干细胞分离和培养/n取志愿者皮下脂肪组织，使用2％双抗的生理盐水与脂肪组织充分混匀，400g离心7min后倒出脂肪组织，重复上述洗涤步骤数次，充分洗涤至无明显血液残留。按照1∶1体积比加入0.15％I型胶原酶溶液充分混匀后置于水浴锅中，37℃消化30min，期间每隔5min混匀一次。消化完后400g离心7min弃上层脂肪，细胞沉淀重悬于含1％双抗的完全培养基，100μm细胞滤网过滤后接种于T-175培养瓶，置于37℃、5％CO

【技术特征摘要】
1.一种优化的人脂肪间充质干细胞培养体系，包括如下步骤
(1)人脂肪间充质干细胞分离和培养
取志愿者皮下脂肪组织，使用2％双抗的生理盐水与脂肪组织充分混匀，400g离心7min后倒出脂肪组织，重复上述洗涤步骤数次，充分洗涤至无明显血液残留。按照1∶1体积比加入0.15％I型胶原酶溶液充分混匀后置于水浴锅中，37℃消化30min，期间每隔5min混匀一次。消化完后400g离心7min弃上层脂肪，细胞沉淀重悬于含1％双抗的完全培养基，100μm细胞滤网过滤后接种于T-175培养瓶，置于37℃、5％CO2培养箱中培养72h后更换不含双抗的完全培养基除去未贴壁细胞。之后每隔3天换液，细胞融合度达80％后用0.125％胰酶消化2-3min，加入3倍体积的生理盐水稀释消化液，以1∶3比例传代。
(2)脂肪干细胞的增殖培养
取...

【专利技术属性】
技术研发人员：李治寰，李锦灵，林立龙，
申请(专利权)人：东莞市恩联干细胞生物科技研究院，
类型：发明
国别省市：广东;44