本发明专利技术提供具有抗癌活性的厚壁菌门细菌(Phylum：Firmicutes)菌株及其抗癌用途，其特征在于，所述菌株的保藏编号为CGMCC No.17886，是一种新发现的与芽孢杆菌属近缘的细菌；本发明专利技术还提供了以所述菌株作为活性抗癌细菌的抗癌细菌制剂、由所述菌株产生的代谢产物、包含所述代谢产物的药物、培养所述菌株的方法以及所述制剂、代谢产物和/或药物在抗癌中的应用，实验数据显示，所述菌株能产生抗癌活性代谢产物，由于所述菌株是在人体肠道内发现，因此对于人体的副作用会很低或没有副作用，解决了目前抗癌药物副作用大，病人顺应性差等问题，有望通过调节肠道菌群的平衡达到预防/治疗癌症的目的。
【技术实现步骤摘要】
与芽孢杆菌属近缘的厚壁菌门细菌菌株及其抗癌应用
本专利技术涉及生物制药
，具体涉及一种与芽孢杆菌属近缘的厚壁菌门细菌(Phylum：Firmicutes)菌株及其在抗癌中的应用。
技术介绍
癌症，作为危害人体健康的第一因素，一直以来都是世界医学界难以攻克的难关。现代人生活方式向不良方向的改变，新增危险因素的层出不穷，这些都促进着癌症的发生与发展。传统对癌治疗手段主要包括放疗化疗等，这类手段存在的显著缺点在于癌细胞的耐药性和对身体和精神的双重摧残。即使近年来免疫疗法兴起，但仍不成熟，存在诸多未解决问题，实行起来多力不从心，因此寻找新的抗癌方法迫在眉睫。
技术实现思路
专利技术人结合对本领域近年来在本领域肠道菌群与健康关系的诸多学术成果的研究，发现肠道菌群在抗癌方面扮演重要角色。为了发掘更多有抗癌作用的细菌，提供更多更新更有效的候选抗癌方法，专利技术人通过肠道微生物群的宏基因组高通量筛查结合传统细菌学以及分子生物学和遗传学方法，分离和鉴定到具有强力抗癌活性的细菌。基于该发现，提供以下技术方案：本专利技术在第一方面提供了一种与芽孢杆菌属近缘的厚壁菌门细菌(PhylumFirmicutes)菌株，所述菌株的保藏编号为CGMCCNo.17886。作为上述菌株的另一种鉴定标准：革兰氏染色阳性，需氧或兼性厌氧，有荚膜，芽孢椭圆、卵圆、柱状或圆形；与GenBank中已发表细菌序列进行比较，其全基因组序列与枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)的基因组序列一致性最高，但有明显差异，包含SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示的两个特征性序列。本专利技术的所述菌株是一株具有高强抗癌活性的厚壁菌门(Phylum:Firmicutes)的细菌，与芽孢杆菌(Bacillus)属的细菌近缘，代号为CCPM7643(又称为天剑5号)，代表以前从未分离得到的细菌物种(species)，已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCCNo.17886，保藏日期为2019年06月03日，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，分类命名为芽孢杆菌(Bacillussp.)。CCPM7643菌株的形态特征：由于在基因组上与芽孢杆菌属的细菌近缘，因此其形态也相似，呈革兰氏染色阳性，需氧或兼性厌氧，有荚膜，芽孢椭圆、卵圆、柱状或圆形，能抗许多不良环境。菌落在琼脂培养基上的形态是扁平圆形，白略带灰色，半透明(参见图1)。CCPM7643的分子生物学特征：通过全基因组序列与GenBank中已发表细菌序列进行比较，与枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)的细菌基因组序列一致性最高，如图2进化树所示，但有明显差异，例如包含两个特征性序列(SEQIDNO.1和SEQIDNO.2)，因此CCPM7643代表以前未知的细菌新物种。CCPM7643株具有显著和强大的抗癌活性。本专利技术在第二方面提供了由本专利技术第一方面所述菌株产生的代谢产物。本专利技术在第三方面提供了一种抗癌细菌制剂，所述制剂以本专利技术第一方面所述的菌株作为活性抗癌细菌经扩大培养而得。优选地：所述的细菌制剂，是(i).所述菌株的固体培养物或液体培养物；(ii).(i)中的液体培养物经过固液分离得到的液体部分；或(iii).(ii)中的所述液体部分经过进一步提纯得到的产物。也就是说，所述制剂可以液体制剂，也可以是干粉制剂，还可以是其他适合于所述菌株在胃肠道定植的其他制剂形式。所述制剂可以用于调节胃肠道菌群平衡，或者通过调节胃肠道菌群平衡来达到抗癌的作用。所述抗癌可以是对癌症的预防、抑制或消除。所述抑制可以是减缓癌症的发展或减轻癌症的症状；所述消除可以是消除癌症的部分或全部症状，例如治愈癌症。优选地，扩大培养所用培养基是淀粉培养基；优选地，所述淀粉培养基中所采用的淀粉来自谷物，或选自由马铃薯、玉蜀黍、大豆和小米组成的组的一种或多种。本专利技术的第四方面，提供上述代谢产物或细菌制剂的制备方法，共同特征在于，包括将所述菌株接种至培养基中，在14℃至39℃环境下扩大培养的步骤。在一些优选的实施方式中，所述培养基选择液体培养基，所述代谢产物或细菌制剂通过包括如下步骤的方法制备：(1)将所述菌株在液体培养基中以100至150转/分钟(例如120转/分钟)的速度在14℃至39℃(例如15℃、20℃、25℃、30℃或35℃)培养2天至10天(例如5或8天)，获得培养菌液；(2)对所述培养菌液进行固液分离，获得作为代谢产物的液体部分。在另一些优选的实施方式中，所述固液分离采用离心方式进行，优选的是，所述离心的离心速度为8000rpm，离心时间为10分钟。在另一些优选的实施方式中，所述液体培养基为GRC001液体培养基，所述GRC001液体培养基的配方如下：淀粉20重量份，KNO31重量份，K2HPO40.5重量份，MgSO4·7H2O0.5重量份，NaCl0.5重量份，FeSO4·7H2O0.01重量份，重铬酸钾0.05重量份。在另一些优选的实施方式中，所述淀粉来自谷物；更优选的是，所述淀粉来自选自由马铃薯、玉蜀黍、大豆和小米组成的组的至少一种来源。在一些更具体的实施方式中，所述代谢产物或细菌制剂通过包括如下步骤的方法制备：(1)从经过平板培养的培养基上取单菌落到5mLGRC001液体培养基中，120转/分钟，14℃至39℃，扩增2天至10天后，得到待扩大培养菌液；(2)将5mL待扩大培养菌液转移至100mLGRC001液体培养基中，120转/分钟，14℃至39℃，扩增2天至10天，得到扩大培养菌液；(3)将扩大培养菌液离心(例如8000rpm，离心10min)，取上清液作为代谢产物。本专利技术在第五方面提供了一种抗癌药物，其特征在于，所述抗癌药物包含本专利技术第二方面所述的代谢产物或第三方面提供的细菌制剂。本专利技术在第六方面提供了本专利技术第一方面所述菌株、本专利技术第二方面所述的代谢产物，本专利技术第三方面所述的细菌制剂、本专利技术第五方面所述的药物在抗癌中的应用。在一些优选的实施方式中，所述癌选自由肺癌、肝癌、乳腺癌、子宫颈癌、卵巢癌、结直肠癌和白血病组成的组，更优选为卵巢癌。本专利技术在第七方面提供了本专利技术第一方面所述菌株的培养方法，所述培养方法采用GRC001固体培养基进行。优选的是，所述GRC001固体培养基由如下配方制得：淀粉20重量份，KNO31重量份，K2HPO40.5重量份，MgSO4·7H2O0.5重量份，NaCl0.5重量份，FeSO4·7H2O0.01重量份，重铬酸钾0.05重量份，琼脂20重量份。在一些优选的实施方式中，所述淀粉来自谷物。更优选的是，所述淀粉来自选自由马铃薯、玉蜀黍、大豆和小米组成的组的至少一种来源。本专利技术在第八方面提供了本专利技术第一方面所述菌株的扩大培养方法，所述扩大培养方法采用GRC001液体培养基进行。优选的是，所述GRC001液体培养基由如下配方制得：淀粉20重量份，KNO31重量份，K2H本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种与芽孢杆菌属近缘的厚壁菌门细菌(Phylum：Firmicutes)菌株，其特征在于，所述菌株的保藏编号为CGMCC No.17886。/n
【技术特征摘要】
20200811 CN 20201080444651.一种与芽孢杆菌属近缘的厚壁菌门细菌(Phylum：Firmicutes)菌株，其特征在于，所述菌株的保藏编号为CGMCCNo.17886。
2.一种与芽孢杆菌属近缘的厚壁菌门细菌(Phylum：Firmicutes)菌株，其特征在于，革兰氏染色呈阳性，需氧或兼性厌氧，有荚膜，芽孢椭圆、卵圆、柱状或圆形；与GenBank中已发表细菌序列进行比较，其全基因组序列与枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)的基因组序列一致性最高，但有明显差异，包含SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示的两个特征性序列。
3.由权利要求1或2所述菌株产生的代谢产物。
4.一种抗癌细菌制剂，其特征在于，所述制剂权利要求1或2所述的菌株经扩大培养而得。
5.根据权利要求4所述的细菌制剂，其特征在于，是
(i).所述菌株的固体培养物或液体培养物；
(ii).(i)中的液体培养物经过固液分离得到的液体部分；或
(iii).(ii)中的所述液体部分经过进一步提纯得到的产物。
6.根据权利要求4或5所述的细菌制剂，其特征在于，所述培养基是淀粉培养基；优选地，所述淀粉培养基中所采用的淀粉来自谷物，或选自由马铃薯、玉蜀黍、大豆和小米组成的组的一种或多种。
7.权利要求3所述的代谢产物或权利要求4-6任一所述的细菌制剂的制备方法，其特征在于，包括将所述菌株接种至培养基中，在14℃至39℃环境下扩大培养。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述培养基是液体培养基，包括以下步骤：
(1)将所述菌株接种至液体培养基中，并以10...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘树林，
申请(专利权)人：刘树林，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23
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