基于DNA折纸的二分体脱氧核酶结构及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种基于DNA折纸的二分体脱氧核酶结构及其制备方法和应用，该制备方法包括：通过退火的方式形成DNA折纸结构；将脱氧核酶的二分体酶链a和酶链b嵌入到DNA折纸结构上；加入帮助链，促使二分体脱氧核酶在DNA折纸结构上成功组装；加入双标记的底物链，通过荧光信号验证二分体脱氧核酶是否有效组装；由于DNA折纸结构限域空间的作用，本发明专利技术通过将二分体脱氧核酶嵌入DNA折纸结构上，提高了帮助链和链酶a、链酶b的碰撞几率，同时也降低了杂交的能量势垒，使得二分体脱氧核酶组装在DNA折纸结构上；由于双标记报告底物可以通用，不仅有效降低了对链酶a和链酶b的DNA序列的要求，也降低了多重分析的合成成本。

【技术实现步骤摘要】
基于DNA折纸的二分体脱氧核酶结构及其制备方法和应用
本专利技术属于生物组装
，具体涉及一种基于DNA折纸的二分体脱氧核酶结构及其制备方法和应用。
技术介绍
脱氧核酶是利用体外分子进化技术合成的一种具有催化功能的单链DNA片段，具有高效的催化活性和结构识别能力。目前常用到的脱氧核酶是一条包含了底物结合区和催化核心结构区的DNA单链(如图1所示)，其工作原理是底物链(通常双标记羟基荧光素(FAM)和荧光猝灭集团(BHQ))与脱氧核酶的底物结合区通过碱基互补配对结合，催化核心结构区折叠形成具有催化活性的特定二级结构，催化底物链中RNA碱基水解断裂，释放荧光信号。在实际的应用中，检测不同的底物链，则需要根据底物链的序列重新设计脱氧核酶的底物结合区，更换不同的脱氧核酶。这样不仅增加了合成成本，而且不能实现多种底物链的同时检测。另外，在杂交形成脱氧核酶的过程中，需要克服较高的能垒，所以对序列要求高，不利于广泛应用。
技术实现思路
针对现有技术中的不足，本专利技术的首要目的是提供一种基于DNA折纸的二分体脱氧核酶结构的制备方法。即本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于DNA折纸的二分体脱氧核酶结构的制备方法，其特征在于：其包括如下步骤：/n(1)、通过退火的方式形成DNA折纸结构；/n(2)、将脱氧核酶的二分体酶链a和酶链b通过恒温孵育的方式嵌入所述DNA折纸结构上，进行电泳纯化，得到纯化后的DNA折纸-酶链a-酶链b结构；/n(3)、在所述纯化后的DNA折纸-酶链a-酶链b结构内加入帮助链，通过恒温孵育的方式，得到基于DNA折纸的二分体脱氧核酶结构。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于DNA折纸的二分体脱氧核酶结构的制备方法，其特征在于：其包括如下步骤：
(1)、通过退火的方式形成DNA折纸结构；
(2)、将脱氧核酶的二分体酶链a和酶链b通过恒温孵育的方式嵌入所述DNA折纸结构上，进行电泳纯化，得到纯化后的DNA折纸-酶链a-酶链b结构；
(3)、在所述纯化后的DNA折纸-酶链a-酶链b结构内加入帮助链，通过恒温孵育的方式，得到基于DNA折纸的二分体脱氧核酶结构。


2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，所述退火的方式为：将骨架链和订书钉链按照摩尔比1:10-1:5混合，通过退火以1℃/min的速率从95℃降至25℃。


3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，所述DNA折纸结构选自二维或三维中的一种以上。


4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(2)中，所述酶链a中的催化核心碱基序列为GGCTAGCT，所述酶链b中的催化核心碱基序列为ACAACGA。


5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(2)中，所述纯化后的DNA折纸-酶链a-酶链b结构中酶链a和酶链b之间的距离为5nm。

<...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋杰，范思思，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：上海;31