一种兽用维生素ADE注射液中维生素含量检测方法技术

本发明专利技术公开了一种兽用维生素ADE注射液中维生素含量检测方法，包括如下步骤：精确称量一定量的待测量兽用维生素ADE注射液，用无水乙醇稀释后，再用微孔滤膜过滤，制成供试品溶液；精确称取适量的维生素A棕榈酸酯对照品、维生素D

【技术实现步骤摘要】
一种兽用维生素ADE注射液中维生素含量检测方法
本专利技术属于药物分析
，特别涉及一种兽用维生素ADE注射液中维生素含量检测方法。
技术介绍
维生素A作为组成视紫红质素的物质、骨骼发育所必需的营养物、机体皮肤和黏膜上皮细胞正常结构与功能的维持物质，缺乏后会引起视觉、生长发育、呼吸、消化和繁殖力的紊乱。维生素D3主要调节体内钙磷代谢，对维持钙磷平衡、骨骼发育、肌肉神经传导效应以及细胞活动信息传递等生命过程具有重要意义，缺乏后会出现佝偻病、骨质软化等症状。维生素E具有保护脂质中的多不饱和脂肪酸免受氧化损伤、促进垂体促性腺激素分泌、稳定细胞膜和改善脂质代谢等作用，缺乏后会出现免疫力下降、代谢失常、溶血、机体衰老、流产、胚胎发育异常和死胎等症状。迄今为止，维生素ADE注射液主要用于预防及治疗维生素ADE的缺乏症。目前，测定维生素ADE注射液中的脂溶性维生素A、维生素D3和维生素E的方法主要有分光光度法和HPLC法；其中，分光光度法是通过测定吸收度而确定样品含量，因样品中的辅料会对吸收度造成干扰而影响含量检测，须经过皂化和提取等预处理过程后再进行检测；传统的HPLC法具有灵敏度高、操作简单和重现性好等特点，但是样品同样需经过繁琐的预处理过程后，方能进行含量检测。
技术实现思路
为解决上述技术问题，本专利技术的目的在于提供一种兽用维生素ADE注射液中维生素含量检测方法，该方法专属性和针对性强，稳定性高，能有效分离维生素A、维生素D3和维生素E，并对其含量进行测定，且操作简单，测量结果较精准。r>为实现上述技术目的，达到上述技术效果，本专利技术通过以下技术方案实现：一种兽用维生素ADE注射液中维生素含量检测方法，包括如下步骤：(1)配制供试品溶液精确称量一定量的待测量兽用维生素ADE注射液，用无水乙醇稀释后，再用微孔滤膜过滤，制成供试品溶液；(2)配制对照品溶液精确称取适量的维生素A棕榈酸酯对照品、维生素D3对照品和维生素E乙酸酯对照品，用无水乙醇配制成对照品溶液；(3)高效液相色谱检测以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A，以乙腈-乙醇-水为流动相B，分别取对照品溶液和供试品溶液注入液相色谱仪进行梯度洗脱，并记录色谱图；(4)维生素含量计算根据步骤(3)得到的色谱图，并按照计算公式(1)计算维生素含量，式中，AX为供试品溶液中相应维生素的峰面积，AR为对照品溶液中相应维生素的峰面积，CX为供试品溶液中相应维生素浓度，CR为对照品溶液中相应维生素浓度，R％为对照品溶液中各相应维生素含量。进一步的，该方法还设计了维生素A定位对照液、维生素D3定位对照液、维生素E定位对照液以及不含主成分的阴性对照液。进一步的，对照品溶液中相应维生素浓度与供试品溶液中相应维生素浓度接近。进一步的，高效液相色谱检测的色谱条件为：检测波长为265nm，流动相流速为1.5ml/min，检测时间为40分钟；进样量为20μl，色谱柱的柱温为25℃。进一步的，高效液相色谱检测的色谱柱规格为150mm×4.6mm×5μm。进一步的，在流动相B中，乙腈、乙醇、水的比例为70：25：5。本专利技术的有益效果是：本专利技术的方法设计了以甲醇为流动相A，以乙腈－乙醇－水为流动相B的高效液相色谱检测系统，并通过供试品溶液和对照品溶液的配合以及特定的计算公式，进行色谱分析测定和计算，能有效分离维生素A、维生素D3和维生素E，并对其含量进行准确测定，且操作简单，测量结果较精准，专属性和针对性强，稳定性高。附图说明图1为本专利技术实施例中的维生素A定位对照液的液相色谱图。图2为本专利技术实施例中的维生素D3定位对照液的液相色谱图。图3为本专利技术实施例中的维生素E定位对照液的液相色谱图。图4为本专利技术实施例中的对照品溶液的液相色谱图。图5为本专利技术实施例中的供试品溶液的液相色谱图。具体实施方式下面将结合具体实施例对本专利技术中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例本专利技术所述含量为相对于标示量的百分含量；以下实施例采用的维生素A棕榈酸酯对照品的含量为97.6％，维生素D3对照品的含量为99.8％，维生素E乙酸酯对照品的含量为97.7％；待测量的兽用维生素ADE注射液的规格为10ml含有维生素A1000000U，维生素D3100000U，维生素E3000U。该实施例的兽用维生素ADE注射液中维生素含量检测方法，包括如下步骤：(1)配制供试品溶液精确称量1ml待测量兽用维生素ADE注射液，置100ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，再用微孔滤膜过滤，制成供试品溶液；(2)配制对照品溶液精确称取适量的维生素A棕榈酸酯对照品、维生素D3对照品和维生素E乙酸酯对照品，用无水乙醇进行配制并经过滤得到对照品溶液，每1ml对照品溶液中含有维生素A棕榈酸酯1000U、维生素D3100U、维生素E3U；(3)高效液相色谱检测采用高效液相色谱仪，色谱柱规格为150mm×4.6mm×5μm；以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A，以乙腈-乙醇-水(70：25：5)为流动相B，色谱条件：检测波长为265nm，流动相流速为1.5ml/min，检测时间为40分钟；进样量为20μl，色谱柱的柱温为25℃，分别取20μl对照品溶液、供试品溶液、阴性溶液、维生素A定位对照液、维生素D3定位对照液、维生素E定位对照液注入液相色谱仪并按照表1的参数进行梯度洗脱，同时记录色谱图；表1梯度洗脱参数其中的阴性溶液的色谱图可以用于排除阴性溶液对组分含量测定的干扰；维生素A定位对照液、维生素D3定位对照液、维生素E定位对照液用于对成分进行精确定性。维生素A定位对照液、维生素D3定位对照液、维生素E定位对照液的液相色谱图分别如图1至3所示。图4为对照品溶液的液相色谱图，且其色谱结果如表2所示。表2对照品溶液的液相色谱结果峰号保留时间峰面积理论塔板数拖尾因子USP峰宽分离度(USP)17.46511604641661.0440.463211.3697093349801.0410.6447.053312.546338470052391.1190.6931.759428.4625634656136120.995<本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种兽用维生素ADE注射液中维生素含量检测方法，其特征在于，包括如下步骤：/n(1)配制供试品溶液/n精确称量一定量的待测量兽用维生素ADE注射液，用无水乙醇稀释后，再用微孔滤膜过滤，制成供试品溶液；/n(2)配制对照品溶液/n精确称取适量的维生素A棕榈酸酯对照品、维生素D

【技术特征摘要】
1.一种兽用维生素ADE注射液中维生素含量检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)配制供试品溶液
精确称量一定量的待测量兽用维生素ADE注射液，用无水乙醇稀释后，再用微孔滤膜过滤，制成供试品溶液；
(2)配制对照品溶液
精确称取适量的维生素A棕榈酸酯对照品、维生素D3对照品和维生素E乙酸酯对照品，用无水乙醇配制成对照品溶液；
(3)高效液相色谱检测
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A，以乙腈-乙醇-水为流动相B，分别取对照品溶液和供试品溶液注入液相色谱仪进行梯度洗脱，并记录色谱图；
(4)维生素含量计算
根据步骤(3)得到的色谱图，并按照计算公式(1)计算维生素含量，



式中，AX为供试品溶液中相应维生素的峰面积，AR为对照品溶液中相应维生素的峰面积，CX为供试品溶液中相应维生素浓度，CR为对照品溶液中相应维生素浓度，R％为对照品溶液中相应维生素含量。


2.根据权利要求1所述的一种兽...

【专利技术属性】
技术研发人员：陆宏，汪华，王远兵，王金，
申请(专利权)人：苏州素仕生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32