一种副猪嗜血杆菌培养基制造技术

本发明专利技术公开了一种副猪嗜血杆菌培养基。所述副猪嗜血杆菌培养基由基础培养液和辅助材料组成；辅助材料为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、酚红指示剂、林肯霉素和马血清的混合物；每L基础培养液的组成：胰蛋白胨15.0～17.0g；植物蛋白胨3.0～5.0g；氯化钠4.0～5.5g；磷酸氢二钾2.0～3.5g；葡萄糖2.0～3.5g；余量水。本发明专利技术副猪嗜血杆菌培养基中培养基成分营养丰富，非常适宜副猪嗜血杆菌的快速生长，可提高污染病料中该菌的分离率，同时在培养基中添加酚红作为指示剂，一方面不会影响副猪嗜血杆菌生长，另一方面可以指示酸碱性的改变，副猪嗜血杆菌在生长的过程中发酵葡萄糖产酸，可中和培养液中的碱，使酚红的颜色由红色变为黄色，根据酚红颜色变化可判定细菌生长情况。

【技术实现步骤摘要】
一种副猪嗜血杆菌培养基
本专利技术涉及一种副猪嗜血杆菌培养基，属于农业微生物领域。
技术介绍
副猪嗜血杆菌(Haemophilusparasuis，HPS)是革兰氏阴性小杆菌，具有多形性，菌落形态为隆起、表面光滑、半透明或灰色的针尖大小菌落，为需氧或兼性厌氧菌。HPS对营养要求苛刻，生长严格需要烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+或V因子)，分离培养困难，鉴定步骤繁琐。分离副猪嗜血杆菌可采集鼻腔、肺脏、心包积液、关节液、胸腹腔积水等病料进行分离。由于本菌十分娇嫩，在取样时如不能做到无菌操作，培养时易被污染菌所掩盖，分离几率明显下降。研究表明副猪嗜血杆菌的真实发病率可能是己有报道的10倍，因此提高副猪嗜血杆菌的分离率十分必要。目前常用的鲜血琼脂培养基、TSA(胰蛋白胨大豆琼脂)和TSB(胰蛋白胨大豆肉汤)虽然可以作为本菌的培养基，但都存在各种问题。鲜血培养基分离除菌时间较长，大概72h以后才可分离。TSA和TSB营养丰富，但培养时无法去除污染菌，鉴定过程也很复杂。临床上，迫切需要一种可以去除污染菌、结果易判定的培养基。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种副猪嗜血杆菌培养基，其能够提高副猪嗜血杆菌污染样本的分离率，结果易判定，同时解决副猪嗜血杆菌大量增殖问题。本专利技术所提供的副猪嗜血杆菌培养基，由基础培养液和辅助材料组成；所述辅助材料为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、酚红指示剂、林肯霉素和马血清的混合物。上述的副猪嗜血杆菌培养基中，所述辅助材料中，所述烟酰胺腺嘌呤二核苷酸以其水溶液的形式添加，质量浓度可为0.02～0.2％，如0.1％；所述酚红指示剂可为0.1％酚红指示剂，如取酚红0.1g，加入0.1mol/L氢氧化钠溶液2.82mL，使溶解，再加蒸馏水至100mL，分装，常温保存，备用；所述林肯霉素以其水溶液的形式添加，质量浓度可为5～15％，如10％；所述烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的水溶液、所述酚红指示剂、所述林肯霉素的水溶液与所述马血清的体积比为1：1：0.1：1～5，具体可为1：1：0.1：5。与所述基础培养液混合前，需要对所述辅助材料进行过滤除菌。上述的副猪嗜血杆菌培养基中，所述基础培养液与所述辅助材料的体积比可为可为100：5～8，具体可为100：8。上述的副猪嗜血杆菌培养基中，每L所述基础培养液的组成如下：胰蛋白胨15.0～17.0g；植物蛋白胨3.0～5.0g；氯化钠4.0～5.5g；磷酸氢二钾2.0～3.5g；葡萄糖2.0～3.5g；余量的水。具体地，每L所述基础培养液的组成为下述1)-7)中任一种：1)胰蛋白胨15.0～16.0g；植物蛋白胨4.0～5.0g；氯化钠4.0～5.5g；磷酸氢二钾2.5～3.0g；葡萄糖2.0～3.5g；余量的水；2)胰蛋白胨15.0～17.0g；植物蛋白胨3.0～4.0g；氯化钠4.0～5.0g；磷酸氢二钾2.0～3.0g；葡萄糖2.0～2.5g；余量的水；3)胰蛋白胨15.0g；植物蛋白胨5.0g；氯化钠5.0g；磷酸氢二钾3.0g；葡萄糖3.0g；余量的水；4)胰蛋白胨16.0g；植物蛋白胨3.0g；氯化钠4.0g；磷酸氢二钾2.5g；葡萄糖2.0g；余量的水；5)胰蛋白胨17.0g；植物蛋白胨4.0g；氯化钠5.0g；磷酸氢二钾2.5g；葡萄糖2.0g；余量的水；6)胰蛋白胨17.0g；植物蛋白胨4.0g；氯化钠5.0g；磷酸氢二钾2.0g；葡萄糖2.5g；余量的水；7)胰蛋白胨16.0g；植物蛋白胨4.0g；氯化钠5.5g；磷酸氢二钾3.0g；葡萄糖3.0g；余量的水。与所述辅助材料混合前，所述基础培养液于115～121℃、100～103MPa的条件下处理15～20min。本专利技术副猪嗜血杆菌培养基中的培养基成分营养丰富，非常适宜副猪嗜血杆菌的快速生长，可提高污染病料中该菌的分离率，同时在培养基中添加酚红作为指示剂，一方面酚红不会影响副猪嗜血杆菌生长，另一方面酚红可以指示酸碱性的改变，副猪嗜血杆菌在生长的过程中发酵葡萄糖产酸，可中和培养液中的碱，使酚红的颜色由红色变为黄色，根据酚红颜色变化可判定细菌生长情况。附图说明图1为采用普通培养基和本专利技术培养基培养副猪嗜血杆菌时的的生长曲线对比。具体实施方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例1、1)基础培养液的配制取胰蛋白胨15.0g，植物蛋白胨5.0g，氯化钠5.0g，磷酸氢二钾3.0g，葡萄糖3.0g，加蒸馏水至1000mL。混匀分装，在121℃高压(100MPa)灭菌15min，冷却至室温。2)辅助材料的处理烟酰胺腺嘌呤二核苷酸：取0.1g的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，用100mL去离子水溶解混匀，分装，-20℃保存备用。0.1％酚红指示剂：取酚红0.1g，加入0.1mol/L氢氧化钠溶液2.82mL，使溶解，再加蒸馏水至100mL，分装，常温保存，备用。林肯霉素：取1.0g林肯霉素，用10mL去离子水溶解，分装，-20℃保存备用。马血清：原液，分装，-20℃保存备用。将配制好的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、0.2％酚红指示剂、林肯霉素和马血清按体积比为1：1：0.1：5比例混合，用前过滤除菌。3)副猪嗜血杆菌的培养基的配制100mL基础培养液中加入无菌过滤的辅助材料8mL，混匀。分装至15mL的试管中，每管4mL。于4冰箱保存，备用。实施例2、1)基础培养液的配制取胰蛋白胨16.0g，植物蛋白胨3.0g，氯化钠4.0g，磷酸氢二钾2.5g，葡萄糖2.0g，加蒸馏水至1000mL。混匀分装，在121℃高压(101MPa)灭菌15min，冷却至室温。2)辅助材料的处理烟酰胺腺嘌呤二核苷酸：取0.1g的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，用100mL去离子水溶解混匀，分装，-20℃保存备用。0.1％酚红指示剂：取酚红0.1g，加入0.1mol/L氢氧化钠溶液2.82mL，使溶解，再加蒸馏水至100mL，分装，常温保存，备用。林肯霉素：取1.0g林肯霉素，用10mL去离子水溶解，分装，-20℃保存备用。马血清：原液，分装，-20℃保存备用。将配制好的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、0.1％酚红指示剂、林肯霉素和马血清按体积比为1：1：0.1：5比例混合，用前过滤除菌。3)副猪嗜血杆菌的培养基的配制100mL基础培养液中加入无菌过滤的辅助材料8mL，混匀。分装至15mL的试管中，每管4mL。于4冰箱保存，备用。实施例3、1)基础培养液的配制取胰蛋白胨17.0g，植物蛋白胨4.0g，氯化钠5.0g，磷酸氢二钾2.5g，葡萄糖2.0g，加蒸馏水至10本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种副猪嗜血杆菌培养基，由基础培养液和辅助材料组成；/n所述辅助材料为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、酚红指示剂、林肯霉素和马血清的混合物。/n

【技术特征摘要】
1.一种副猪嗜血杆菌培养基，由基础培养液和辅助材料组成；
所述辅助材料为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、酚红指示剂、林肯霉素和马血清的混合物。


2.根据权利要求1所述的副猪嗜血杆菌培养基，其特征在于：所述辅助材料中，所述烟酰胺腺嘌呤二核苷酸以其水溶液的形式添加；
所述酚红指示剂为0.1％酚红指示剂；
所述林肯霉素以其水溶液的形式添加。


3.根据权利要求2所述的副猪嗜血杆菌培养基，其特征在于：所述烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的水溶液、所述酚红指示剂、所述林肯霉素的水溶液与所述马血清的体积比为1：1：0.1：1～5。


4.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：任国鑫，张庆霞，范国兵，李县斌，周振成，李恒永，冷锋，
申请(专利权)人：北京信得威特科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11